Dimerization of two novel apoptosis-inducing proteins and its function in regulating cell apoptosis

Apoptosis (or programmed cell death) was firstly described by Kerr[1] in 1972. Since bcl-2 cDNA was cloned by Cleary et al.[2] in 1986, many apoptosis-related genes have been found in human or mammalian cell lines. The bcl-2 family[35] containing 23 genes, the caspase family[68] bearing 14 members and the TNF family[9,10] are the most clearly elucidated ones. With the study of apoptosis going deeper, people have realized that cell apoptosis is impor-tant in development and homeostasis of mu…     

疯牛病(BSE)和早老性痴呆(CJD)的来历和发展──朊蛋白的自我复制之谜

１概述２５０年前英国的牧人注意到羊的一种致死性疾病,症状表现为兴奋－瘙痒－共济失调－全身瘫痪－死亡,英语名称为Ｓｃｒａｐｉｅ（羊痒疫）。８０年代ＢＳＥ开始袭击英国,以后在欧洲大陆其他国家也相继发现,且发病率逐年上升。受感染了的牛经一定的潜伏期后发病,具有一定的致病性,死后的尸体解剖表明,牛脑内灰质呈海绵状,神经元大量丧失,以及淀粉变性斑增生。近年来在英国及其他国家爆发造成了大量的经济损失。解剖分析表明,牛脑呈海绵多孔状,与羊痒疫的症状相似。人类中的瘙痒症则称为海绵状脑神经蜕化病（ｔｒａｎｓｆｅｒ…     

抗菌肽牛乳铁多肽素（LfcinB）在毕赤酵母中的表达及活性鉴定

利用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastors)系统表达抗菌肽——牛乳铁多肽素(bovine lactoferricin,简称Lf-cinB),获得的分泌型表达产物具有较强的抗菌活性。首先将人工合成的LfcinB基因片段克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得的重组质粒pPIC9K-LfcinB通过限制性内切酶SalⅠ酶切线性化,经电穿孔法转化入毕赤酵母细胞SMD1168内。G418抗性筛选,得到高拷贝转化子,经PCR检测LfcinB基因与毕赤酵母染色体稳定整合。阳性克隆经甲醇诱导表达LfcinB。结果表明,抗菌肽牛乳铁多肽素基因已经整合到酵母细胞基因组中并获得表达,表达产物具有较强的杀菌作用。     

RNA病毒基因组和转录复制多样性的分子基础

自然界中RNA病毒的种类和数量比DNA病毒多得多,根据基因组类型,RNA病毒可分为多种类型,许多研究者认为,存在于古细菌Myxobacteria中,仅仅有一个逆转录酶基因的反转子（Retron)可能是所有病毒的祖先,进化的模式如下,反转子→反座子→反转录转座子→反转录病毒→副反转录病毒→DNA病毒,RNA病毒转录。／复制在很多特征上与DNA病毒迥然不同,依赖于RNA的RNA聚合酶是RNA病转录／复制的主要催化剂,RNA病毒基因组转录和复制都从3'端poly(A)或类tRNA结构或其他结构起始,内部终止是转录,通读到5'末端终止是复制,RNA病毒的模板有正链病毒（RNA模板,负链病毒RNA模板和全长正负链反基因组RNA模板,RNA模板的选择调控机制非常复杂,目前知之甚少,选择模板,RNA聚合酶与转录因子结合形成复制体是两种主要的调控方法,另外,5'UTR和3'UTR也可以调控RNA病毒的转录。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白G主要抗原表位的表达和抗原性检测

利用PCR拼接技术,合成含单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白G(gG2)抗原表位(氨基酸序列第561～578位)的片段,并进一步利用基因工程技术获得该表位的双拷贝片段,克隆入pET-KDO表达载体进行原核表达.经IPTG诱导后,高效表达出分子量大小约为39kDa的融合蛋白,经Western blot检测具有良好的抗原性.表达的融合蛋白经凝血酶切割和亲和层析纯化,得到双拷贝gG2(561～578aa)目的蛋白,经ELISA检测具有良好的灵敏度和特异性.该重组抗原的构建和表达可用于HSV-2特异性血清学诊断的研究.     

