2018年甘肃省平凉市流行性乙型脑炎病毒的分子特征

为研究甘肃省2018年蚊虫携带流行性乙型脑炎病毒(简称乙脑病毒)的分子特征,2018年7月上旬在甘肃省平凉市4个县采集蚊虫标本,采用实时荧光定量RT-PCR方法开展乙脑病毒筛查;通过高通量测序方法对乙脑病毒基因扩增阳性蚊虫标本进行深度测序研究.结果显示,本次调查在4个县共采集蚊虫1800只,均为三带喙库蚊,分36批研磨和检测.定量RT-PCR结果显示10批(27.8％)蚊虫样本呈乙脑病毒基因扩增阳性.对10批样本进行高通量测序共获得59.7 M读序,其中5.3 M(8.9％)条读序能够比对到病毒基因组数据库上,经注释属于14科15属28种病毒.在其中7批样本中检出乙脑序列共1357条,基因组覆盖度为9.5％-83.1％.系统进化分析显示甘肃省2018年采集的三带喙库蚊中乙脑病毒为基因Ⅰ型.     

西藏准驼舞虻属二新种（双翅目：舞虻科）

首次报道西藏准驼舞虻属Parahybos,并记述2新种:短突准驼舞虻Parahybos breviprocerus sp.nov.和长突准驼舞虻P.longiprocerus sp.nov.。     

TNF-α刺激大鼠骨髓间充质干细胞的机制研究

目的:研究肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激大鼠骨髓间充质干细胞(marrow-derived mesenchymalstem cells,MSCs)的作用机制。方法:采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞(MNCs),于体外培养并由牛垂体提取物(PEX)诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞(MSCs)。经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,用TNF-α刺激骨髓间充质干细胞(MSCs),通过酶联免疫吸附剂测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)观察比较不同组别细胞的生长因子分泌和蛋白印迹法(western blot)来观察细胞中蛋白的变化。结果:①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞的培养成功。②无TNF-α刺激组与TNF-α刺激组比较,TNF-α刺激组的生长因子分泌显著性增加,而通过磷酸化IκB的表达量显著性增加提示NF-κB被激活(P<0.05);同时TNF-α刺激组与TNF-α+NF-κB抑制剂组比较,TNF-α+NF-κB抑制剂组的生长因子分泌显著降低,而通过磷酸化IκB的表达量显著减少提示NF-κB的活性被抑制(P<0.05)。结论:NF-κB对TNF-α刺激下的骨髓间充质干细胞分泌生长因子有关键性作用。     

围封与放牧对青藏高原草地生物量与功能群结构的影响

以青藏高原高寒草甸、高寒草原、温性荒漠草原的退化草地为基础,比较了5年围封样地与放牧样地的生物量和群落结构。结果表明:(1)围封后3类草地地上总生物量较放牧样地分别显著增加了48.1%、10.8%、34.5%;地下生物量对围封的响应与地上总生物量一致,且围封后高寒草原0~10cm土层根系生物量比例较放牧地显著下降。(2)围封显著降低了高寒草甸的根冠比,高寒草原和温性荒漠草原无显著变化。(3)与放牧地相比,围封显著增加了高寒草甸和高寒草原禾本科植物的生物量比例,高寒草甸杂类草显著降低,温性荒漠草原功能群生物量比例无显著差异。     

生物陶瓷材料对大鼠再植磨牙牙髓血运重建及VEGF的影响

摘要 目的：考察iRoot BP Plus在大鼠再植磨牙牙髓血运重建的作用及对血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的影响。方法：以60只3周龄的雄性Wistar大鼠为研究对象,随机分为3组,每组20只,分别为空白组、对照组及研究组。建立再植牙模型后,进行牙髓血运重建术,对照组采用MTA覆盖整个血凝块面,研究组使用iRoot-BP Plus,空白组不进行盖面。术后4周处死大鼠,进行影像学、免疫组化染色及VEGF基因相对表达量检测。结果：相比于空白组,对照组和研究组在影像学表现中均出现不同程度的牙根再发育,根尖增大、根尖孔变窄,感染及根尖周骨损伤范围减小,根管腔狭窄,壁增厚。其中对照组牙根尖炎症范围有一定缩小,骨组织破坏未彻底消失,根尖有异型性钙化,研究组牙根尖周炎症和骨组织破坏消失,根尖形态无明显增生及异形。相比于空白组,对照组和研究组转录因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2）和碱性成纤维细胞生长因子（base fibroblast growth factor,bFGF）表达的光密度值（mean optical density,MOD）值均显著增加,相比于对照组,研究组Nrf2和bFGF表达的MOD值显著增加（P<0.05）。与空白组相比,对照组和研究组大鼠TNF-α基因相对表达量均显著降低,VEGF基因相对表达量显著升高（P<0.05）;与对照组相比,研究组大鼠TNF-α基因相对表达量均显著降低,VEGF基因相对表达量显著升高（P<0.05）。结论：iRoot-BP Plus在大鼠再植磨牙血运重建术中有良好的治疗效果,能有效促进患牙愈合。     

