刚地弓形虫亲环蛋白基因TgCyP真核表达质粒的构建及其在Hela细胞内的表达

亲环蛋白(cyclophilin,CyP)是一类广泛存在于原核和真核生物体内的胞溶性蛋白,是刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)速殖子的主要成分,能够诱导产生IL-12和IFN-γ,在控制弓形虫急性感染过程中起重要作用.本研究根据GenBank发表的TgCyP基因序列,设计并合成一对包含BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的引物,以cDNA为模板,应用PCR技术扩增TgCyP基因.PCR产物连接到pMD18-T克隆载体.用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切克隆载体,将TgCyP目的基因克隆到载体pVAX1,构建真核表达质粒pVAX1-TgCyP.将真核表达质粒转染Hela细胞,利用间接免疫荧光检测其在Hela细胞内的表达情况.结果表明扩增的TgCyP基因与GenBank上相应基因序列(U04633.1)的一致性达100%,构建的真核表达质粒pVAX1-TgCyP能在转染的Hela细胞中表达,其表达产物与刚地弓形虫阳性血清具有免疫反应性.本研究表明TgCyP有望作为弓形虫疫苗的候选抗原,将为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定基础.     

阿勒泰地区哈萨克族胆红素、血脂、尿酸水平与冠心病的相关性研究

目的:探讨新疆阿勒泰地区哈萨克族居民胆红素、血脂、尿酸水平与冠心病的相关性.方法:对本院80例哈萨克族冠心病患者胆红素、血脂、尿酸水平进行统计,随机抽取同期40例健康哈萨克族居民的胆红素、血脂、尿酸水平为对照组.结果:冠心病组血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、高密度脂蛋白胆固醇均显著低于对照组(P＜0.01),冠心病组血清尿酸、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平均高于对照组(P＜0.01).结论:哈萨克族胆红素、血脂、尿酸水平高低与冠心病有相关性.     

NF-κB在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

探讨NF-κB在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义。采用RT-PCR、蛋白质印迹（Western blot）和免疫组织化学法检测140例甲状腺乳头状癌及其癌旁正常甲状腺组织中NF-κB表达水平,分析其表达水平变化与临床病理特征的关系。结果表明,78.6%（110/140）甲状腺乳头状癌组织NF-κB mRNA表达量明显高于癌旁正常甲状腺组织,80.7%（113/140）甲状腺乳头状癌组织NF-κB蛋白表达量明显高于癌旁正常甲状腺组织,差异具有统计学意义（P<0.01）。免疫组化显示NF-κB的阳性表达主要定位于胞浆,在甲状腺乳头状癌组织的阳性率为81.4%,显著高于癌旁正常甲状腺组织（P<0.01）,NF-κB 表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移及临床病理分期有关,但与性别、年龄无关。NF-κB在甲状腺乳头癌组织中高表达,且NF-κB的异常表达与甲状腺乳头状癌的发生、发展及转移密切相关。     

沂蒙山区不同植被模式下坡耕花生地垄间水土流失与磷素输出

以沂蒙山区典型土地利用方式坡耕花生地为对象,研究5种种植方式(花生+狗牙根、花生+草木犀、花生+黑麦草、花生+三叶草、花生+空白对照)下,垄间水土流失和磷素流失特征.结果表明:花生地垄间植草能够有效控制水土流失,径流量为对照的55.1％～61.3％,其大小依次为花生+草木犀＞花生+狗牙根＞花生+三叶草＞花生+黑麦草;泥沙流失量为对照的3.4％～32.3％,其大小依次为花生+三叶草＞花生+草木犀＞花生+狗牙根＞花生+黑麦草.花生+黑麦草种植方式的控水、拦沙效果明显,植草初期泥沙流失量受降雨等因子的影响波动较大,拦沙率与对照相比差异较小,后期泥沙流失量不断减小并趋于稳定,拦沙率不断增加.花生地垄间植草较好地控制了磷素输出,总磷(TP)流失量为对照的52.8％ ～75.3％,其大小依次为花生+狗牙根＞花生+草木犀＞花生+三叶草＞花生+黑麦草;与对照相比,花生地垄间植草减少了27.5％～67.0％的颗粒态磷(PP)输出,但相对提高了水溶性全磷(DP)的输出.花生+黑麦草种植方式控制磷素输出效果最优,TP输出为对照的58.4％,PP流失为对照的27.5％.在植被生长期,各形态磷素流失存在差异,整个雨季DP输出以水溶性无机磷为主,花生收获后首场降雨中各形态磷素的输出负荷远超过最大雨强降雨磷素输出负荷.     

