利用小干涉RNA抑制肿瘤细胞MCF-7中NF-IL6的表达

RNA干扰被证明是-项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。转录因子NF-IL6特异地在肿瘤组织中过量表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。构建能够沉默转录因子NF-IL6表达的小干涉RNA（siRNA）质粒,转染肿瘤MCF-7细胞后,用Western印迹法和荧光酶活性实验检测NF-IL6表达水平和转录活性的改变。结果发现NF-IL6的表达水平被下调80％,转录激活能力降低了60％,转染细胞内部出现大量空洞,细胞增殖停滞。     

水稻蔗糖转运载体蛋白(OsSUT2)非跨膜区域特征性序列的融合表达及其抗体制备

植物光合作用产生的蔗糖是植物生长发育的主要碳源物质,还是诱导植物生长发育过程中诸多相关基因表达的特异信号分子[1].蔗糖分子在植物器官及组织间的生理分配维持着整个植物体的正常生长发育[2].植物蔗糖转运载体(sucrosetransporter,SUT)是一类担负着蔗糖分子在细胞间的转运及信号转导的功能性蛋白家族,它在蔗糖的韧皮部装载、沿韧皮部的再吸收、韧皮部卸载和向库器官的转运等跨膜运输以及蔗糖特异信号感应过程中发挥着重要的生理功能[3～5].植物蔗糖转运载体蛋白分布于植物细胞质膜上,该转运载体蛋白含有12个疏水性跨膜结构域,在其氨…     

油菜品种及高油育种材料遗传多样性SSR分析

通过SSR标记分析91份油菜品种、骨干亲本和高油自交系,以及作为参考物种的芥菜型油菜、白菜型油菜、埃塞俄比亚芥等8份材料之间的亲缘关系及遗传多样性,为油菜杂种优势利用育种提供理论依据。筛选48对SSR引物对99份参试材料进行扩增,共检测到255个多态性条带。UPGMA聚类将99份材料聚为5组:第Ⅰ组包括89个材料,均为甘蓝型油菜;第Ⅱ组有埃塞俄比亚芥和‘G8白’2个白花材料;第Ⅲ组包括4个芥菜型材料;第Ⅳ组包括3个白菜型材料;第Ⅴ组仅有‘秦芥2008’。第Ⅰ组89个甘蓝型油菜又可分为5个亚组。第i亚组包括43个材料,主要为陕西的恢复系、华中农业大学和浙江材料;第ii亚组包括9个材料,以陕西材料为主;第iii亚组包括12个材料,以贵州和国外材料为主;第iv亚组包括19个材料,主要为中国农科院油料作物所、浙江农科院和安徽的材料;第v亚组包括‘浙油758’、‘147C’等6个材料。而且来自同一育种单位的大部分材料具有较高相似性,这可能是由于育种单位频繁使用少数核心骨干亲本所造成的。     

急性失血患者中早期输注冷沉淀治疗对凝血功能的影响

摘要 目的：探讨急性失血患者中早期输注冷沉淀治疗对凝血功能的影响。方法：收集江苏省中医院（南京中医药大学附属医院）2015年9月-2019年8月收治的80例急性失血患者的临床资料,将患者按照住院号排序后取随机数字后分为研究组（40例）和对照组（40例）,其中对照组给予常规输注血小板治疗,研究组给予早期输注冷沉淀凝血因子治疗,观察两组凝血功能变化及临床指标。结果：两组患者均顺利完成相应的输注治疗,无终端、退出、输注中死亡等异常情况。研究组治疗的总有效率显著高于对照组（P＜0.05）。两组患者输血前的凝血酶原时间（Prothrombin time,PT）、部分活化凝血酶时间（Activated partial thromboplastin time,APTT）、纤维蛋白原（Fibrinogen,Fbg)、血小板（blood platelet,PLT）、凝血酶时间（thrombin time,TT）水平组间差异无统计学意义（P>0.05）;输血24 h后两组患者的TT、PT、APTT均降低,Fbg、PLT水平升高,并且研究组的变化幅度大于对照组变化幅度（P＜0.05）。研究组患者的有效止血率、平均止血时间、24 h悬浮红细胞续用量与对照组相比,有显著差异（P＜0.05）。结论：急性失血患者中早期输注冷沉淀治疗可改善患者的凝血功能,起到较好止血效果,值得临床推广应用。     

外源激素ABA影响新疆荒漠盐生植物异子蓬异型种子萌发机制

以新疆荒漠盐生植物异子蓬(Suaeda aralocaspica)异型种子为材料,通过外源ABA直播(长时间)与浸种(短时间)处理分别研究不同浓度(0、0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L)ABA对异型种子萌发、幼苗生长的影响,并通过定量PCR技术分析与萌发相关的ABC转运蛋白基因、丝裂原活化蛋白激酶激酶基因和DNA修复和转录因子基因在5.0μmol/L ABA处理下的表达规律,探讨外源ABA影响异子蓬异型种子萌发差异的机制。结果显示:(1)外源ABA直播处理下,褐色种子萌发及幼苗生长均受到明显抑制,黑色种子的萌发和幼苗生长在低浓度被促进,较高浓度被显著抑制;短时间浸种处理,能够同时促进异型种子的萌发及幼苗生长,且随ABA浓度增加促进效应增强。(2)直播萌发后,褐色种子中3个基因的表达量与对照相比均不变或降低表达(除了DNA修复和转录因子基因在8 h显著升高),黑色种子与对照相比均上调表达(除了ABC转运蛋白基因在8h显著下调);短时间浸种萌发后,褐色种子中3个基因的表达量均比对照显著升高,黑色种子中升高不明显。基因表达规律与种子萌发结果趋势一致,暗示ABA浸种可能触发了异子蓬种子萌发内在机制并对随后的萌发过程产生促进作用。而黑色种子对ABA处理表现出较好的萌发响应,可能是其幼苗能抵御荒漠地区逆境环境的重要原因。     

