GUS基因表达的简易快速鉴定法

GUS基因是目前遗传操作中常用的报道基因。该基因的DNA片断已克隆到许多农杆菌遗传工程菌种中,用于多种植物的外源基因导入研究。由于几乎在所有的高等植物中并没有该基因所编码的葡糖苷酸酶的活性或几乎测不出来,因此,葡糖苷酸酶在高等植物的外源基因导入研究中可以作为一种极其     

DC 与CIK细胞治疗难治复发急性髓细胞白血病的近期临床观察

目的：评估自体DC与CIK 细胞治疗难治复发急性髓细胞白血病的近期疗效与安全性。方法：给予20 例难治复发急性髓细 胞白血病患者树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗,20 例难治复发的应用同样化疗方案的急性髓细胞白血病 患者做为对照组;治疗后4 周观察两组患者临床疗效和生存质量(KPS)评分,DC 与CIK 细胞治疗前和治疗后1 周检测T细胞亚 群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+)和细胞因子(IL-12、IL-2、IL-7、IFN-酌及TNF-琢)水平的变化。结果：①DC 与CIK 细胞 治疗组有效率和KPS评分明显高于对照组(P<0.05),所有患者的不良反应轻微,均可耐受。②DC 与CIK 细胞治疗后1 周,患者T 细胞亚群百分比和细胞因子含量较治疗前均明显升高,其中CD3+、CD3+CD56+及IL-12、IL-7 明显升高(P<0.05)。结论：DC与CIK 细胞免疫治疗难治复发急性髓细胞白血病安全有效。     

rmhTNF-α联合抗IL-6抗体对胃癌SGC-7901细胞杀伤作用的研究

目的：研究rmhTNF-α联合抗IL-6抗体对胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用。方法：（1）将已培养的SGC-7901细胞株分为a、b、c、d、e组,a、b、c、d组分别加入浓度为10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml的rmhTNF-α,e组加入等量PBS。ELISA检测不同时间点SGC7901细胞上清液中IL-6的分泌量,MTT法检测细胞培养24 h、32 h、40 h、48 h的凋亡情况。（2）将SGC-7901细胞分为f、g、h、i组,f组加入rmhTNF-α,浓度分别为10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml;g组加入不同浓度的rmhTNF-α与浓度为100 ng/ml的IL-6,h、i组加入不同浓度的rmhTNF-α与浓度分别为1：62.5和1：125的抗IL-6抗体。MTT法测细胞培养48 h的凋亡情况。荧光显微镜观察细胞凋亡情况。结果：（1）IL-6分泌五组差别具有统计学意义（P〈0.05）,a、b、c、d组IL-6浓度均高于e组（P〈0.05）,a、b、c组相比各时间点IL-6浓度逐渐升高（P〈0.05）,c、d组差别无统计学意义。（2）细胞存活率a、b、c、d组与e组差别具有统计学意义（P〈0.05）,a、b、c、d组内比较差别有统计学意义（P〈0.05）,显示杀伤作用40 h后减弱,c、d组差别无统计学意义。（3）细胞存活率f、g组比较差别具有统计学意义（P〈0.05）,h、i组与f组差别有意义（P〈0.05）,h、i组比较,i组细胞存活率较低。结论：rmhTNF-α可以促进SGC-7901细胞分泌IL-6;抗IL-6抗体可以增强rmhTNF-α对SGC-7901细胞的杀伤作用。     

祛风止痒片联合自血疗法治疗慢性荨麻疹的疗效观察

目的:探讨祛风止痒片联合自血疗法治疗慢性荨麻疹的临床疗效.方法:将我院2009年2月到2011年8月收治的慢性荨麻疹患者100例随机分为对照组与治疗组,对照组服用盐酸左西替利嗪,进行常规综合治疗;治疗组采用祛风止瘁片联合自血疗法进行对症治疗.观察比较两组患者的瘙瘁、风团等慢性荨麻疹症状及临床疗效;并测定比较血清总IgE的变化情况.结果:治疗后,治疗组患者总有效率为84％;对照组患者总有效率为58％,治疗组的总有效率明显高于对照组(P＜0.05);治疗组患者的瘙痒、风团等慢性荨麻疹症状疗效均明显优于对照组患者(P＜0.05);复发率为24％明显小于对照组患者(42％);两组差异均具有统计学意义(P＜0.05);治疗后治疗组与观察组患者的血清总IgE均比治疗前明显改善(P＜0.05),但两组之间没有显著差异,说明在改善慢性荨麻疹患者的血清总IgE的疗效方面一致.结论:祛风止痒片联合自血疗法治疗慢性荨麻疹的临床疗效肯定,有效阻止病情进展及控制复发率,值得临床进一步推广用.     

