一个新鼻咽癌抑瘤候选基因的克隆及其功能初步分析

从cDNA 代表差异分析法（cDNA representational difference analysis, cDNA RDA）分离的新cDNA片段入手,进一步采用RT-PCR验证,其中发现AF152605片段在74%鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)活检组织中表达下调和缺失,DNA印迹显示其代表一转录本为2.1 kb的基因,结合生物信息学,运用文库筛选克隆该基因,命名为NAG4基因,GenBank登录号AF179285,定位于6q22.1～22.33,至少含有两个外显子,并在第一外显子的上游有TATA盒样序列,编码一个508个氨基酸组成的、分子质量为57.4 ku的蛋白质;功能预测NAG4基因产物与小鼠溴区蛋白BP75有84%同源,是含有多个磷酸化位点和溴区结构域的核内转录因子;突变分析表明NAG4基因在HeLa细胞株中发生整码突变.以上结果说明NAG4基因是鼻咽癌抑瘤基因的良好候选者,其表达的下调参与了鼻咽癌的发生.     

NGX6 基因对高转移鼻咽癌细胞株 5-8F 细胞的影响

NGX6 是一个新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因 . 为进一步研究其功能,在构建 NGX6 的真核表达载体 NGX6/pcDNA3.1(+) 基础上,通过脂质体转染方法将 NGX6 基因导入鼻咽癌细胞株 SUNE-1 的亚株 5-8F 细胞 ( 具高成瘤高转移潜能 ) 中,并用 RT-PCR 和 RNA 印迹鉴定,建立了稳定表达 NGX6 基因的 5-8F 细胞系 . 借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验对转染细胞的生物学行为进行了检测,同时采用包含 1 176 个与肿瘤学相关的基因 cDNA 微阵列,分析了 NGX6 基因转染对 5-8F 细胞基因表达谱的影响 . 结果显示：转染了 NGX6 基因的 5-8F 细胞的生长速度明显减慢,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降 (P < 0.05) ,发现 NGX6 基因的转染能够上调 5-8F 细胞中 p19 、 catenin α 2 、 desmoglein 1 等基因的表达,同时下调 EphB4 、 TIE2 、 vitronectin 等基因的表达 . 综上所述, NGX6 基因可以抑制 5-8F 细胞的恶性生物学行为,并影响一些与细胞周期、细胞黏附和血管生成有关的基因的表达 . 上述结果为鼻咽癌转移分子机制的阐明提供了重要的线索 .     

候选抑瘤基因 BRD7 及家族蛋白的功能研究进展

溴区结构(bromodomain)是近年来发现的广泛分布于多种生物中的一种高度保守的结构域,溴区结构蛋白通过参与信号依赖性的基因转录调控而广泛参与细胞内重要的生命活动.BRD7基因是1999年克隆的一个新的bromodomain基因,GenBank登录号为AF152604或AF152605.eMotif分析表明,BRD7蛋白包含多个磷酸化位点和一个保守bromodomain功能域,Blast显示BRD7蛋白与人的Celtix-1及鼠的bromodomain蛋白BP75具有高度的同源性.利用转基因技术已证实,在鼻咽癌细胞系HNE1中过表达BRD7基因可以抑制其细胞生长和细胞周期G1-S的进程,并部分逆转鼻咽癌细胞HNE1的恶性表型.为了全面地揭示BRD7基因的细胞内生物学功能,深入了解BRD7基因的细胞内整体信息流向,中南大学肿瘤研究所细胞遗传室已从上、中、下游三个不同层面对BRD7基因的功能研究展开了初步的探索.     