阿维拉霉素生物合成与代谢调控研究进展

阿维拉霉素是发酵法来源的新型兽用的消化促进剂和代谢调节剂,具有较高的生物安全性,通过改善动物肠道内细菌群的生态结构促进动物生长。对阿维拉霉素的生物合成和代谢调控进行了综述,同时结合系统生物技术观点,为阿维拉霉素菌种基因工程改造提供参考。     

农杆菌介导的出芽短梗霉遗传转化及高效筛选聚苹果酸高产菌株

建立根癌农杆菌介导的出芽短梗霉遗传转化方法及T-DNA突变库,高效筛选聚苹果酸高产菌株及功能基因。通过含潮霉素和草铵磷抗性基因的农杆菌转化出芽短梗霉,抗性压力筛选及PCR验证建立根癌农杆菌介导的出芽短梗霉遗传转化方法,结合发酵液p H与聚苹果酸含量响应变化,微孔板高效筛选高产聚苹果酸的T-DNA插入突变株,基因组步移确定T-DNA插入位点及功能基因。结果获得遗传稳定的抗性基因菌株,每107个细胞可获得80-120个转化子,出芽短梗霉H27号T-DNA突变株聚苹果酸摇瓶发酵产量提高24.5%,基因组步移证实糖酵解途径磷酸甘油酸变位酶基因被破坏。成功建立了根癌农杆菌介导的出芽短梗霉遗传转化方法和T-DNA插入突变库,结合高效筛选方法为聚苹果酸合成功能基因挖掘及高产机制解析奠定基础。     

叶花相关蛋白结构域对其转录辅激活及细胞核定位的影响

染色质相关蛋白在真核生物DNA复制、基因转录调控等过程中起着非常重要的作用．前期报道拟南芥叶花相关蛋白(leaf and flower related,LFR)蛋白定位于细胞核中, 其缺失突变体在叶、花发育及育性等方面存在着许多表型,但LFR蛋白的自身特征尚有待进一步探究．酵母单杂交实验表明,酵母转录因子GAL4 的DNA结合域与全长LFR的融合蛋白(GBD-LFR)具有转录辅激活活性,LFR的C端至少有2个犰狳蛋白(ARM)重复结构域及完整N端对于其转录辅激活活性是必需的．但在野生型拟南芥原生质体中,与典型的转录激活因子相比,GBD-LFR的转录辅激活活性并不明显．缺失或突变LFR与黄色荧光蛋白(YFP)的原生质体亚细胞定位的荧光显微观察表明,N端的1～25位氨基酸,特别是其中第22位的赖氨酸和第4、23以及25位精氨酸影响其核定位．利用激光共聚焦显微镜观察共表达黄色或青色荧光(CFP)融合蛋白的细胞核内分布,结果表明LFR与染色质结构蛋白组蛋白H4及染色质结合蛋白HMGA有一定的核内共定位．这些结果表明LFR可能作为一个染色质相关的蛋白质,在拟南芥的生长发育中发挥重要作用．     

甘蓝型油菜温敏核不育系SP2S花蕾总蛋白质双向电泳体系的建立及应用

以甘蓝型油菜温敏核不育系SP2S及其近等基因系SP2F为材料,分别采用TCA/丙酮法和Tris-丙酮-酚法提取花蕾总蛋白,并优化电泳体系,对可育和不育花蕾中的蛋白质表达进行差异分析。结果表明:TCA/丙酮法适合于花蕾总蛋白的提取,采用10%浓度的分离胶,上样量为450μg,用pH 4~7的17 cm线性胶条和改良的考马斯亮蓝染色法得到了背景清晰、蛋白点分布均匀且重复性好的电泳凝胶图谱。利用这一实验体系,筛选出SP2S和SP2F之间大量的差异蛋白点。相比SP2F,仅在SP2S中表达的有13个点,上调2倍以上的点有4个,下调2倍以上的点有9个。     

核孔蛋白p62促进非受体酪氨酸激酶c-Abl进入细胞核

非受体酪氨酸激酶c-Abl广泛表达于各组织细胞中,其序列高度保守,它的亚细胞定位与其功能密切相关。c-Abl借助其C端的3个核定位信号（NLS）和1个核输出信号（NES）完成细胞核一细胞质问的穿梭过程。关于c-Abl核-质穿梭的详细机制还不清楚。通过酵母双杂交系统,以人类Ib型c-Abl作为诱饵蛋白进行HeLa细胞eDNA文库的筛选,获得了可能在c-Abl核-质穿梭过程中具有调控怍用核孔蛋白p62。核孔复合物（NPC）是大分子物质进行核-质运输的惟一通道,p62是NPC的重要组成部分,它位于中央通道内侧,在许多物质的核-质穿梭过程中具有调节作用。免疫共沉淀和体外结合实验证实,c-Abl和p62之间具有相互作用,而且这种相互作用是通过c-Abl的SH3结构域与p62的P299位点之间的结合实现的;p62可被c-Abl部分磷酸化此外,在293和DKO细胞株中共转染c-Abl和p62,发现核内的c-Abl分布增多。以上结果表明,p62具有促进e-Abl进入细咆核的作用。