文昌鱼Hedgehog基因敲除和突变体表型分析

文昌鱼隶属脊索动物门头索动物亚门,是无脊椎动物到脊椎动物的过渡类群,其躯体结构简单,是研究胚胎发育的理想材料。本文以文昌鱼为实验对象,利用TALEN敲除技术对Hedgehog(Hh)基因在胚胎发育中的功能进行了研究。在文昌鱼Hh基因翻译起始位点下游附近选取TALEN目标位点,根据此序列组装相应TALEN重组质粒,体外合成mRNA,向未受精卵注射mRNA后,经体外受精获得F₀代胚胎。效率分析显示,靶向该基因的TALEN mRNA可导致F₀代胚胎在相应基因组区域发生突变的比例为34%。对部分F₀个体所产配子筛查发现,TALEN引起的突变可进入配子,将其中1尾突变类型为8 bp缺失的雄性个体与野生型雌性配对获得F₁群体,对F₁群体逐尾筛查,从中获得多尾携带8 bp缺失的杂合子;这些杂合子相互配对所产的F₂代胚胎,其中约有1/4个体在幼体早期出现躯体前端和尾向下弯曲、脊索前端腹侧的中胚层组织发育不全,不能开口等;随着幼体生长发育,躯体前端和尾部进一步卷曲,口部仍未形成,左右各形成一个口前窝,内柱和鳃裂位于躯体腹侧,最终因无口摄食而死亡。基因型分析发现,上述畸形胚胎均为Hh纯合突变体,其与杂合子及野生型比例分布符合孟德尔遗传定律,表明这些发育畸型的特征与Hh基因功能缺失有关。     

三种药物对大熊猫出血性肠炎致病菌的MIC、MBC测定

本文对13株侵袭性大肠杆菌O152(EIECO152)作了体外抗菌素抑菌、杀菌的定量试验,这13株大肠杆菌是1988年9月至今从13例大熊猫出血性肠炎病分离出的代表株．代表了不同的分离年代、不同的病兽来源。试验目的是协助临床用药,监测致病菌对敏感药物耐药菌株出现情况和寻求其它敏感药物。     

重组葡激酶对小型猪冠脉血栓的溶栓作用研究*

目的: 评价重组葡激酶的溶栓效力,并与相同作用方式的重组链激酶进行比较。方法: 30只中国实验小型猪分成5组,分别为溶剂对照组、阳性药对照组和三个重组葡激酶组,每组6只,采用麻醉动物、手术开胸、直流电刺激形成冠脉血栓;在冠脉血栓形成30 min后开始静脉给药,采用先推注、再蠕动泵恒速输注的方式给药;溶剂对照组静脉推注对照液,阳性药对照组静脉给予重组链激酶4 mg·kg^-1,三个重组葡激酶组分别静脉给予4 mg·kg^-1、2 mg·kg^-1、1 mg·kg^-1重组葡激酶,静脉推注体积为5 ml,1 min内注毕,输注速度为0.5 ml·min^-1,60 min内输毕,120 min后放血处死动物。于给药前及给药后30、60、120 min取静脉血,实验结束后取血栓形成部位的冠脉血管段,分别检测优球蛋白溶解时间(ELT)、血纤维蛋白原含量(Fbg)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)和伤口出血量,检测冠脉血栓溶解率、心肌缺血程度及缺血范围。结果: 与溶剂对照组相比,试验组ELT明显缩短(P＜0.05或P＜0.01),FDP 明显升高(P＜0.05或P＜0.01),较少量实验动物Fbg降解超过20%,对小型猪血压及心率无明显影响。与对照组相比,试验组高、中2个剂量组,最大血栓面积分别减少34.3%、15.4%(P＜0.05)。与等剂量的重组链激酶相比,重组葡激酶对电刺激引起的冠脉血栓具有更强的溶栓作用(P＜0.05或P＜0.01),引起的出血副反应少。结论: 重组葡激酶对小型猪冠脉血栓有较好的溶栓作用,相比重组链激酶,溶栓速度快、具有更高的纤维蛋白专一性,出血副反应较少。综合比较, 2 mg·kg^-1重组葡激酶具有较好的临床疗效和安全性保障。     

喉癌间质肥大细胞的形态学特点及分布意义的探讨

应用免疫组织化学和透射电镜技术对 45例喉鳞癌组织 (其中 35例取癌中心为癌组 ,另 10例取癌旁组织为癌旁组 )中的肥大细胞 (MC)进行研究。结果 :1.癌旁组织中有丰富的 MC浸润而癌间质中 MC脱颗粒明显 ;2 .阿尔辛蓝·藏红 (AB· S)染色 ,二组 MC的组化性质显示出了差异 ;3.喉癌细胞增殖细胞核抗原 (PCNA)的阳性表达与 MC分布之间存在一定的相关性 ;4.癌间质 MC属类胰蛋白酶及糜蛋白酶 (TC)型 ,常与癌细胞有紧密接触 ,并可见 MC颗粒脱向癌细胞。结果提示 :MC与癌细胞关系密切 ,可能有抑制癌细胞增殖的倾向。     