Cx26基因重表达抑制人鼻咽癌细胞系HNE1的恶性增殖

间隙连接蛋白 (Cx)基因在胚胎发育、细胞生长、分化以及细胞内环境的稳定过程中起重要调节作用 .肿瘤发生与Cx基因的表达及功能异常密切相关 ,肿瘤细胞常存在Cx基因表达下调或缺失 .将人Cx2 6基因编码区cDNA序列 ,亚克隆于真核表达载体pcDNA3 1(+) ,采用脂质体转染 ,将重组表达载体pcDNA3 1(+) Cx2 6转入鼻咽癌细胞系HNE1,使Cx2 6基因在HNE1中重表达 ,探讨Cx2 6基因对鼻咽癌细胞系HNE1的生物学功能的影响 .研究结果表明 :Cx2 6基因的重表达 ,抑制HNE1细胞生长 ,细胞周期阻滞于G0 G1期 ,HNE1细胞的克隆形成能力下降 ,裸鼠致瘤能力减弱 .     

利用组织微阵列研究ACVRL1在鼻咽癌中的表达及临床意义

ACVRL1基因又名活化素受体样激酶l(activin receptor-like kinase-1, ALK1),与2型遗传性出血性毛细血管扩张性疾病(HHT2)密切相关.通过制作含896个组织点阵的鼻咽癌组织微阵列.结合原位杂交法检测ACVRL1在鼻咽癌组织中的mRNA表达,建立ACVRL1基因在鼻咽癌组织中的原位表达谱,分析ACVRL1mRNA的表达与鼻咽癌临床病理特征关系,并分析其与鼻咽癌颈部淋巴结转移的关系.结果发现ACVRL1mRNA在鼻咽癌组织中的表达与相应非癌组织相比,有显著性差异(P<0.05);ACVRL1mRNA的表达与临床分期无显著相关性(P>0.05);与颈部淋巴结有无转移存在显著性差异(P<0.05);但与EBV VCA-IgA血清滴度没有显著相关性(P>0.05).灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等指标综合评估ACVRL1基因作为鼻咽癌颈部淋巴结转移分子标志物的有效性.这些结果表明ACVRL1基因在鼻咽癌组织中表达下调,与颈部淋巴结转移密切相关,可作为鼻咽癌颈部淋巴结是否转移的候选分子标志物.     

SPLUNC1多肽抗体的设计、制备与鉴定

通过设计SPLUNC1蛋白的一段多肽,快速制备抗SPLUNC1的多肽抗体,检测多肽抗体的性能,为SPLUNC1的功能研究提供可靠的平台. 用DS Gene1.1软件分析SPLUNC1蛋白的跨膜结构域、二级结构、疏水性、亲水性以及抗原性等,综合考虑抗体设计的其它因素,设计出两段15～20个氨基酸的多肽.将合成后的多肽与钥孔戚血蓝素（keyhole limpet hemocyanin,KLH）偶联,同时初筛出宿主血清与SPLUNC1无交叉反应的新西兰家兔,用与KLH相连的SPLUNC1多肽免疫家兔,2个月后获取血清,亲和纯化出抗SPLUNC1多肽抗体,通过ELISA法检测其效价,免疫印迹与免疫组化检测其特异性与适用范围.通过该方法得到了高效价与高特异性的SPLUNC1多克隆特异性抗体,ELISA法测定其效价可达到1∶10⁵,通过对包含有PLUNC家族不同成员的蛋白混合物进行Western印迹检测证明,该多肽抗体具有较高的特异性,不与同一家族中的其它蛋白发生交叉反应,而且该抗体可用于免疫组化,说明所制备的分泌性蛋白SPLUNC1抗体具有高特异、高效价等特点,将为SPLUNC1基因的功能研究提供有用的研究材料.     

