阿特拉津高灵敏酶联免疫吸附检测法的建立

目的：建立高灵敏度的阿特拉津酶联免疫吸附检测法。方法：将间接竞争ELISA进行条件优化以提高检测灵敏度,包括包被抗原与一抗的最佳工作浓度筛选、选择一抗的最佳稀释度对包被抗原进行细化筛选、不同有机溶剂对竞争结合反应的影响、酶标二抗稀释度筛选等。用建立的酶联免疫检测法检测实际样品,再与高效液相色谱法（HPLC）检测进行比较。结果：利用优化后条件建立了阿特拉津间接竞争ELISA检测曲线,标准曲线的相关系数R²=0.9958,相关性较好。另由此标准曲线可得LOD （最低检出限）为1.972 ng/ml。用于检测实际样品,回收率在80%-120%之间。当添加样品浓度为（0~6） ng/ml时,该法的检测灵敏度高于HPLC。结论：新建立的阿特拉津ELISA特异性好、精密度高,可代替大型仪器用于阿特拉津实际样品检测。     

嗜热子囊菌JCM12803来源的双功能木聚糖/纤维素酶

纤维素和木聚糖的充分利用对于生物燃料的生产是非常重要的。文中利用PCR的方法从嗜热子囊菌Thermoascus crustaceus JCM12803中克隆到一个新颖的双功能木聚糖/纤维素酶基因Tcxyn10a,并将其在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中实现高效异源表达。经过蛋白纯化和酶学性质研究分析,TcXyn10A的最适pH值和最适温度分别为5.0和65-70℃,能够在酸性至碱性(pH 3.0-11.0)条件下和60℃下保持稳定;对榉木木聚糖、小麦阿拉伯木聚糖、羧甲基纤维素钠和地衣多糖均有降解活性,比活分别为(1 480±26)U/mg、(2 055±28)U/mg、(7.4±0.2)U/mg和(10.9±0.4)U/mg;同源建模结构以及分子对接试验表明,双功能酶TcXyn10A只含有单一催化结构域,且木聚糖底物与纤维素底物共用一条催化通道。文中为探索双功能酶结构与其功能的关系提供了很好的素材。     

克伦特罗单克隆抗体的纯化及其生物学特性的研究

目的：将自制克伦特罗（CL）单克隆抗体纯化并研究其生物学特性,进行性质鉴定并建立检测标准曲线。方法：用ELISA法测定克伦特罗单克隆抗体的亲和常数和抗体活性,ELJSA测定单克隆抗体与BSA的交叉反应及与几种结构和功能类似物的交叉反应,然后采用间接竞争ELISA方法建立检测标准曲线。将制备的含克伦特罗单克隆抗体的小鼠腹水用盐析法和免疫亲和柱层析法进行抗体纯化。结果：经ELISA法测定,单克隆抗体亲和常数为2．90×10mmol／L,抗体效价最高达10^6。单克隆抗体对BSA无反应,对几种结构和功能类似物的交叉反应率均小于0．005％。建立的标准曲线R2=0．9812,最低检测限为1．0ng／ml。结论：建立了间接竞争ELISA检测cL的标准曲线。自制的克伦特罗单克隆抗体亲和力好,特异性高。为以后实际样品的检测及制备CL免疫检测试纸条和试剂盒奠定了基础。     

黄土高原林下草地对模拟增温的短期响应

气候变暖在高海拔山地更为明显,山地植被对气候变暖响应的空间格局将成为山地研究新的热点。在黄土高原东部沿纬度梯度选择北段管涔山、中段关帝山和南段五鹿山,分别划分高、中、低3个海拔梯度,每一梯度用开顶式生长室设置对照（CK）、低度增温（LW）、高度增温（HW）3种模拟增温样地,于增温1年后植被生长季调查山地林下草本群落的生长特征及水热因子,探究黄土高原林下草地对气候变暖的短期响应及其随纬度、海拔的变化格局。结果表明：在LW和HW处理下,（1）空气温度增加0.47℃和1.00℃,空气湿度增加1.37%和1.94%,其中空气温度增幅随海拔增加显著增大（P=0.012）;（2）土壤水分减小0.32%和0.64%,土壤温度减小0.07℃和增加0.06℃,其中土壤温度增幅随纬度增加显著减小（P=0.003）;（3）植物密度增加41.27株/m²和78.53株/m²,植物高度增加0.04 m和0.03 m,植物频度增加5.47%和3.47%,而植物盖度显著增加5.32%和0.88%（P=0.042）;（4）植被与温度关系的相关系数绝对值增加31.49%和56.82%,与水分关系的相关系数绝对值增加38.67%和62.89%。因此,山地温度对增温响应更大,且空气温度具正向海拔依赖性,土壤温度具负向纬度依赖性;增温加强植被与水分的关系,促进植物对水的依赖性,进而显著影响植物盖度。然而,增温的短期效应易受到降雨条件的影响,使结果出现误差,故在类似的研究中建议加强试验的时间尺度。     

