毛冠鹿B染色体多态及遗传机制探讨

采用原代培养和传代培养法, 对１ 头毛冠鹿的胚肺组织细胞进行观察,发现一种新的核型,其二倍体染色体数目为２ｎ＝ ４８,核型公式为２Ｍ ＋ ２ＳＴ＋ ４２Ｔ＋ ＸＸ,出现１ 对大的末端着丝粒染色体,Ｃ－ 带显示该染色体与已报道的相关染色体同源,首次提出毛冠鹿Ｂ染色体多态,对其传递机制进行了探讨。     

CFP荧光蛋白文库构建及FRET技术筛选钙调素结合蛋白

钙调素（Calmodulin,CaM）是细胞内Ca^2＋信号的主要受体,能够与靶蛋白相互结合调节靶蛋白的活性,在细胞增殖、分化、凋亡、迁移等过程中都起着重要作用。荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer,FRET）技术是目前研究蛋白质相互作用比较成熟的方法之一。作者通过Cre-loxP位点特异性重组技术构建了带有CFP荧光蛋白标记的文库,与YFP—CaM共同转染HEK293细胞,应用荧光共振能量转移技术（FRET）进行检测,挑取发生FRET作用的单个细胞,并进行单细胞PcR检测。由此扩增出的片段通过测序和蛋白序列数据库NCBI进行序列比对后,筛选出与CaM产生相互作用的蛋白。目前,已经通过这种方法成功地筛选到了一些与CaM相结合的蛋白,从而为进一步研究CaM蛋白在生理环境下的作用提供有利条件。     

钙调素（CaM）在中体上的分布及参与胞质分裂的调控

钙调素(CaM)是细胞内Ca^2 的主要受体,在细胞增殖、分化、凋亡、迁移等过程中都发挥着重要的调控作用。采用GFP标记技术,我们观察了GFP—CaM在胞质分裂期HeLa细胞中的动态分布,发现在胞质分裂后期,GFP—CaM与中体紧密相连。抑制CaM的活性会阻止中体的解聚。进一步观察发现,CaM与γ-微管蛋白共分布在中体两侧,抑制CaM活性也会引起中体γ-微管蛋白解离的延迟。本实验结果说明分布在中体上的CaM很可能通过影响中体微管的稳定,参与调控胞质分裂的完成。     

EGF促进小鼠卵母细胞体外减数分裂启动机制的研究

ＥＧＦ和孕酮对小鼠卵母细胞减数分裂的重新启动具有促进作用,ＥＧＦ的作用是通过促进颗粒细胞分泌孕酮实现的。使用孕酮合成关键酶３β－ＨＳＤ的抑制剂Ｅｐｏｓｔａｎｅ可抑制ＥＧＦ促进单层培养卵巢颗粒细胞的孕酮合成从而降低ＥＧＦ对卵母细胞的促进作用。Ｃａ＾２＋参与了ＥＧＦ和孕酮的促减数分裂重新启动作用。肝素可降低两者的作用。ＥＧＦ和孕酮均可使单个卵丘颗粒细胞内的Ｃａ＾２＋水平出现波动,并且ＥＧＦ使卵丘细胞维     

HOXA10直接调控人子宫内膜间质细胞中p/CAF启动子的活性

目的：筛选与鉴定转录因子同源框蛋白（HOX）A10下游靶基因。方法：用Ad-HOXA10重组腺病毒感染人子宫内膜间质细胞,通过染色体免疫共沉淀（ChIP）方法,筛选HOXA10的下游靶基因;采用萤光素酶报告基因实验结合腺病毒介导的HOXA10过表达和小干扰RNA介导的基因沉默实验,分析HOXA10对下游靶基因的转录调控作用。结果：ChIP-PCR筛选并鉴定p/CAF（p300/CBP相关因子）为HOXA10直接作用的靶基因;过表达HOXA10抑制p/CAF启动子活性达60%;基因沉默内源性HOXA10的表达可以激活p/CAF启动子活性超过2倍以上。结论：p/CAF是HOXA10新的靶基因,HOXA10可能通过调节p/CAF的表达来调控子宫内膜的发育。     

腺嘌呤对体外小鼠卵母细胞减数分裂的抑制

本文研究了嘌呤类物质对小鼠卵母细胞减数分裂的影响,于卵母细胞的生发泡内显微注射腺嘌呤和腺嘌呤的类似物苄基腺嘌呤可显著抑制卵母细胞的分裂的重新启动。同时发现在腺嘌呤的作用过程中,腺苷酸环化酶的激活前氟化钠,可增强其对卵母细胞的抑制作用,表明ｃＡＭＰ途径在小鼠卵母细胞的抑制作用,腺嘌呤在不同培养液中的抑制效果不一,次黄嘌呤在ＤＭＥＭ和ＥＭＥＭ中对小鼠的卵丘细胞－卵母细胞复合体和无卵丘细胞的卵丘细胞－卵     

钙调素(CaM)在中体上的分布及参与胞质分裂的调控

钙调素(CaM)是细胞内Ca~(2+)的主要受体,在细胞增殖、分化、凋亡、迁移等过程中都发挥着重要的调控作用。采用GFP标记技术,我们观察了GFP-CaM在胞质分裂期HeLa细胞中的动态分布,发现在胞质分裂后期,GFP-CaM与中体紧密相连。抑制CaM的活性会阻止中体的解聚。进一步观察发现,CaM与γ-微管蛋白共分布在中体两侧,抑制CaM活性也会引起中体γ-微管蛋白解离的延迟。本实验结果说明分布在中体上的CaM很可能通过影响中体微管的稳定,参与调控胞质分裂的完成。