miR-424通过结合ARK5 mRNA 3'-UTR抑制胶质瘤细胞侵袭北大核心CSCD

前期的研究证明,人腺苷酸活化蛋白激酶5(ARK5)通过Gab2-Akt-ARK5通路,促进胶质瘤的侵袭。然而,ARK5的调节机制尚不清楚。本研究旨在探讨miR-424是否通过与ARK5 mRNA结合,进而影响胶质瘤侵袭。通过Targetscan找到与ARK5的3'-UTR区互补结合的microRNA(miR-424)。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同胶质瘤细胞系中miR-424表达水平,发现3种胶质瘤母细胞(高级别胶质瘤细胞)株中,miR-424表达量均不同程度低于低级别胶质瘤H4细胞株。miR-424及miR-424抑制剂质粒转染胶质瘤细胞系H4、LN-229并结合蛋白质印迹法显示,miR-424可负向调控ARK5蛋白表达。qRT-PCR显示,在胶质瘤细胞内过表达miR-424后,ARK5mRNA无显著变化,提示miR-424在翻译水平影响ARK5蛋白表达。Transwell侵袭实验显示,过表达miR-424导致胶质瘤细胞体外侵袭能力明显减弱。双荧光素酶基因报告检测显示,miR-424能与ARK5 mRNA的3'-UTR结合,抑制荧光素酶活性。上述结果提示,miR-424可以结合ARK5mRNA的3'-UTR而抑制ARK5蛋白翻译,从而抑制胶质瘤细胞侵袭。     

基于IRES序列的多基因共表达载体构建

目的:构建一个IRES序列介导的多基因共表达载体,实现两个目的基因和筛选标记基因共用一个启动子高效表达,提高多基因稳定共表达细胞株的筛选效率。方法:以实验室前期构建的载体pLV-MCS-Puro为骨架,设计并全基因合成双基因克隆表达元件,连接到骨架载体,构建多基因共表达载体pLV-2MCS-Puro,以DsRed2和EGFP荧光蛋白基因验证该载体用于多基因稳定共表达细胞株筛选的效率。结果:成功构建了pLV-2MCS-Puro载体以及DsRed2和EGFP共表达重组质粒pLV-DsRed2-EGFP-Puro。瞬时转染实验证明该载体能介导多基因共表达。抗性筛选获得了MDCK和HeLa两种细胞的多基因稳定共表达细胞池。细胞池涂片荧光显微镜观察和计数表明抗性细胞池DsRed2和EGFP双阳率接近100%。基因组和转录水平PCR及蛋白质免疫印迹实验表明,DsRed2和EGFP稳定整合到抗性细胞基因组,并且两种蛋白质表达水平较为一致。结论:成功构建了多基因共表达载体pLV-2MCS-Puro,实现了两个目的基因和抗性基因串联共表达,并且具有高效的多基因稳定共表达细胞株筛选效率。该载体在研究蛋白质相互作用及工程细胞构建等方面具有一定的应用前景。     

自然流产患者绒毛和蜕膜中ZEB1的差异性表达及意义

目的：检测锌指结合蛋白（zincfingerE—box—bindingprotein,ZEB1）在自然流产患者绒毛和蜕膜组织中的差异性表达。方法：选取2010年3月到2011年3月在我院妇产科门诊进行人工流产的患者,分为正常人工流产（对照组50例）和自然流产（实验组50例）两组,两组年龄和孕周间差异无统计学意义（P〉0．05）。用荧光实时定量PCR（qRT—PCR）技术检测在绒毛和蜕膜组织中ZEBlmRNA的表达量。结果：自然流产患者绒毛（0．835±0．047）中ZEB1的表达量低于对照组（1．942±0．095）,自然流产患者蜕膜（0．65±0．058）中ZEBl的表达量低于对照组（1．13±0．084）,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：绒毛及蜕膜组织中ZEB1的异常表达可能参与自然流产的发生发展过程。     