M16添加牛磺酸和EDTA支持昆明白小鼠体外受精并发育至囊胚

在以往研究工作的基础上证明了通过添加2.5mmol/L的牛磺酸和0.1mmol/L的EDTA至M16培养液中,可支持昆明白小鼠的体外受精（IVF）,并支持受精卵突破2－细胞阻滞发育至囊胚期。本研究进一步证明了牛磺酸和EDTA在昆明小鼠早期胚胎发育和克服2－细胞阻滞中起关键作用。 Abstract:The results of our early experiments show that the 2-cell block can be overcome by culturing zygote in modified M16 ,modified CZB and TE medium.Our research shows that the taurine and EDTA play key role in overcoming 2-cell block in Kunming mouse.The results show that the addition of taurine and EDTA to M16 medium can support the IVF and develoment to blastocyst in vitro in Kunming strain mice.This is the first report that M16 medium added with taurine and EDTA can be used in both IVF and culture medium to overcome the 2-cell block of embryo development in Kunming strain mouse.     

不同光波长下大光金鱼花叶片超微弱发光的光子计数统计

用生物超微弱发光探测技术,对植物叶片的超微弱发光透过滤波片进行测量,并用量子光学中的光子计数分布统计方法得到的结果表明,不同波长下,大光金鱼花叶片的光子计数分布不同,但幼叶和老叶的光子计数分布的规律基本相同,而成熟叶片光子计数分布的规律比较紊乱。     

BKca蛋白通过调节SR-B1的表达介导胆固醇转运

[目的]探讨BKca通道蛋白对B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)表达和调控胆固醇转运的影响。[方法]人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外传代培养2~5代,分为对照组、过表达BKca组和基因干扰BKca组。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测BKca的α及β亚基、SR-B1 mRNA和蛋白表达水平及胆固醇检测试剂盒检测胆固醇流出水平。[结果]与对照组相比,BKca过表达后SR-B1 mRNA及蛋白表达水平明显升高和基因干扰BKca后SR-B1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(均P0.05)。BKca过表达后胆固醇流出水平明显升高,而基因干扰BKca后的胆固醇流出水平明显下降(均P0.05)。[结论]BKca通道蛋白上调SR-B1的表达,促进细胞内胆固醇的流出。     

人ApoE转基因小鼠与TGE_（7－2） TGE_（7－3）转基因鼠系的建立

用含小鼠金属硫蛋白（ＭＴ－１）基因启动子与突变的人ＡｐｏＥ７基因的６．０ＫｂＤＮＡ片段作为目的基因制备转基因小鼠,利用显微注射法将目的基因导入４４１枚受精卵,移植于２０只假孕鼠,其中１５只受孕,共产仔鼠８０只,经ａ－３２Ｐ斑点杂交与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法鉴定出两只整合有人ＡｐｏＥ基因的转基因雌鼠,其拷贝数分别为２和５。将两只首建鼠（雌性Ｆｏ代）与正常雄鼠交配,建立Ｆ１代转基因鼠系ＴＧＥ７－２和ＴＧＥ７－３,为进一步从整体上研究ＡｐｏＥ在脂质代谢中的作用以及ＡｐｏＥ与动脉粥样硬化和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病的关系创造条件。     

抗癌药ADM与DNA嵌插复合物的模型化研究

通过对高效抗癌药阿霉素(Adriamycin)与三碱基片段理论DNA受体的嵌插相互作用的快速能量最小化计算,其中包括阿霉素以三种嵌插方式,与两种核酸受体(d(C—GC)和d(T—AT)的相互作用,以理论上论证了大沟平行嵌入方式,即Pigram-Fuller-Hamilton模型为能量最优模型,讨论了非嵌插相互作用在ADM—DNA(3bp)体系最优构象选择上的主导作用,同时,说明了阿霉素的嵌插选择性依赖于嵌插方式.     

山羊草(Aegilops)物种作母本与小麦远缘杂交的评价

研究了山羊草不同物种作母本,在不借助胚培等特殊措施的情况下与不含隐性可杂交基因的小麦推广品种杂交、回交及杂种自交情况,结果表明(1)山羊草物种作母本,小麦推广品种作父本进行杂交是一种很有效的方式;山羊草物种作母本容易与小麦进行杂交,但回交和自交较困难;回交与自交相比时,回交容易些;(2)同一物种的不同基因型材料在与小麦杂交、回交及杂种自交时存在大量变异;(3)杂交结实率与以后的回交或自交并不相关,但是杂种的回交和自交之间相关;(4)山羊草物种与小麦杂交、回交及其杂种自交的结实率与其染色体组构成并无明显相关.