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为深入挖掘中国水仙转录组中萜类合成相关基因,了解中国水仙萜类代谢途径和分子调控机制,该研究以‘云香’水仙为材料,在其盛花期花瓣与副冠转录组测序的基础上,筛选已注释的萜类合成途径基因并利用NCBI blastn进行再注释,通过对部分候选基因的表达量与生物信息分析进一步筛选出代表基因,采用RT PCR技术克隆了水仙异戊烯基焦磷酸异构酶基因NaIDI,并对其蛋白序列与特异性表达进行分析。结果表明:(1)Blast比对筛选得到52 个与萜类合成上游途径相关的Unigenes,二次筛选获得11个显著差异表达的代表基因。(2)NaIDI基因开放阅读框(ORF)长度为858 bp,编码285个氨基酸,其氨基酸序列与‘金盏银台’水仙相似度97.19%;亚细胞定位预测显示该基因定位在叶绿体;系统进化分析表明其与芦笋亲缘关系比较近。(3)实时荧光定量分析结果表明,NaIDI基因在水仙开花的不同时期和不同组织器官中差异表达显著,且在盛花期时副冠中的表达量最高,与中国水仙挥发性萜类化合物在开花不同时期和不同组织器官中的表达规律一致,表明NaIDI在萜类代谢中发挥着一定作用。 相似文献
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免疫组织化学技术在判断肿瘤细胞来源、分类及鉴别诊断中应用十分广泛。网状纤维作为细胞外间质成分,存在于人体各组织器官中,通过网状纤维染色观察网状纤维在肿瘤组织中的形态变化是肿瘤鉴别诊断中又一重要参与依据。应用免疫组织化学方法和网状纤维染色,对一些不同类... 相似文献
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为明确WRKY转录因子在‘云香’水仙中的功能,该研究以‘云香’水仙为材料,克隆了WRKY基因,命名为NtWRKYY1(GenBank登录号为KX056495)。序列分析显示,NtWRKYY1基因开放阅读框(ORF)长度为510bp,编码169个氨基酸。多序列比对和系统进化树分析显示,NtWRKYY1编码蛋白含1个WRKY结构域和C2H2锌指结构(Cx4Cx23HxH),与AtWRKY57聚在一起,属于第Ⅱc类WRKY转录因子。组织表达和时空表达分析显示,NtWRKYY1基因在花中表达量高于根和叶,且在花瓣及副冠中的表达量随开花过程(花蕾期、始花期、盛花期、衰败期)呈上升趋势。植物激素和非生物胁迫分析显示,NtWRKYY1基因受脱落酸(ABA)、高温、干旱和盐诱导,受茉莉酸甲酯(JA)抑制,表明NtWRKYY1基因可能在‘云香’水仙花朵的衰老过程中起正调节作用,同时参与‘云香’水仙ABA、JA等激素信号转导及高温、干旱、盐碱等非生物胁迫过程的调控。利用In-Fusion克隆技术成功构建过表达载体pMDC140-NtWRKYY1,并采用农杆菌介导叶盘法转化烟草。RT-PCR和GUS染色结果显示,目的基因已成功导入烟草基因组中。 相似文献
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MALLORY磷钨酸苏木精染色及其应用 总被引:1,自引:0,他引:1
在显示心肌、骨骼肌的肌纤维主要结构及病变时 ,Mallory磷钨酸苏木精 (phoshangstic acidHematoxylin,PTAH)染色是常用的一种结缔组织染色法 ,此法不但能清晰地显示正常肌纤维的横纹 ,同时还能显示其它多种组织成分 ,特别在尸检工作中应用较普遍。1 .PTAH染色机制在 PTAH染液中只含苏木精一种染色剂 ,在磷钨酸参与下 ,经氧化成熟后能将不同组织及正常与异常部分染成蓝色和棕红色两种不同的颜色。Mallory在最初并未阐明 PTAH染色反应原理 ,但其方法仍符合现代组织化学的基本理论。PTA酸根基团中存在着许多空间 ,而这些空间和分子对… 相似文献
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骨巨细胞瘤的免疫组织化学特征及其与组织发生和病理分级的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
