中枢神经系统特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠

利用从129sv小鼠基因组文库克隆得到的1．8kb的胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)基因的5′端调控序列,构建了含有2个β—珠蛋白绝缘子、GFAP5′端调控区、Cre基因和人生长激素基因(hGH)polyA的转基因载体pGFAP—Cre—hGH。以显微注射的方法将7．6kb的转基因片段pGFAP—Cre—hGH引入191枚小鼠基因组受精卵,其中176枚分别移植至8只假孕母鼠的输卵管中使其发育,共获得子代小鼠25只。经PCR和Southern杂交鉴定其中7只小鼠基因组上整合有Cre基因,整合率为28％。用整合有Cre基因的转基因小鼠与基因组上整合有LoxP位点和LacZ表达框的ROSA26鼠杂交,以检测Cre酶的活性、组织特异性及其介导的两个LoxP位点间的重组。LacZ染色结果表明,GFAP—Cre转基因小鼠只在中枢神经系统中表达Cre重组酶并能在体内成功介导LoxP位点间的重组。     

人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析

目的：克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法：选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（CHX）对细胞进行处理,观察处理前后MEPE/OF45基因的表达情况。结果：在经CHX处理的HeLa细胞中扩增到了MEPE/OF45基因片段,随后利用重叠PCR方法获得了人MEPE/OF45全长基因,并经序列分析确证。结论：获得了人MEPE/OF45基因片段及全长基因,为阐明MEPE/OF45在细胞中复杂的功能提供了线索。     

代谢综合征发病机制研究进展

代谢综合征（MS）是一组复杂的代谢紊乱,其病理生理学机制尚不完全清楚,美国AHA、心肺及血液研究所和ADA联合召开的顶级专家会议讨论后认为主要有三种可能：①肥胖和脂肪组织功能异常;②胰岛素抵抗（IR）;③一些独立危险因素的共聚,遗传和环境因素都在其中发挥作用。     

云南松外生菌根真菌分离培养研究

就滇中一带云南松林进行了多次调查,共采集、鉴定标本130余号;从中选取13科, 19属, 33种真菌进行了菌种分离、培养的研究。选用并修改4种培养基进行了外生菌根真菌分离、培养的比较,结果共有11科, 17属, 25种真菌分离获得成功,成功率高达75.8%, 4种培养基的分离成功率依次为36.4%、63.6%、33.3%和57.6%。其中,修改PDA培养基和松针、玉米培养基较适宜于云南松外生菌根真菌的分离、纯化和培养。     

携有巨大芽孢杆菌淀粉酶基因的两种质粒在枯草杆菌中产酶性质的比较

携带巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium糖化型α淀粉酶基因的质粒pBX95和pBX96(pBX96在枯草杆菌中传代对自发缺失0.65kb片段的衍生质粒)在枯草杆菌Bacillus subtilis中表达的α淀粉酶分子量分别为64 kD和58kD。它们的比活力相差两倍。并且在等电点、米氏常数、最适温度、最适pH、热稳定性方面均有差别。但二者的淀粉水解产物的层析谱带相同。     

上海地区螃蜞的周年活动及其防治和利用

螃蜞是危害农田水利、损害庄稼的有害动物。凡海潮所及的河川、渠道、沙滩、田野等处,皆有其踪迹。上海地区常见的为无齿相手蟹Sesarma(Holometopus)dehaani H.Milne-Edwards,我们对这种螃蜞进行了全年的调查和观察。     

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用的鉴定

目的：研究脆性组氨酸三联体（Fhit）对ATR／CHKl通路的影响,确定Fhit与复制蛋白A（RPA）存在相互作用,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法：将Fhit全长基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达纯化GST-Fhit融合蛋白,并用GST沉降技术研究Fhit与RPA是否在体外存在相互作用;在表达Fhit的人细胞中用免疫共沉淀技术分析Fhit与RPA是否在体内存在相互作用,同时用免疫荧光染色方法研究Fhit与RPA在细胞内是否可以共定位。结果：通过免疫共沉淀、免疫荧光染色及GST沉降技术,确定了Fhit与RPA在体内及体外均可以相互作用。结论：确定了Fhit与RPA之间存在相互作用,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。     

芦竹内生真菌F0238细胞生长及其代谢调控*

对芦竹内生真菌F0238的细胞生长和代谢产曲酸量进行了代谢调控。结果表明,F0238生长及产曲酸的营养和环境条件为:PDA培养基,8%淀粉为碳源,0.2%蛋白胨为N源,发酵温度28℃,初始pH值为6.5,发酵时间5d/(120h),装液量80mL/500mL三角瓶。在摇瓶试验的基础上,对该菌发酵过程作了初步放大试验(10L全自动发酵罐),得到F0238发酵过程的动态曲线。动态曲线反映了在一个发酵周期内,发酵液的pH值、DO值及残糖的降低趋势和生物量与抗菌产物量的上升趋势。     

适用于膜片钳研究的新生大鼠骨骼肌细胞培养

采用低浓度胰蛋白酶,较低温度下长时间搅拌及粗口径滴管分次吹打等改进方法进行新生大鼠骨骼肌细胞分散培养,能够得到较高的细胞产率。经１０ｎｍｏｌ／Ｌ秋水仙碱处理３ｄ后可得到肌球,能够适合于进行膜片钳记录,并不改变肌细胞的电生理学特性,肌球膜上有正常的Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋和Ｎ型乙酰胆碱受体离子通道活动。本方法提供了一个较好的适用于肌细胞电生理学研究的模型。