人鼻咽组织特异性表达基因NASG编码产物在细胞中的融合表达

采用PCR技术从人鼻咽上皮组织cDNA文库扩增出人鼻咽组织特异性表达基因NASG基因的编码序列,用Xho I和Sal I酶切NASG基因编码序列的PCR产物及pEGFP-C2载体,产生匹配的粘末端。将回收的pEGFP-C2载体分别与NASG基因编码区酶切片段连接,构建了其编码产物的融合蛋白表达载体pEGFP-C2/NASG,通过脂质体介导分别转染非洲绿猴肾永生化细胞系COS7和鼻咽癌细胞系HNEI,瞬时表达后荧光显微镜观察NASG编码蛋白的活细胞定位,结果表明,NASG编码蛋白在COS7细胞和HNEI细胞的胞浆和胞核中均有表达。     

编者按:非可控性炎症与肿瘤——古老的科学问题，新的研究前沿

正炎症(inflammation)是机体对病原体感染以及各种组织损伤等产生的一种防御反应,是最常见而又最重要的基本病理生理过程之一[1].炎症与肿瘤发生发展的关系是一个古老的科学问题,早在1863年,德国著名病理学家Rudolf Virchow就证实了肿瘤组织中有大量的白细胞浸润,从而提出肿瘤起源于慢性炎症这一假说[2],但这一假说当时并未引起足够的重视.直到21世纪初,炎症与肿瘤的关系才重新引起研究者们的极大兴趣[3],科学家们发现     

鼻咽癌分子标志物研究

鼻咽癌严重危害人类健康,寻找其早期诊断及预后相关的分子标志物迫在眉睫.在总结本课题组运用基因组学、转录组学、蛋白质组学和组织微阵列等高通量技术对不同分化阶段、不同组织类型和不同临床分期的鼻咽癌标本进行大规模筛选工作的基础上,结合近年国际上有关进展,初步构建了鼻咽癌不同发病阶段的分子靶标系统:a.证实SPLUNC1、p16、EBER-1、p27、RASSF1A和CDH13是鼻咽癌早期诊断的理想分子靶标;b.鼻咽癌上调基因RB1,STMN1和DSP及下调基因SERPINB6,AGTRL1和SYTL2的分类预测模型是区分正常鼻咽上皮和鼻咽癌的分子靶标;c.NGX6、Ezrin、LTF、OPN、THY1和Tiam-1是鼻咽癌侵袭与转移预测的候选分子靶标;d.Cyclin D1、Survivin和HPA是与鼻咽癌预后相关的候选分子标志物;e.证实Bcl-2、EGFR和Ki67是预测鼻咽癌放疗敏感与否的候选分子靶标;f.SAA和cox-2是监测鼻咽癌复发的候选分子标志物;g.发现BRD7、NGX6、NOR1和UBAP1的6个SNP改变是鼻咽癌遗传易感风险因子;h.建立了由139个基因组成的鼻咽癌不同临床分期分子靶标系统.这些在大样本基础上的分子靶标筛选为鼻咽癌分子分型研究奠定了重要工作基础.     

9号染色体短臂上7个STR基因座在基因扫描中的信息表现

为了初步探讨7个位于染色体9p区域的短串联重复序列(shorttandemrepeat,STR)基因座:D9S288、D9S157、D9S1748、D9S171、D9S161、D9S1817和D9S1805在遗传学研究及法医学应用中的意义,随机抽取225名湖南汉族无关个体,复合PCR技术扩增上述基因座,ABI377全自动测序仪进行基因分型,共检出75种等位基因,通过对基因型及等位片断频率分布的研究和数据统计分析,7个基因座基因频率分布在0.002～0.800之间,构成243种基因型。7个STR基因座基因型分布均符合Hardy Weinberg平衡定律(P>0.05),杂合度(heterozygosity,H)介于0 347～0.844之间,个体识别力(discriminationpower,DP)为0.346～0.841,非父排除率(probabilitiesofpaternityexclusion,PPE)为0.308～0.738,多态信息含量(polymorphicinformationcontent,PIC)在0.328～0.822之间。种族比较结果显示,湖南汉族与非洲黑人及欧洲白人在大多数基因座均存在显著差异(P<0.001)。研究结果丰富了中华民族基因数据库,在人类群体遗传学及法医学研究领域有重要应用价值。