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转基因水稻“科丰6号”实时荧光PCR定性定量检测方法研究 总被引:1,自引:0,他引:1
旨在建立转基因水稻"科丰6号"外源基因和边界序列的实时荧光PCR检测方法,为科丰6号定性定量检测提供技术支持。根据外源基因和边界序列信息,设计实时荧光PCR探针引物,优化体系,对不同转基因产品和不同转基因含量的"科丰6号"水稻进行检测。结果显示,所设计的引物探针具有很好的特异性,与其他转基因水稻品系、转基因玉米、转基因棉花、转基因番茄和非转基因水稻均无非特异性反应,对转基因水稻"科丰6号"的检测灵敏度达到0.01%。建立的科丰6号实时荧光PCR检测方法重复性好、灵敏度高,能够达到目前国际上转基因产品定量检测的标准,为该水稻品系的定性定量检测提供技术支持。 相似文献
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利用表面等离子体共振仪检测黄瓜花叶病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究一种便捷、高效地检测黄瓜花叶病毒(CMV)的方法。方法:利用表面等离子体共振(SPR)技术检测CMV。首先用11-MUA修饰SPR金片,再用EDC/NHS活化,之后通过NHS酯基与CMV抗体结合,用BSA封闭未结合的NHS酯基。将SPR金片装入SPR仪,通入待检样品,通过折射率变化实时监测实验过程。结果:该方法检测CMV的灵敏度能够达到10ng/mL,具有良好的特异性,与同属的花生矮化病毒、番茄不孕病毒无交叉反应。结论:建立的SPR方法操作简单、灵敏度高、特异性好,是一种新的高效检测CMV的方法。 相似文献
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玉米基因组DNA提取及浓度测定方法评价 总被引:2,自引:0,他引:2
以非转基因玉米种子为材料,比较了常用的3种植物基因组DNA提取试剂盒及改良的CTAB法,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度及实时荧光PCR扩增检测,对提取得到的基因组DNA的纯度、得率及4种提取方法的重复性、提取时间进行分析;比较紫外分光光度法、Qubit荧光法、Pico Green荧光分光光度法,以实时荧光定量PCR检测结果为参照,对3种DNA浓度测定方法的准确性进行分析.结果显示,磁珠法(Promega)最适合应用于快速、简便、高效检测中的植物基因组DNA提取,能有效获得纯度高、完整性好的基因组DNA,并且磁珠法提取效率高,重复性好,提取时间短;在基因组DNA浓度测定中,紫外分光光度法、Qubit荧光法、Pico Green荧光分光光度法的相对误差分别为99.8%、49.8%和28.9%,表明Pico Green荧光分光光度法测定DNA浓度的准确度最高. 相似文献
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构建了由黄瓜花叶病毒Fny株系RNA1、RNA3与M株系RNA2组合得到的假重组体病毒FMF,并用其侵染烟草幼苗,接种5 d后烟草幼叶上出现坏死环斑,接种5-30 d新生叶上没有呈现任何明显症状;30 d后新生叶上突然出现轻微绿斑驳。采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,监测不同时期展开的幼叶中病毒粒子含量和病毒基因组RNA含量的动态变化,结果显示,接种后5-25 d新生叶中病毒粒子含量保持较低水平,30 d时含量突然大幅度增长;接种后5-30 d新生叶中病毒基因组RNA1、RNA3和RNA4含量均经历骤减期和增长期;RNA2含量变化情况平缓,没有明显先减后增的趋势。病毒粒子、病毒基因组RNA含量及病症严重程度的动态变化规律及其相关性将为研究FMF侵染机制、病毒与寄主互作及病毒防控提供依据。 相似文献
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以报道的植原体 (Phytoplasma)16SrDNA基因保守序列为依据,设计合成了两对引物对R16mF2/ R16mR2和R16F2/ R16R2,以甘薯丛枝病(SPWB)带病植株的叶脉中提取的DNA为模板,应用聚合酶链式反应(PCR)技术和巢式PCR(Nested- PCR)技术对甘薯丛枝病病原进行分子检测。结果表明PCR扩增出了1.5 kb的特异片段,在PCR基础上的巢式PCR扩增出了1.2 kb的特异片段。灵敏度实验显示该方法所需PCR模板DNA量为0.1073 ng/μl,在PCR基础上的巢式PCR可以将灵敏度提高约10000倍,所需模板DNA仅为0.01073 pg/μl,在甘薯丛枝病的检测中是一种快速、灵敏、可靠的方法。 相似文献
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用实时荧光PCR方法鉴定转基因玉米T14/T25 总被引:4,自引:0,他引:4
本研究以实时荧光PCR技术鉴定商业化种植的转基因玉米T14/T25品系。根据转基因玉米T14/T25转入的外源基因质粒图谱,设计转基因引物和探针进行PCR和实时荧光PCR检测,建立了转基因玉米品系鉴定的实时荧光PCR方法。实验结果表明,用TaqMan探针可检测到T14/T25产生的荧光信号,而对其他玉米品系则检测不到荧光信号,为转基因产品的鉴定检测提供了新方法。Abstract: To identify genetically modified (GM) maize T14/T25 lines, a real-time fluorescent PCR (RTF PCR) assay was performed in this study. Primers and Taqman probes specific for inserted genes in the T14/T25 were used to conduct the real-time fluorenscent (RTF) PCR and PCR assays. The RTF PCR method was established to detect and identify GM maize lines. The results show that the TaqMan probe could identify T14/T25 maize used, while other GM and NO-GM maize didn’t be detected. The RTF PCR could be a new method for detecting other genetically modified organism. 相似文献
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黄瓜花叶病毒对烟草叶片和叶绿体光合活性的影响 总被引:26,自引:0,他引:26
研究了烟草(Nicotana tabacum L.)感染黄瓜花叶病毒后烟草植株不同部位(顶层、中层、下层)中片的光合速率和叶绿体光化学反应的变化。感病的叶片净光合速率减少,顶层叶砬少最多。病毒侵染抑制PSⅡ活性比PSⅠ活性更明显,特别是顶层叶。叶绿素a荧光测定表明还原态Q库减少,CO2同化减少。从低温荧光发射光谱图变化中发现能量分配受干扰。 相似文献
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黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁分离物外壳蛋白基因与3'非编码区的序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV) 为烟草花叶病毒属(Tobamovirus)成员,Tobamovirus属病毒基因组至少编码4个蛋白,靠近5'端的126 kDa和183 kDa两个蛋白与病毒的复制有关,其中183 kDa是由126 kDa 蛋白终止子超读产生的;另外两个蛋白分别为约30 kDa的移动蛋白(Movement protein, MP)和约17.5 kDa 外壳蛋白(Coat protein, CP),这两个蛋白分别由不同的亚基因组RNA表达产生;病毒基因组5'和3'端均含有一段非编码区(Noncoding region, NCR),5'端含帽子结构,3'端有一个可接受组氨酸的类似tRNA状结构[1]. 相似文献
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