CRISPR/Cas9在丝状真菌基因组编辑中的应用

丝状真菌(filamentous fungi)通常指那些菌丝体较发达且不产生大型肉质子实体结构的真核微生物。丝状真菌不仅在自然界物质循环中发挥着重要作用,还与人类健康和工农业生产有着紧密的联系。然而,对丝状真菌进行遗传操作相对困难,极大地妨碍了丝状真菌的遗传学研究。成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关系统(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9, CRISPR/Cas9)是近年来发现的一种存在于细菌和古菌中保守的获得性免疫防御机制。最近,CRISPR/Cas9被开发成为了一种方便灵活的基因组编辑技术。目前,该技术已经广泛应用在不同物种的基因组编辑中。本文概述了CRISPR/Cas9在丝状真菌基因组编辑中的应用进展,旨在为开展该领域的研究工作提供参考。     

IL—1预刺激对反义IRAK—1寡核苷酸抑制NF—kB活化的影响

实验分为白介素１（ＩＬ－１）预处理组和非预处理组,脂质体介异反义ＩＬ－１受体相关激酶－１（ＩＲＡＫ－１）寡核苷酸（ＯＤＮ）转染ＨｅｐＧ２细胞,用ｗｅｓｔｅｒｎ杂交分析ＩＲＡＫ－１表达水平,以夹心酶联免疫吸附测定法测定ＮＦ－ｋＢ含量。结果表明,ＩＬ－１非预处理组反义ＩＲＡＫ－１ＯＤＮ不能抑制ＩＲＡＫ－１表达和ＮＦ－ｋＢ活化,而预处理组ＩＲＡＫ－１表达和ＮＦ－ｋＢ活化受到明显抑制,反义ＩＲＡＫ－１ＯＤ     

亚洲蝮属两种的种下分类研究(蛇亚目:蝮亚科)

对分布在辽东半岛和山东半岛的“黑眉”蝮蛇,依据Ｍａｙｒ（１９５３）两个样本间平均数比较的亚种划分的经典方法,进行分类学研究,辽东半岛半蛇岛蝮应为：蛇岛蝮千山亚种Ｇｌｏｙｄｉｕｓ ｓｈｅｄａｏｅｎｓｉｓ ｑｉａｎｓｈａｎｅｎｓｉｓ ｓｓｐ;ｎｏｖ．山东半岛产岩栖蝮为：岩栖蝮长岛亚种Ｇｌｏｙｄｉｕｓ ｓａｘａｔｉｌｉｓ ｃｈａｎｇｄａｏｅｎｓｉｓ ｓｓｐ;ｎｏｖ．。     

NDV山东分离株的生物学特性及其HN基因的克隆与序列分析*

2004年从山东某鸡场发病蛋鸡群中分离到一株新城疫病毒(编号:ShD-2-04),对其生物学特性进行了研究,并对其HN基因进行了克隆和序列分析。结果表明:该病毒的最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间(MDT)为50.4,1日龄SPF鸡脑内接种分离病毒致病指数(ICPI)为1.85,6周龄SPF鸡静脉接种致病指数(IVPI)为2.42,表明该病毒具有新城疫强毒株的一些特征;其HN基因开放性阅读框架(ORF)为1,716bp,编码571个氨基酸;与国外发表的部分新城疫病毒强毒株和弱毒株之间相应序列进行比较,核苷酸     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列的测定

以新鲜蚯蚓为原料,经过保温抽提、乙醇沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析、Lysine-Sepharose4B亲和层析以及SDS-PAGE制备电泳等纯化步聚,得到一种纯度达95％以上的蚯蚓纤溶酶．该酶具有强烈的溶解纤维蛋白的作用及蛋白酶活性,平板法测得其比活性为90OUK单位／毫克蛋白,TAME法测得其比活性为2500O单位／毫克蛋白．酶学性质研究表明其最适反应温度为65℃,最适反应PH值为8．5．该酶的分子量为33kD,等电点为pH3．5．还对该酶进行了氨基酸组成分析,并测定了其N端部分序列．     