肿瘤微环境中相关细胞的研究进展

肿瘤的微环境对肿瘤的发生,发展具有重要的意义。实体瘤中除肿瘤细胞外存在大量的非肿瘤细胞,如肿瘤间质细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、免疫细胞、脂肪细胞等等,这一系列的细胞与肿瘤细胞相互作用,通过一系列的因子分泌而促使肿瘤的进一步的恶化,目前传统的抗肿瘤药物研究往往局限于肿瘤细胞本身而忽略了肿瘤周围的细胞作用,使得肿瘤久治不愈。将来的药物开发应该围绕肿瘤细胞为主体的同时,兼顾微环境中的其他细胞,多靶点治疗肿瘤,真正实现肿瘤的治愈。     

外源促性腺激素处理后鸡产蛋及孵化研究

目的:探讨促卵泡素(FSH)对低产期肉用种母鸡在产蛋数量和孵化的影响,寻求较佳的用于提高低产期母鸡产蛋的激素剂量。方法:本试验采用同种激素不同剂量的处理方式,比较实验组和对照组产蛋量和孵化情况。结果:注射不同剂量的激素对鸡的产蛋有一定的影响,实验组一的平均产蛋数与对照组接近,其它四组均显著低于对照组(P<0.05),孵化率与健雏率与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:小剂量激素处理对鸡产蛋量没有太大的影响,但大剂量会引起鸡生殖系统萎缩,激素处理对受精卵孵化及雏鸡生长并无负面影响。     

冬虫夏草对缺血再灌注损伤修复和作用机制的研究进展

冬虫夏草是珍贵中药材,内含丰富的生物活性成分,冬虫夏草对器官缺血性再灌注损伤具有一定的保护作用。文中首次总结了冬虫夏草对心、脑和肾缺血再灌注损伤的修复作用和相关调控机制最新的研究进展。冬虫夏草在肾缺血再灌注损伤过程中能够清除多余的自由基,抑制炎症级联反应、肾细胞凋亡、内质网应激和调控抗氧化基因的表达,降低氧化应激水平;通过调节VEGF和NGAL,来改善血管内皮损伤及慢性缺氧损伤,从而起到一定的保护肾脏作用。冬虫夏草能有效促进脑组织中SOD、GSH-PX和CAT活性,降低MAD含量,抑制脂质过氧化反应,改善自由基代谢;通过抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和ICAM-1的表达,促进脑缺血损伤功能恢复;冬虫夏草增加Hcn2、S1c6a1基因表达上调和Hspa12a表达,对脑神经元起到保护作用。冬虫夏草通过减缓心律失常、提高机体耐缺氧能力、稳定溶酶体膜以及改善心肌的能量代谢,保护心肌缺血再灌注损伤MIRI后的心肌损伤;冬虫夏草能使Grp78和Caspase-12的m RNA及mi R-455的含量均降低,从而减少MIRI后内质网应激介导的细胞凋亡。上述研究结果的总结为后续系统地研究冬虫夏草保护器官性缺血再灌注损伤的作用提供参考。     