几种鱼肝线粒体基因组的研究

我们用简易方法提纯了武昌鱼、乌鱼、草鱼和白鲢肝脏线粒体(mt)DNA。武昌鱼mt DNA经五种限制酶BamHI、BglⅡ、BglI、EcoRI和HindⅢ单酶完全酶解分别产生2、2、3、3和3个片段。乌鱼肝mt DNA用EcoRI、BamHI、pstI和BglⅡ单酶解分别得到1、2、2和2个片段。草鱼mt DNA亦作相应的酶解。所有各片段经琼脂糖凝胶电泳测定出它们的分子量(MW):武昌鱼肝mt DNA的MW10.2×10~6道尔顿,长约16.6kb;乌鱼肝mt DNA MW9.99×10~6道尔顿,长16.2kb;草鱼mt DNA的分子量10.13×10~6,长16.22×10kb。用七对限制酶双酶全酶解构建出武昌鱼mt DNA五种限制酶图谱。用六对限制酶双酶解构建出乌鱼mt DNA四种限制酶图。以酵母线粒体15S rRNA为探针对武昌鱼、白鲢鱼和乌鱼mt DNA12S rRNA基因进行了初步定位。     

麻疹病毒血凝素基因工程抗原及其抗原性检测(英文)

将麻疹病毒 (Nepal株 )的血凝素 (hemagglutinin)基因插入真核表达载体pIRES EGFP ,并在HeLa细胞中表达 .因其较低的表达量 ,所以将其截短 ,去除跨膜区 .使这个截短的HA基因与绿色荧光蛋白基因融合 ,并克隆至原核表达载体pET 2 8b中 .将重组质粒转入大肠杆菌中表达 ,产生了分子量约为 90kD的融合蛋白 .通过ELISA和Western印迹来检测这个基因工程蛋白的抗原性 .在检测一系列的血凝素阳性或阴性的人血清中 ,这个融合蛋白的阳性检出率为 90 % ,阴性检出率为 10 0 % (与市售麻疹病毒诊断试剂盒相比较 ) .由于此HA蛋白是原核表达产物 ,回避了真核表达系统复杂的操作过程和昂贵的费用 ,所以 ,这个麻疹病毒血凝素基因工程抗原有望成为一种新型、便捷的麻疹病毒诊断试剂     

携带p53基因的重组腺病毒的构建及对肿瘤细胞抑制的研究

１　材料与方法１１　质粒ｐＣＭＶｐ５３ＢＡＭ由美国约翰·霍普金斯肿瘤中心ＢｅｒｔＶｏｇｅｌｓｔｅｉｎ教授赠送［５］;ｐＲＳｅｔＡ购于Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司;ｐＣＡ１３和ｐＢＨＧ１１为ＭｉｃｒｏｂｉｘＢｉｏｓｙｓｔｅｍＩｎｃ．产品。ｐＢＨＧ１１包含腺病毒Ａｄ５基因组３６ｋｂ中的约３４ｋｂ序列,但Ａｄ５Ｅ１区１８８ｂｐ至１３３９ｂｐ缺失,代之以氨苄青霉素抗性基因和复制起始位点。ｐＢＨＧ１１缺少包装信号φ（２２ｂｐ至３４２ｂｐ）和Ａｄ５Ｅ３区（２７８６５ｂｐ至３０９９５ｂｐ序列）。ｐＣＡ１３…     

两种杆状病毒的限制性消化和p10基因的定位

以5和6种限制性内切酶分别消化昆虫杆状病毒SeNPV和LsNPV DNA,求出它们的基因组平均长133kb和164kb.为了定位这两种杆状病毒的p10基因,构建了含有AcNPVp10基因序列的两个探针载体pAcHP106和pAcEP102.从探针载体回收0.18kb和0.42kb的AcNPV p10基因序列,制备探针,与SeNPV和LsNPV的酶切片段杂交,得到清晰的杂交图谱,准确的定位了这两种病毒的p10基因.