利用优化的5′-RACE实验定位副溶血弧菌基因的转录起始位点

目的:优化5′-cDNA末端快速扩增(5′-RACE)实验平台,用于定位副溶血弧菌(VP)基因的转录起始位点。方法:提取VP的总RNA,用rDNaseⅠ消化去除可能污染的基因组DNA;利用T4 RNA连接酶将已知序列的寡核苷酸片段连接至RNA的5′端,进而将其逆转录成cDNA;以cDNA为模板,采用巢式PCR技术扩增目的基因DNA片段,并将其直接克隆入T载体;最后通过测序比对的方法确定靶基因的转录起始位点。利用引物延伸实验进一步研究VPA1027的转录起始位点,以检验5′-RACE实验结果的可靠性。结果:5′-RACE实验结果表明,VPA1027、scrG、scrA、cpsA及VPA0198的转录起始位点分别为G(-103)、G(-70)、T(-205)、C(-129)和G(-238)(翻译起始位点为+1);引物延伸结果显示,VPA1027的转录起始位点也为G(-103)。结论:优化后的5′-RACE实验可以精确定位VP基因的转录起始位点。     

虾青素抑癌作用机制研究进展

虾青素是一种从虾蟹外壳、牡蛎、鲑鱼及藻类、真菌中发现的橙红色类胡萝卜素,其抗氧化性极强,因而在人体营养与健康领域有着广泛的应用前景。已有许多动物实验模型证实,虾青素能显著抑制肿瘤生长、诱导细胞凋亡、抑制癌细胞转移、调节细胞间隙通讯和增强机体免疫力。其作用机制不仅仅与其抗氧化作用有关,还可能通过活化过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),抑制NF-κB激活等调控多种信号分子实现其抑癌作用。本文对虾青素抑癌防癌作用机制进行了综述。     

人丙氨酸氨基转移酶同工酶在人体组织中的分布

文中拟通过采用基因重组技术获得ALT1和ALT2同工酶重组蛋白,分别制备筛选出高特异性、高活性的ALT1和ALT2单克隆抗体(ALT1单克隆抗体已成功制备并发表),初步探讨ALT1和ALT2同工酶在人体组织中的定位、分布及表达情况。采用RT-PCR方法从人肝癌细胞(HepG2)中扩增ALT2基因,将成熟的ALT2基因亚克隆至pET32a-ALT2原核表达载体中,并将其连接产物转化至BL21(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导表达ALT2蛋白,镍柱(Ni+)亲和层析法纯化ALT2重组蛋白。ALT2重组蛋白免疫Balb/c小鼠,选取阳性血清小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,间接ELISA法挑选阳性细胞株,有限稀释法进行亚克隆,采用亲和层析柱法纯化ALT2抗体。通过RT-PCR和Western blotting方法检测ALT1和ALT2在人体正常组织中的表达和分布,研究结果显示组织中的ALT同工酶基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达几乎一致。ALT1在肝脏、肾脏、骨骼肌高表达,胃肠道平滑肌中等表达;ALT2在脂肪、骨骼肌、心肌中高表达,胃肠道平滑肌低表达。免疫组化研究表明,ALT...     

甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究

G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用.为了验证甘丙肽2型受体(GalR2)是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,并转染到HEK293A细胞中.Western blot发现,除了相当于GalR2分子量的位置有条带之外,在大约2倍于GalR2分子量的位置...     