DPC4／Smad4基因RNA干扰靶点设计和慢病毒载体制备

目的：DPC4／Smad4基因RNA干扰靶点的设计和RNA干扰靶点慢病毒载体制备。方法：针对DPC4／Smad4基因序列,并利用网站设计程序,依据RNA干扰序列设计的原则,设计多个RNA干扰靶点序列。根据设计经验和设计软件将其进行评估测定,选择最佳动力学参数靶点进入其后续的实验流程;生工生物合成含干扰序列的DNAoligo,具有严格的检测体系（PAGE纯化体系）,其两端含酶切位点粘端,直接连入酶切后的RNA干扰载体上。将连接好的产物转入制备好的细菌感受态细胞,并且对长出的克隆进行酶切鉴定。然后挑选出阳性克隆测序,进行测序比对后,鉴定阳性的克隆即为构建成功的目的基因RNA干扰慢病毒载体。将构建的慢病毒载体以及辅助包装载体质粒共转染到293T细胞。收获含有病毒的细胞培养上清,浓缩后进行滴度测定,并检测其感染性。另外应用荧光实时定量PCR检测在感染的293T细胞中敲减效果。结果：成功构建DPC4／Smad4shRNA的慢病毒载体LVshSmad4,并成功制备DPC4／Smad4shRNA慢病毒,三株病毒感染细胞后均具有有效的敲减效应,其中SHl最为显著。结论：DPC4／Smad4基因RNA干扰靶点的成功设计和RNA干扰靶点慢病毒制备,为以后探讨DPC4／Smad4基因与肿瘤的相关性治疗提供了实验基础。     

不同脂肪源对泥鳅稚鱼生长性能及脂肪酸组成的影响

为研究饲料不同脂肪源对泥鳅稚鱼生长性能及鱼体脂肪酸组成的影响, 实验选择初始体重为(10.002.00) mg的健康泥鳅稚鱼1500尾, 随机分为5组, 每组3个重复, 每个水箱100尾鱼, 分别投喂5种含有鱼油(FO)、大豆油(SO)、玉米油(CO)、花生油(PeO)和棕榈油(PaO)的配合饲料, 每种饲料3个重复, 饲养期为40d。结果显示, 摄食不同脂肪源饲料的泥鳅稚鱼在增重率、成活率、饲料系数等生长性能指标和体成分上没有显著差异(P0.05), 但是, 摄食FO组鱼体极性脂肪含量显著高于其他植物油组(P0.05)。鱼油组鱼体中性和极性脂肪中总n-3系脂肪酸含量和EPA+DHA含量显著高于其他植物油组(P0.05)。植物油组鱼体极性脂肪中20:4n-6含量显著高于鱼油组(P0.05), 表明泥鳅稚鱼具有将C18转换为C20的能力。研究表明, 在饲料中添加足量磷脂, 鱼油、大豆油、玉米油、花生油、棕榈油都可以用作泥鳅稚鱼期专用饲料脂肪源。     

种养系统可持续发展指数的空间格局及其演变趋势——以山东省为例

农业生产专业化、集约化背景下,种养分离越发严重,畜禽粪便排放与环境之间矛盾日益突出,农业可持续发展面临重大挑战.本研究以山东省为例,基于1999-2015年种养系统投入产出资料,利用能值的方法,定量分析了山东省域及市域种养系统可持续发展指数的空间格局及其演变趋势.结果表明:1999-2015年,山东省种养系统的可持续性减弱.可持续发展指数呈极显著下降趋势,2015年较1999年下降了22.0%;净能值产出率和环境负载率均呈极显著增加趋势,单位经济投入获得的利益显著增加,同时种养生产对环境的压力明显加大,这主要与电力、复合肥、农业机械等工业资源投入量的增加密切相关.山东省各地市种养系统可持续发展水平具有差异.大部分地市种养系统的可持续发展指数较高,而沿海地区(威海、烟台)和工业城市(淄博)则较低.同时,各地市种养系统的可持续发展态势也具有差异.鲁中和鲁南地区可持续性逐年减弱,鲁北地区可持续性逐年增强.以2015年为本底数据进行情景分析,发现种养高度结合(100%粪便有机肥替代化肥)情景的可持续发展指数可达8.4,是种养结合现状(30%粪便有机肥替代化肥)的2.6倍.     

鲤春病毒血症病毒G蛋白的研究进展

鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)是引起鱼类传染性病毒病鲤春病毒血症(Spring viremia of carp,SVC)的病原,对鲤科鱼类养殖业造成巨大的经济损失。囊膜糖蛋白G可介导病毒内吞,还是最主要的抗原决定簇蛋白,已成为国内外研究的热点。综述G蛋白在表达技术、病毒检测、疫苗研制等方面的研究状况,旨在为G蛋白的深入研究及鲤春病毒血症的防治提供参考。     

柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3基因在毕赤酵母中的表达及分析

旨在真核表达系统中高效表达柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Eimeria tenella calcium-dependent protein kinase-3,EtCDPK3),获得有活性的天然蛋白,利用毕赤酵母表达系统对该基因进行了表达.将EtCDPK3基因连接到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建重组质粒pPIC9K-EtCDPK3.重组质粒通过电击转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞.重组酵母细胞在含1％甲醇的BMMY培养基中诱导产生目的蛋白,培养收集1-4d的部分上清.经SDS-PAGE检测,所表达的蛋白相对分子质量约为49 kD.Western blotting表明,该蛋白能与兔抗EtCDPK3血清特异性结合.结果表明,柔嫩艾美耳球虫CDPK3基因在毕赤酵母中成功地进行了表达.