FS36作为新型人源Hsp90抑制剂的发现（英文）

热休克蛋白90(Hsp90)通过对几百种蛋白质底物(客户蛋白质)进行合理的折叠、成熟其构象并且激活,在肿瘤细胞的生长和繁殖中发挥重要作用.因此,Hsp90成为非常有吸引力、有前途的抗肿瘤药物靶点,并且超过20种抑制剂已经进入临床实验阶段.我们在这里设计并合成了一个小分子抑制剂:FS36.收集了Hsp90~N-FS36复合物晶体结构的X射线衍射实验数据.高分辨率X射线晶体结构表明,FS36在ATP结合位点上与Hsp90~N相互作用,并且FS36可能替代核苷酸与Hsp90~N结合.FS36和Hsp90~N的复合物晶体结构和相互作用为后期设计和优化新型抗肿瘤药物奠定基础.     

肌肉萎缩相关蛋白Syncoilin的研究进展

肌肉萎缩是一种严重危害人类健康的疾病.研究与肌肉萎缩相关的重要生理蛋白的结构和功能,将有利于从分子和细胞层面阐明肌肉萎缩致病的机理,是预防和治疗肌肉萎缩的重要途径.Syncoilin是2001年发现的一种新的Ⅲ型中间纤维,与其它中间纤维蛋白不同,syncoilin在体内以单体形式存在.它是肌肉萎缩蛋白复合物的成员,直接连接肌萎缩关联蛋白复合物成员之一dystrobrevin和中间纤维desmin,以此将基底膜和细胞骨架组成一个整体,该体系的完整性是肌肉伸长和收缩所必须的,该体系被破坏会影响肌肉运动中侧向力的传导,进而诱发肌肉萎缩的发生.同时,syncoilin参与肌纤维再生,其表达量的下调会影响肌纤维的重建.Syncoilin表达的紊乱,将会导致肌营养不良症、desmin相关肌病和肌肉萎缩侧索硬化症等疾病的发生.本文就近年来关于syncoilin的分子结构、组织分布、生理功能、参与的信号通路及相关疾病等方面的研究进行了综述,旨在为深入理解syncoilin参与的肌肉萎缩发生的分子机制,预防和治疗肌肉萎缩提供积极的参考.     

EPO/EPOR-JAK2-STAT5信号传导通路在成釉细胞瘤中表达意义的研究

目的:促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)具有促进细胞分裂、生存、肿瘤血管新生以及肿瘤细胞的侵润和转移等多种生物学功能.EPO/EPOR激活的蛋白酪氨酸激酶-2(JAK2)、信号转导子和转录激活子5(STAT5)这一信号传导通路导致头颈部鳞癌的侵润,但在成釉细胞瘤中的作用尚不明确.本文将探讨EPO/EPOR-JAK2-STAT5信号通路在AB中的表达及意义,进一步探索AB的发病机制.方法:应用免疫组化法检测9例牙胚(TG)、10例牙源性角化囊肿(OKC)和36例成釉细胞瘤(AB)中上述四种蛋白的表达.结果:EPO在TG和OKC两组之间免疫组化表达水平存在显著性差异(P＜0.05);EPOR在OKC分别与TG组、AB组间比较,差异具有显著型(P＜0.05).EPOR在AB的无细胞变异亚型分别与棘皮瘤亚型、颗粒细胞亚型之间比较有显著差异(P＜0.05).JAK2在细胞浆、细胞核中的表达,在TG、OKC、AB三组间比较均有显著性差异(P＜0.05)(P＜0.01);在细胞变异亚型、棘皮瘤亚型、颗粒细胞亚型之间比较有极显著差异或显著差异(P＜0.001) (P＜0.01).STAT5在细胞浆、细胞核中的表达,OKC组分别与TG组、AB组比较,均有显著性差异(P＜0.05).结论:EPO/EPOR-JAK2-STAT5信号通路在TG组、OKC组、AB组之间,以及AB的各分型、亚型之间,表达显著差异.研究结果表明,EPO/EPOR在牙源性组织、瘤样病变、AB中通过JAK2-STAT5信号途径发挥作用,EPO/EPOR-JAK2-STAT5通路的异常活化与成釉细胞瘤的发生、发展有关.     