体外诱导耐万古霉素金黄色葡萄球菌及分子机制

【目的】通过前期体外诱导获得耐万古霉素金黄色葡萄球菌,从基因突变方面对万古霉素耐药性菌株进行研究。【方法】通过低浓度万古霉素逐步诱导13株敏感性金黄色葡萄球菌,用琼脂稀释法和E-test法检测所有菌株对万古霉素的耐药性(最低抑菌浓度,MIC),PCR扩增与万古霉素耐药性密切相关的4个重要基因:rpo B、vra S、gra R和gra S,并测序分析,比较诱导前后不同菌株的基因序列。【结果】通过60 d的体外诱导实验,13株对万古霉素敏感性金黄色葡萄球菌中有6株被诱导为中介耐药金黄色葡萄球菌(Vancomycin intermediate Staphylococcus aureus,VISA),7株菌被诱导之后对万古霉素仍处于敏感状态,MIC4 mg/L。检测诱导前后所有菌株的rpo B、vra S、gra R和gra S基因发现:有3株VISA的rpo B基因同时有L466S和H481N的突变,gra S基因同时有R232K的突变。【结论】对万古霉素敏感的金黄色葡萄球菌经过较长时间的体外诱导可发展为VISA。在已检测的重要基因中,rpo B和gra S的突变对耐药性的发展很可能起关键作用,而vra S和gra R对这一过程没有显著影响。     

动物生物化学实验教学的探索与实践

为培养高素质的人才,教学理念必须发生转变,教学的目的不仅是传授知识,重要的是对学生进行科学思维能力的训练和创新能力的培养。为此,我们课程组在动物生物化学实验教学中,从培养学生的主观能动性出发,对实验教学方法、实验教学内容优化等方面进行了一些探索性改革,以提高动物生物化学实验的教学效果。     

历山青檀天然群落乔木层优势种种间关系

采用样方调查法,在分析历山青檀群落结构的基础上,测定了优势种的种间协变系数,并将典范对应分析和聚类分析相结合,探讨了历山青檀与群落中其他物种的种间关系。结果表明:(1)历山青檀群落以A级频度(1%～20%)占绝对优势,青檀在群落中占据优势地位,但在演替层和更新层中的优势不及其他优势树种;(2)Spearman秩相关分析和Pearson相关分析的结果基本一致,历山青檀群落乔木层物种间正协变种对数少于负协变的种对数,青檀和君迁子种对间负协变程度最高,且在所有包含青檀的显著或极显著协变种对中,青檀与另一个物种间总是显著或极显著的负相关。(3)坡度、土壤含水量及枯枝落叶层厚度与3个排序轴相关性强,18个乔木优势种沿第2排序轴的分类与物种的性状特征较为相符,土壤含水量是影响历山青檀分布的主导因素。(4)聚类分析把历山青檀群落乔木层优势种分为3大类。     

可溶性PD-1 和调节性T细胞在肺炎支原体感染和哮喘的实验研究

目的:探讨可溶性PD-1(soluble PD-1,s PD-1)和调节性T细胞(Regulatory T lymphocyte,Treg)在肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)感染与哮喘模型小鼠关系中的作用。方法:20只BALB/c小鼠随机分为4组(n=5),其中2组建立鸡卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏哮喘模型,将MP菌液滴入其中1组OVA小鼠和1组对照小鼠,形成OVA致敏并MP感染组,OVA致敏组,MP感染组及正常对照组。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法分别检测各组小鼠血清、肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF)中s PD-1的浓度;采用流式细胞术检测脾脏组织中Treg细胞的比例。结果:1与正常对照组相比,OVA致敏并感染MP组、单纯OVA致敏组和单纯MP感染组小鼠血清s PD-1的浓度均升高,差异有统计学意义(P0.05),BALF中的s PD-1的浓度亦增高,但无统计学差异;2与正常对照组相比,OVA致敏并感染MP组、单纯OVA致敏组小鼠的脾脏Treg细胞占淋巴细胞的比例下降,而单纯MP感染组Treg细胞的比例升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:s PD-1和Treg细胞可能参与了哮喘小鼠感染MP的发病。     

铁生物有效性及评价

正化学工业出版社出版本书以笔者前期研究为基础,系统阐述了铁营养与缺乏、铁营养强化措施和铁生物有效性评价等内容,并利用当前国内外广泛认可的肠道细胞模型对大部分铁强化剂和主要食物铁源进行了生物有效性评价。本书对当前铁生物有     

不同生态环境下雌雄同株黄瓜单性结实性遗传的比较

以两个单性结实性不同的雌雄同株黄瓜自交系构建的4世代群体为试材,采用植物数量性状主基因+多基因混合遗传模型联合分析方法,对南京江宁和河北昌黎两地雌雄同株黄瓜单性结实性遗传进行了比较研究.结果表明：不同生态环境下,雌雄同株黄瓜单性结实性遗传均符合E-1-1模型,受2对加性-显性-上位性主基因+加性-显性多基因控制,存在基因型与环境互作效应.但是,不同环境条件下F₁的遗传倾向和遗传参数不同,F₂的主基因遗传率为42.1%～97.5%,其遗传差异主要由黄瓜结果期两地日照和温度差异所致.强单性结实黄瓜品种选育以双亲均为强单性结实材料为宜,杂种后代宜在不同生态条件下选择鉴定.