乳头体外侧核环路的连接与功能

乳头体外侧核(lateral mamillary nucleus)是乳头体(mamillary body)外侧分区,占比小于内侧核(medial mamillary nucleus),主要接受海马下托(subiculum)和背侧古登氏被盖核(dorsal tegmental nucleus)的输入,并输出到丘脑前背侧核(anterodorsal thalamic nuclei)和背侧古登氏被盖核。外侧核神经元在形态和电生理特性上与内侧核神经元存在差异,外侧核神经元胞体更大,且大多数能分别对头部方向、头部俯仰和头部角速度产生响应。内侧核主要调控空间记忆,外侧核是头部方向系统的关键组成部分,在头部方向和空间导航方面起到重要作用。本文就乳头体外侧核的环路连接、细胞特点和功能的研究进展进行综述。     

畜禽生产性状主效基因定位技术与方法研究进展

鉴定畜禽重要生产性状形成的关键遗传因子,揭示其产生的分子遗传机制,对动物新品种的培育及特色遗传资源的开发利用具有重要意义。高通量分析技术诞生前,标记数量性状位点(quantitative trait loci,QTL)连锁分析和候选基因分析法作为鉴定畜禽生产性状QTL和主效基因主要方法,但由于其技术局限性,性状因果基因鉴定的效率并不高。人类基因组计划(human genome project, HGP)开启了以大数据为特征的生命科学研究的序幕,在HGP完成后的20余年间,快速发展的高通量分析技术使人们研究生物学问题的思路和方法发生了巨大改变。本综述就近年来被广泛用于畜禽重要性状的候选基因定位的方法与技术进行了较全面的综述,以期为同行提供参考。     

辽东半岛的蚤类

辽东半岛的蚤类,森川义金(1941)和大野(1942)曾作过一些报道。为弄清这一地区蚤类的区系分布,我们先后在旅顺、大连、庄河、宽甸、风城、岫岩、千山及复县等地进行了较广泛的调查。从人体及12种兽类(共11.850只)身上检获蚤类标本2.300多号,经鉴定共有16种,分隶7科13属,其中包括我国新纪录一种,现将各种的分布及其寄主叙述如下: (一)蚤科Pulicidae 1.人蚤Pulex irritans Linnaeus,1758 分布 大连、旅顺,庄河,宽甸、凤城,岫岩(常见种)。 寄主 家犬、人。 2.猫栉首蚤猫亚种Ctenoe phalides felis felis(Bouche.1835) 分布 大连(常见种)。     

化妆品中金黄色葡萄球菌检验能力验证方法及分析

文章依据《化妆品安全技术规范》2015年版和《NIFDC-PT-188化妆品金黄色葡萄球菌检验能力验证作业指导书》，分别对编号为TC1880001和TC18801010的两份样品中的金黄色葡萄球菌进行定性检测，并结合使用BAX?system Q7系统对增菌液进行初步筛查，同时使用VITEK 2COMPACT全自动细菌鉴定系统对分离出的菌株加以鉴定，试图通过外部能力验证，提高对化妆品中金黄色葡萄球菌的检验能力。最终结果表明编号为TC1880001和TC18801010的两个样品中金黄色葡萄球菌检验结果均为阴性。笔者对此次能力验证结果较为满意，并表示检测化妆品中金黄色葡萄球菌时具备常规法和实时荧光PCR法两种能力，能满足日常对化妆品金黄色葡萄球菌的检测监管需求。     

南盘江流域松栎混交林的分层多样性特征

亚热带天然林通常呈混交、复层和异龄的特征，也有少数林分在垂直方向上呈分层现象，但有关分层林分各层次上的多样性特征研究很少。分析垂直层次上的物种和结构多样性特征，有助于认知分层形成的原因及其在维系物种共存中的作用。本文采用11个传统的物种多样性指标和3个结构多样性指标分析中国西南地区南盘江流域松栎混交林的分层多样性。结果表明：(1)下木层的物种丰富度(R)、Shannon指数(H)、Simpson(D)、Brillouin指数(HB)和Fisher’s alpha多样性指数(α)均明显高于上木层(P<0.01)。整体上，下木层的多度(N)和4个均匀度指数[Heip (E_h)、Pielou (E_H)、Alatalo (E_a)、Sheldon (E_s)]亦大于上木层。层间物种Jaccard相似性为0.29～0.52;(2)在下木层和上木层中，各有56.4%～60.1%、56.7%～58.9%的树木个体处于随机分布状态(W=0.50),19.1%～23.9%、17.3%～21%处于聚集分布状态(W=0...