pH对重组CHO细胞生长、单抗表达及质量的影响北大核心CSCD

在1 L反应器中探究p H对CHO细胞生长、单抗表达及质量的影响。在1 L反应器中对p H进行探究,实验研究表明当p H为7.05时最适合CHO细胞生长和抗体表达,在此条件下培养时第9天获得最高细胞密度1.54×107cells/m L,在第11天获得最高抗体浓度1 355.71 mg/L。p H对p CO2、乳酸积累、抗体的单体含量、电荷异质性和糖基化也有较大影响,当p H在6.95至7.25之间时,高p H培养能够降低乳酸积累和p CO2,但是会导致抗体的碱性峰增加。p H两项培养能够降低细胞活力,从而提高抗体表达量。     

麦蚜的不同防治方法对麦田节肢动物功能团的影响

【目的】本文从功能团的角度研究了不同的麦蚜防治方法对小麦田节肢功能团的影响,为进一步研究小麦田内生物多样性提供了基础。【方法】本试验采用黄板、诱虫灯、糖醋液及3种方法综合使用的方法防治麦蚜,系统调查了这些防治方法对小麦田节肢功能团的影响。【结果】综合使用黄板、诱虫灯、糖醋液防治麦蚜能够提高昆虫群落和蚜虫亚群落的稳定性,降低小麦蚜虫种类和天敌种类丰盛度,采用防治措施的小麦田内捕食性天敌的群落稳定性均较差,单一防治措施的使用对麦田内昆虫群落相对丰盛度、蚜虫亚群落稳定性、捕食性天敌群落稳定性也有一定影响。【结论】在农田生态系统中,不同的防治方法对昆虫群落的影响不同。在实际应用中我们应合理搭配使用麦蚜的防治方法。     

急性百草枯中毒患者早期并发症的特点及其影响预后的临床研究

目的:探讨分析急性百草枯中毒患者早期并发症的特点及其影响预后因素。方法:对我院收治的87例急性百草枯中毒患者的临床资料进行回顾性分析,并按照是否中毒死亡,分成死亡组与存活组,检验并对比分析两组患者并发症发生率差别。结果:77例患者早期出现并发症状,发生率为88.51%,其中凝血功能障碍发生率最高,占52.9%;死亡组患者与存活组患者在肝功能障碍、凝血功能障碍、呼吸功能损害、胰腺功能障碍以及肌肉损害等并发症发生率对比,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:急性百草枯中毒患者具有较高的死亡率,应在早期关注患者出现的各种并发症症状,采取有效措施预防与治疗肝功能障碍、凝血功能障碍、呼吸功能损害、胰腺功能障碍以及肌肉损害等症状,有利于改善患者预后情况,值得临床进一步研究与探讨。     

HPLC-ELSD法测定不同炮制方法雪莲果中低聚果糖的含量北大核心CSCD

本文建立了雪莲果低聚果糖的HPLC-ELSD测定方法,分析不同炮制方法雪莲果中低聚果糖的含量。用不同方法处理新鲜雪莲果,然后超声提取雪莲果粉末中低聚果糖,采用HPLC-ELSD测定,色谱柱：华谱XAmide（4.6×250 mm,5μm）,流动相：乙腈∶水=75∶25,流速：1 m L/min,柱温：30℃,检测器：ELSD,漂移管温度70℃。方法学考察结果表明,蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖在0.406～2.030 mg/m L、0.420～2.100 mg/m L、0.456～2.280 mg/m L范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为101.4%、99.7%、98.6%,RSD分别为1.53%、1.29%、2.81%。该方法稳定、可靠、精密度高、重复性好,不同处理方法所得雪莲果粉末中3种低聚果糖的含量差别较大,其中用清水漂洗0.5 h,然后冷冻干燥所得雪莲果粉末中的低聚果糖含量最高。