重组酶法定量分析吡咯喹啉醌

用ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｃｅｌ和ＣＭ－ｃｅｌｕｌｏｓｅ柱层析的方法从Ｃｏｍａｍｏｎａｓｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉ菌体中纯化得到一定纯度的脱辅基的乙醇脱氢酶。在含３ｍＭＣａＣｌ２的Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ缓冲液（２０ｍＭ,ｐＨ７．０）中,该酶能与ＰＱＱ重组成有活性的全酶,测出的全酶活性大小与外加ＰＱＱ的量成正比,从而定量分析ＰＱＱ。该法专一、灵敏、可靠。     

生长因子颗粒蛋白前体和肿瘤坏死因子受体基因启动子区改变与阿尔茨 海默病的相关性研究

目的:探讨生长因子颗粒蛋白前体(PGRN)、肿瘤坏死因子受体(TNFR)基因启动子区改变以及全基因组DNA甲基化与阿尔茨海默病的相关性。方法:收集阿尔茨海默病患者血液样本80例以及健康对照血液样本80例,PCR扩增PGRN和TNFR基因启动子区并进行测序,观察两组间的单核苷酸多态性位点是否有差异。同时,用甲基化特异性PCR法检测启动子区DNA甲基化情况以及用ELISA法检测全基因组DNA甲基化水平。结果:在TNFR基因启动子区域发现阿尔茨海默病和对照组之间在多态性位点rs4149570和rs4149569有显著性差异(P0.001和P=0.033)。阿尔茨海默病患者全基因组甲基化水平为(0.79±0.29)%,显著低于对照组的(1.00±0.36)%(P0.001)。结论:TNFR基因多态性位点rs4149570和rs4149569的变异可能与阿尔茨海默病相关,全基因组甲基化水平降低可能与阿尔茨海默病相关。     

029泰国人流感H5N1病毒全基因组特征

2001年，将H5N1禽流感病毒分为A～E5种基因型。2002年后，未再发现这些基因型，而出现了8种新的基因型（V、W、X1、X2、X3、Y、Z和Z^＋）。2003年末到2004年5月，H5N1流感A病毒的再现首次波及大部分东南亚国家，然而，仅越南和泰国报告了人类病例。人们一般认为2003～2004在东亚和东南亚H5N1病毒有共同的起源，且已发现它们在抗原性上应有别于1997年和2003年初的病毒，     

小毛茛(Ranunculus ternatus Thunb.)花粉流潜能初探

在自然居群中对小毛茛传粉机制与距离作了观测,并对开花后花粉萌发能力的变化作了研究,结果是：该种兼具虫媒或风媒传粉机制,以虫媒传粉为主;传粉距离多数局限于２ｍ以内,但不排除远距离传粉的可能性;体外萌发试验表明,该种花粉萌发率在开花第一天甚低,开花后２４ｈ达到最高值。作者推测,小毛茛花粉以近距离散布为主,但具有远距离传播的潜能。     

吲哚美辛栓剂对预防ERCP术后高淀粉酶血症及胰腺炎的效果观察

目的:探讨吲哚美辛栓剂对预防ERCP术后高淀粉酶血症及胰腺炎的效果。方法:选取2010年10月-2015年6月收治入院的行ERCP手术的患者300例,随机分为观察组及对照组各150例,观察患者ERCP术后立即应用吲哚美辛栓剂直肠给药,对照组给予安慰剂栓剂,术后3 h,24 h检测血清淀粉酶,观察高淀粉酶血症及胰腺炎的发生情况。结果:术前两组血清淀粉酶比较差异无统计学意义(P0.05);术后3 h,24 h两组血清淀粉酶均升高,且观察组高于对照组,差异均具有统计学意义(t=5.794、10.816,P均0.05)。观察组高淀粉酶血症及ERCP术后胰腺炎的发生率明显低于对照组,差异均具有统计学意义(x~2=5.927;2.160,P0.05)。结论:直肠给药吲哚美辛栓剂可明显降低ERCP术后血清淀粉酶量,降低高淀粉酶血症及ERCP术后胰腺炎的发生率。