温度对花斑副沙鳅仔鱼发育、摄食及不可逆点的影响

2011年4～5月,研究了温度对花斑副沙鳅(Parabotia fasciata)早期仔鱼的发育、初次摄食时间、群体摄食率及不可逆点(PNR)的影响。结果发现,花斑副沙鳅仔鱼出膜后2 d已开始摄食;初次群体摄食率最高值出现在卵黄囊耗尽后的1～2 d,花斑副沙鳅仔鱼的摄食强度随温度升高而增大。仔鱼抵达PNR的时间随温度升高而缩短:22℃时,仔鱼的PNR出现在出膜后的8.0～9.0 d;26℃时,PNR为7.0 d;28℃时,PNR为5.5 d;30℃时,PNR为5.0 d。最大初次摄食率至PNR之间为不可逆饥饿期,22℃时为3.5 d,30℃时仅为1.5 d,说明温度越高,仔鱼耐受饥饿的能力越差,越不利于仔鱼的存活。研究认为,温度对花斑副沙鳅仔鱼发育、摄食及不可逆点的影响较大;在苗种培育过程中,应根据温度确定投饵时间,适时投饵对仔鱼的成活显得尤其重要。     

胸腔积液中肺腺癌细胞发生胶原化的形态观察与研究

目的胶原蛋白是细胞外基质的主要成分之一,我们在临床数千例恶性胸水转移的非小细胞肺癌细胞胞浆中常见到围绕细胞核或局灶状葱皮排列的纤维样结构,由此我们假设肺腺癌细胞在侵袭转移形成胸腔积液过程中发生与细胞外基质相同的结构变化,即肿瘤细胞胶原化形成“盔甲”式保护膜起到对肿瘤细胞结构及功能的支撑,达到抵御化疗药物、毒素的穿透和放射线的轰击,提高了自我保护能力,适应新的肿瘤细胞增生微环境。方法TCT方法选取224例肺腺癌细胞学标本,其中胸腔积液标本144例,肺泡灌洗液40例,痰液标本40例,24例为良性胸腔积液作为对照。常规制成细胞包埋块,切片、HE染色及CK7、TTF-l、vimintin的免疫细胞化学染色。透射电镜观察肿瘤细胞内部结构。Masson特殊染色,胶原蛋白工、Ⅱ、Ⅲ亚型染色,Western-blot蛋白检测。观察肺腺癌细胞是否存在胶原蛋白亚型及肺腺癌不同标本的表达情况。结果Masson细胞化学染色显示胶原纤维在恶性胸腔积液、支气管肺泡灌洗液及痰肺腺癌标本中的表达率分别为59．7％（sG／144）、0％（0／40）、o％（0／40）,在良性标本中不表达均为阴性（0／24）。免疫细胞化学结果显示：COLlAl、COL2Al和COL3Al在肺腺癌细胞中的阳性表达率分别为22．6％（38／1G8）,5．4％（9／1G8）,22．6％（38／168）,阳性表达主要定位于胞浆,而在增生的上皮细胞中不表达,统计学分析结果显示COLlAl、COL3Al的表达率要显著高于COL2Al的表达率（P=0．024）,并且我们发现COLlAl与COL3A1的表达成正相关性（r=0．886,P=0．000）。透射电镜可观察到在肿瘤细胞胞浆中可见多量纤维状物质。结论本研究从形态学上观察到在转移的肺腺癌细胞胞浆内有一些围绕胞核呈葱皮样改变的纤维样结构,结果表明肺腺癌细胞可以产生胶原蛋白,     

