激光辐照对离体质粒DNA的断裂效应

利用低功率的Ｈｅ－ Ｎｅ 激光辐照离体质粒ＤＮＡ,并用离子束和紫外线为对照,分析了质粒ＤＮＡ的单双链断裂效应。结果表明：Ｈｅ－ Ｎｅ 激光辐照可诱发质粒ＤＮＡ 断裂,且断裂频率随辐照剂量增大而提高;Ｈｅ－ Ｎｅ 激光辐照后的质粒超螺旋双链ＤＮＡ存活率剂量曲线不同于紫外线和氮离子束。Ｈｅ－ Ｎｅ 激光诱发双链断裂的频率低于氮离子束和紫外线。     

表达浑球红细菌hemA基因生产5-氨基乙酰丙酸的研究

5-氨基乙酰丙酸（5-aminolevulinate acid,ALA）在农业,工业,医药业具有广泛的应用。ALA由5-氨基乙酰丙酸合酶（5-aminolevulinate acid synthase, ALAS）催化产生,其生物合成受终产物血红素的反馈抑制。本研究克隆一种浑球红细菌的hemA基因,序列分析其与已报道的基因具有96％的同源性,蛋白质编码区域也发生改变,并利用生物信息学软件进行同源关系的分析。采用大肠杆菌重组技术,构建表达载体pET28a—hemA,表达了有活性的浑球红细菌（Rhodobacter sphaeroides）的ALAS,研究了IPTG诱导和PH对研究ALAS的影响,同时分析了重组菌株合成ALA的能力,测定胞外产量。结果表明,在PH6．5,30mmol／L琥珀酸和60mmol／L甘氨酸培养条件下,胞外ALA的最大合成量达到669mg／L。     

浙江辐照对离体质粒DNA的断裂效应

利用低功率的Ｈｅ－Ｎｅ激光辐照离体质粒ＤＮＡ,并用离子束和紫外线为对照,分析了质粒ＤＮＡ的单双链断裂效应。结果表明：Ｈｅ－Ｎｅ激光辐照可诱发质粒ＤＮＡ断裂,且断裂频率辐照剂量增大而提高;Ｈｅ－Ｎｅ激光辐照后的质粒超螺旋双链的ＤＮＡ存活率剂量曲线不同于紫外线和氮离子束。Ｈｅ－Ｎｅ激光诱发双链断裂的频率低于氮离子束和紫外线。     

玉米花粉粒直接PCR技术研究

利用成熟花粉粒制成悬液作为玉米基因组DNA模板直接进行PCR扩散,研究了不同花粉悬液浓度、花粉上清液对RAPD-PCR的影响,结果表明：花粉悬液浓度在4μg/50μl以上,用10碱基随机引物均能扩增出较清晰的PCR条带,且与叶片按改良Guidet法提取的DNA模板扩增的RAPD带型无明显差异,利用花粉悬液能有效地进行基因组DNA变异的RAPD分析和基因SCAR标记的检测。玉米单株花粉量可用于数百次以上的PCR反应,较叶片等植物组织用常规法提取DNA快速、简便、廉价,可有效地应用于以PCR为基础的植物基因组DNA变异,农艺性状的RAPD标记和分子标记辅助育种的研究。     

植物激素对大岩桐愈伤组织诱导和芽分化增殖的影响

以大岩桐(Sinningia specioca)的幼嫩茎、叶片为外植体,通过正交实验的方法探讨不同浓度和比例的植物激素对愈伤组织诱导和芽分化增殖的影响。实验结果表明:大岩桐愈伤组织的形成最佳激素组合为2,4二-氯苯氧乙酸2.0 mg/L 6苄-基嘌呤0.1 mg/L 萘乙酸0.3 mg/L;芽分化的最佳激素组合为6苄-基嘌呤0.5mg/L 萘乙酸0.1 mg/L。     

^60Co-γ射线辐照对玉米淀粉特性及降解的影响

以60Co为辐射源,研究了0～1 000 kGy间不同辐照剂量对玉米淀粉物理和化学性质以及降解的影响,分析了辐射剂量与寡糖生成间的关系.结果表明:辐射可导致淀粉的聚合度下降,酸度、溶解度随辐射剂量的增加而上升,透明度的变化较复杂,总体呈增加趋势.辐射对淀粉的降解作用明显,辐射剂量与降解程度呈正相关性,在0～1 000 kGy间,随辐射程度的加大,淀粉中总糖的含量下降,还原糖含量上升,可超滤部分增多.在1 000 kGy时,可溶性还原糖含量达到最大值,为43.9 %,其中分子量大于3 000 Da和1 000～3 000 Da(DP:6～18)间的可溶性低聚糖含量达到最高,分别为33.6 %和7.2 %,而在300 kGy时分子量小于1 000 Da的低聚糖含量达到最大,其值为4.3 %.     

利用单酶切cDNA—AFLP技术分离玉米对生性状相关基因差异表达片段

为了深入地研究对生玉米这一珍贵的高产育种种质资源和植物形态发育突变材料形成的分子机理和调控机制,通过构建合适的玉米对生、互生近等基因系总RNA池,首次采用改进的单酶切cDNA-AFLP技术,对扩增的玉米对生性状相关基因的差异表达片段进行筛选、分离和生物信息学分析.结果共获得29条差异表达片段:对生玉米增强表达23条、抑制表达6条.选取其中5条(STT-TT、STT-TC、STT-CC、STT-GC、SCT-TG)增强表达片段进行克隆和测序,序列同源性分析表明:STT-GC与烟草细胞色素b5基因有80%的同源性、SCT-TC与玉米、牛筋草、大麦、狗尾草、水稻等的α-微管蛋白基因有90%以上的同源性.实验证明:单酶切cDNA-AFLP技术是一种研究玉米基因差异表达的实用方法.