应用免疫组织化学技术, 对32 例骨巨细胞瘤 (GCT) 进行了8 种抗体标记检测。结果显示: 32例骨巨细胞瘤中,多核巨细胞和单核基质细胞CD68 均为阳性反应,α1 抗胰糜蛋白酶和溶菌酶两种抗体的阳性反应均较弱; 所有病例第Ⅷ因子相关抗原、上皮膜抗原和细胞角蛋白标记在瘤细胞中无阳性表达; 全部病例单核基质细胞波形蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA) 均为阳性反应, 而多核巨细胞几乎都为阴性反应; PCNA增殖指数在骨巨细胞瘤虽随Jaffe 病理分级增高而呈递增趋势, Ⅰ级骨巨细胞瘤的PCNA增殖指数与Ⅱ级和Ⅲ级之间的PCNA增殖指数有显著性差异(P< 001), 但Ⅱ级与Ⅲ级之间无显著性差异(P> 005), 各级相互之间有交叉重叠现象。本文结果提示,骨巨细胞瘤可能起源于骨髓干细胞,并向成纤维细胞和单核巨噬细胞分化;Jaffe病理分级与免疫组化的表达不完全一致,但PCNA 增殖指数对判断骨巨细胞瘤细胞增殖活性和肿瘤的预后有重要的参考意义。 相似文献
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建立一种用乙酰化衍生处理低聚糖并用毛细管气相色谱-FID进行分析的方法。以1-甲基咪唑为催化剂并以乙酸酐为乙酰化试剂,同时对植物样品中蔗糖、棉子糖和水苏糖等低聚糖乙酰化产物进行毛细管气相色谱分离和FID检测。确定了低聚糖乙酰化衍生物的毛细管气相色谱分析条件,并对低聚糖乙酰化反应条件及色谱分离条件进行了优化。结果表明,在80–1000ng·μL–1范围内线性关系良好,蔗糖、棉子糖和水苏糖的相关系数(R)分别为0.9952、0.9957和0.9877,并且精准度与回收率均较高。使用该方法对低聚糖进行乙酰化反应重现性好、所需样品材料及试剂量少且污染毒害小,能够得到理想的分离、检测和定量分析效果,适用于少量植物组织中低聚糖的定量分析。该方法在食品、医药检测和基础科学研究领域均具有广泛的适用性及参考价值。 相似文献
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建立一种用乙酰化衍生处理低聚糖并用毛细管气相色谱-FID进行分析的方法。以1-甲基咪唑为催化剂并以乙酸酐为乙酰化试剂, 同时对植物样品中蔗糖、棉子糖和水苏糖等低聚糖乙酰化产物进行毛细管气相色谱分离和FID检测。确定了低聚糖乙酰化衍生物的毛细管气相色谱分析条件, 并对低聚糖乙酰化反应条件及色谱分离条件进行了优化。结果表明, 在80–1 000 ng·μL–1范围内线性关系良好, 蔗糖、棉子糖和水苏糖的相关系数(R)分别为0.995 2、0.995 7和0.987 7, 并且精准度与回收率均较高。使用该方法对低聚糖进行乙酰化反应重现性好、所需样品材料及试剂量少且污染毒害小, 能够得到理想的分离、检测和定量分析效果, 适用于少量植物组织中低聚糖的定量分析。该方法在食品、医药检测和基础科学研究领域均具有广泛的适用性及参考价值。 相似文献
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目的评价实时荧光PCR(RT-PCR)用于检测呼吸道感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的方法学特性,为临床快速诊断呼吸道MRSA定植或感染提供可靠循证依据。方法通过RT-PCR技术对痰液标本中金黄色葡萄球菌(SA)特异性核酸酶编码基因nuc和MRSA的特异性耐药基因mec A进行定量检测,并同时以细菌培养、鉴定和MRSA耐药表型确诊实验作为参考方法,评价其灵敏度、特异度、阴阳性预测能力;用10倍梯度稀释法配制已知标准菌株菌悬液评估RT-PCR的最低检出限。结果 RT-PCR法较细菌培养法对MRSA检测的总符合率为97.5%,检测SA的敏感度为97.2%、特异度为98.2%、阳性预测值为92.1%、阴性预测值为99.4%,检测甲氧西林耐药性的敏感度为100%、特异度为97.7%、阳性预测值为85.2%、阴性预测值为100%;RT-PCR对nuc基因和mec A基因的最低检出限均为103/m L。结论RT-PCR法与细菌培养法对于检测MRSA差异无统计学意义,且灵敏度优于后者,是用于临床快速排除性筛查呼吸道感染MRSA的较佳检测方法。 相似文献