右美托咪定复合舒芬太尼自控镇痛对剖宫产产妇应激反应和炎症介质的影响

目的:探讨右美托咪定复合舒芬太尼自控镇痛对剖宫产产妇应激反应和炎症介质的影响。方法:选取2017年4月～2019年4月期间在我院行剖宫产术的产妇105例,根据乱数表法将患者分为研究组(n=53)和对照组(n=52),其中对照组采用舒芬太尼自控镇痛方案,研究组采用右美托咪定复合舒芬太尼自控镇痛方案,比较两组视觉疼痛模拟评分(VAS)、Ramsay镇静评分、应激反应和炎症介质指标,记录两组术后48 h内自控镇痛泵使用情况、镇痛期间不良反应发生情况。结果:两组术后2 h、12 h、24 h、48 h VAS评分均呈下降趋势,且研究组术后2 h、12 h、24 h、48 h VAS评分低于对照组(P0.05),研究组术后2 h、12 h、24 h、48 h Ramsay镇静评分高于对照组(P0.05)。两组术后48h血清皮质醇(Cor)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、甲肾上腺素(NE)、C反应蛋白(CRP)、内皮素-1(ET-1)、白介素-10(IL-10)水平均升高,但研究组低于对照组(P0.05)。研究组术后48 h内舒芬太尼用量、镇痛泵按压次数均少于对照组(P0.05)。两组不良反应发生率比较无差异(P0.05)。结论:采用右美托咪定复合舒芬太尼自控镇痛方案可有效减轻剖宫产产妇应激反应并降低其炎症介质水平,同时还可减少舒芬太尼用量和镇痛泵按压次数,用药安全性较好,临床应用价值较高。     

ATRA诱导分化的NB4细胞浸润裸鼠肺组织模型的建立

目的:建立全反式维甲酸(ATRA)诱导分化的NB4细胞浸润裸鼠肺组织模型,为探讨诱导分化综合征(DS)的发生机制、预防和治疗提供研究平台。方法:首先,取对数生长期的NB4细胞在ATRA诱导下、在RPMI 1640培养基中、在37℃和5%CO2的条件下培养,72 h后收获诱导分化后的NB4细胞接种裸鼠尾静脉。然后,30天后处死裸鼠取肺组织,用G显带方法检测裸鼠肺组织的染色体核型,HE染色观察裸鼠肺组织学,电子显微镜观察超微结构,RT-PCR法和FISH技术检测裸鼠肺组织PM L-RARa m RNA转录本及PML-RARa基因的表达。结果:实验组染色体核型符合NB4细胞特征,在组织学和超微结构上明显见到分化的NB4细胞浸润裸鼠肺组织,检测到PM L-RARa m RNA转录本和PML/RARa融合基因;对照组未见到分化的NB4细胞浸润裸鼠肺组织,PML-RARa m RNA转录本和PML/RARa融合基因检测阴性。结论:用ATRA诱导分化的NB4细胞成功的建立了浸润裸鼠肺组织模型,为探讨诱导分化综合征(DS)的发生机制、预防和治疗提供了研究平台。     

PML（NLS^-）蛋白在NB4细胞及其裸鼠移植瘤中定位的验证

验证中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE）切割PML—RARa后,PML（NLS-）蛋白的存在和定位。将质粒pCMV-HA—NE电转染NB4细胞,用Westemblot法验证质粒转染成功;提取电转染质粒成功64／NB4细胞的胞浆蛋白,用Westem blot法检测NB4细胞中PML（NLS^-）蛋白的表达;免疫荧光法和激光共聚焦检测电转染质粒成功的NB4细胞中PML（NLS^-）蛋白的表达及定位;同时,建立NB4细胞、K562细胞和电转染质粒成功的NB4细胞裸鼠皮下瘤模型,用Westem blot、免疫组化法检测PML（NLS^-）蛋白在移植瘤组织细胞中的表达与定位。结果表明,westemblot检测电转染质粒pCMV-HA-NE的NB4细胞成功表达NE蛋白：NE酶成功切割PML-RARα,Western blot检测到电转染质粒pCMV-HA-NE的NB4细胞表达PML（NLS^-）蛋白;免疫荧光和激光共聚焦均可检测到电转染质粒成功的NB4细胞中PML（NLS^-）蛋白定位于细胞胞浆：Westem blot和免疫组化法检测到电转染质粒成功的NB4细胞裸鼠移植瘤中的PML（NLS^-）蛋白的表达且定位于细胞胞浆,而NB4和K562细胞裸鼠皮下瘤中PML蛋白主要定位于胞核。综上所述,该文成功将质粒pCMV-HA—NE电转染NB4细胞并用Western blot、免疫荧光、激光共聚焦、免疫组化验证PML（NLS-）蛋白存在于NB4细胞胞浆,这一现象可以为急性早幼粒细胞白血病的临床早期诊断与治疗提供新的依据。