恶性胸腔积液中肺腺癌细胞的EGFR、ERCC1、TYMS、TUBB3和RRM1的表达及分子生物学意义

目的探讨EGFR、ERCCl、TYMS、TUBB3和RRMl在肺腺癌中的表达及分子生物学意义,为晚期肺癌患者的联合化疗提供参考。方法选取恶性胸腔积液中肺腺癌患者112例,采用免疫细胞化学方法对其进行EGFR、ERCCl、TYMS、RRMl、TUBB3的表达检测并根据EGFR不同的表达强度来统计ERCCl、TYMS、TUBB3和RRMl表达率的差异。结果在112例恶性胸腔积液中EGFR的阴性表达率为0．9％,弱阳性表达率为15．2％,阳性表达率为40．2％,强阳性表达率为43．7％,ERCCl的阳性表达率为40．2％,TYMS的阳性表达率为41．1％,TUBB3的阳性表达率为75％,RRMl的阳性表达率为83％。在不同EGFR表达强度下,ERCCl、TYMS和TUBB3各蛋白表达率不同且具有差异性。结论根据上述蛋白表达情况的不同,可对临床选择不同化疗方案提供参考意见。     

甲状腺上皮样血管内皮瘤临床病理及分子生物学特点分析

为探讨甲状腺上皮样血管内皮瘤的病理形态特征、免疫表型和鉴别诊断,对2例甲状腺上皮样血管内皮瘤进行临床资料分析、随访,并观察其病理形态及免疫组织化学染色分析。2例甲状腺上皮样血管内皮瘤均位于甲状腺下极,实性,切面暗红色,镜下由增生的血管内皮细胞构成,具有上皮样细胞形态,胞浆较丰富,嗜酸性,多呈空泡状,细胞间可见血管腔,免疫组化:CD34(+)、Vim(+)、细胞角蛋白(cytokeratin,CK)(-)、甲状腺球蛋白(thyroid globulin,TG)(-)。上皮样血管内皮瘤是一种罕见的甲状腺肿瘤,其生物学行为属于低度恶性。     

大熊猫西氏贝蛔虫幼虫在小鼠体内的移行、分布及发育

本文追踪观察了大熊猫西氏贝蛔虫(Baylisascaris schroederi)感染小鼠后,其幼虫在小鼠体内的移行、分布及生长发育。小鼠经胃管感染5000虫卵后,二期幼虫在小肠内孵化,由肠壁钻入并经门静脉系统分布于肝、肺,部分幼虫可随动脉系统分布到脑、肾、脾、肌等组织器官内。妊娠母鼠感染实验表明,幼虫不经胎盘传给仔鼠。感染晚期幼虫以囊化幼虫和自由幼虫两种形式存在,它们主要分布在肝内,少数分布于肾和脑内。 小鼠于感染后第18天幼虫在其肝内进行第二次蜕皮。三期幼虫主要在肝内寄生,虫体大小及内部组织器官均比二期幼虫有进一步的发育。小鼠体内未见四期幼虫。     

宫颈脱落细胞中HCCR的表达及意义

目的研究人宫颈癌基因(HCCR)在宫颈脱落细胞中的表达情况,探讨其对宫颈癌及癌前病变诊断的意义。方法采用Western blot及免疫组化SP法对79例宫颈脱落细胞中HCCR蛋白进行检测,其中正常宫颈上皮脱落细胞11例、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)53例、宫颈癌(CCa)15例。所有标本均来自中国医科大学附属第一医院。结果HCCR基因在正常宫颈脱落细胞中不表达或阳性率较低,在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中表达阳性率随病变加重而逐级升高。结论HCCR与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发生密切相关,检测宫颈脱落细胞中HCCR蛋白的水平对宫颈癌的筛查和诊断可能具有重要意义。