肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7紧密粘附素免疫保护性片段(Intimin-C)的克隆表达纯化及部分生物学活性研究

克隆表达并纯化肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O15 7∶H7紧密粘附素免疫保护性片段 (Intimin C) ,并对其部分生物学活性进行研究。设计引物采用PCR自O15 7菌基因组扩增紧密粘附素免疫保护性片段 (Intimin C)的编码基因eae C ,T A克隆测序后构建原核表达质粒 pET 2 8a(+) eaeC并转化E .coliBL2 1(DE3) ,诱导表达破菌及包涵体洗涤后采用离子交换柱和亲和层析柱对目的蛋白进行纯化 ,PAGE电泳初测目的蛋白的分子量、滴定法初测目的蛋白的等电点 ,并以纯化蛋白Intimin C免疫家兔制备多抗血清。采用PCR法自O15 7菌基因组扩增出了约 90 0b…     

猪产肠毒素大肠杆菌987P蛋白受体的鉴定

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)定植于仔猪肠道的第一步是通过987P菌毛与小肠上皮细胞表面刷状缘大分子(BBV)结合。对分离的BBV进行SDS-PAGE和Ligand blot分析表明, 在32~35KDa区域内有一条带能被987P菌毛探针所识别和结合, 所结合的条带经胰蛋白酶消化后, 通过微内径反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离出多条主要峰带蛋白峰带, 采用衬质辅助激光解吸与电离质谱法(MALDI-MS)对主要峰带进行分析, 结合多肽氨基酸测序和Blast同源性比较, 得到3个氨基酸基序(AETAP、ALAAAGYDVEK和LGLK), 其序列与人和鼠源的组蛋白H1高度同源; 来源于仔猪小肠上皮细胞BBV的H1蛋白与BBV一样都能特异性结合纯化的987P菌毛蛋白。上述结果表明, 仔猪小肠上皮细胞BBV的组蛋白H1是987P菌毛蛋白的受体。     

斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501反硝化相关基因结构及功能分析

在A1501株的基因组上鉴定了4个反硝化相关的基因簇: nar, nir, nor和nos, 共40个基因, 基因的转录产物与其他种群中物质运输、基因调控以及还原酶类蛋白高度同源. nir, nor和nos基因簇在染色体上位置靠近, 与nar基因簇相隔较远. 与其他反硝化细菌比对的结果表明, A1501株中的40个反硝化基因组成了一套完整的反硝化催化系统. 在A1501株中, 该系统有以下特点: (ⅰ) nar基因簇中, narK基因只发现一个拷贝. (ⅱ) 在narK与narG之间有一个narM基因. (ⅲ) 在narX, narL基因的下游鉴定了两个基因dnrE和orf1, 其中dnrE基因是一个属于FNR家族的转录因子. (ⅳ) A1501株中nir基因有16个, 是所有已知反硝化细菌nir基因数量最多的. (ⅴ) 在A1501株中, 同时也是在假单胞杆菌属中首次报道norR基因. (ⅵ) nos基因簇相对保守, 无论在基因组成还是排列方式与参照的菌株都完全一致.     

依尼奥小单孢菌抗性基因sisR的克隆研究

从产西索米星的依尼奥小单孢菌中克隆高抗性新基因sisR,借助计算机设计PCR引物,从西索米星的产生菌依尼奥小单孢菌的染色体DNA中,经PCR扩增获得DNA序列长度不等的DNA片段。将这些DNA片段克隆至pUC19载体质粒并导入大肠杆菌,从中筛选到5个抗西索米星的转化子(其中一个命名为sisR)显示对西索米星的高抗性(超过1000μg/mL)。经DNA测序并通过互联网Biast比对,确认对该抗性负责的DNA片段是一个未见报道的新基因。     

大连医科大学基因工程研究所、＇机能实验室，大连116027 β-葡萄糖苷酶在工农医领域的应用

β-葡萄糖苷酶能够水解多种β-葡萄糖苷。它与其他纤维素酶共同作用,可以将自然界中含量丰富的纤维素水解成人类可以直接利用的能源物质——葡萄糖;β-葡萄糖苷酶在医学上也有重要的应用,它可用于一些肿瘤疾病的诊断和治疗。人缺乏β-葡萄糖苷酶,可以引起葡萄糖苷-N-脂酰鞘氨醇在巨噬细胞溶酶体内积累,引发戈谢病(Gaucherdisease)。     

用于靶向于NFAT的免疫抑制类小分子化合物筛选的细胞模型的建立

建立IL-2启动子以及NFAT-AP1增强子调控报告基因包括D2egfp或Luciferase在Jurkat细胞中瞬时表达的细胞模型。首先,利用三步连接将IL-2-promoter -255～+285处的序列插入到Pnf-Κb-D2egfp表达载体启动子上游,形成3个拷贝的前后串联的增强子序列;然后从人外周血钓取两条IL-2-promoter序列,包括-326～＋46以及-89～＋46两段基因组序列,分别替代上述重组表达载体中的TK minimal promoter, 构建所需的IL2 promoter以及NFAT-AP1 enhancer调控的报告基因表达质粒：3×NFAT-AP1-IL-2P/D2egfp和3×NFAT-AP1-TATA/D2egfp; 最后,分别将3×NFAT-AP1-IL-2P以及3×NFAT-AP1-TATA融合基因克隆到Pgl3-basic载体中,构建相应的Luciferase报告基因表达质粒。利用电转染方法将重组的报告基因表达载体瞬时转入Jurkat细胞后发现,未刺激以及PMA、离子霉素（Ionomycin）单刺激均不能激活下游报告基因的表达,只有PMA和离子霉素联合刺激才能启动D2egfp以及Luciferase的转录表达,并且5μg/Ml FK506预先作用1h能几乎完全阻断刺激剂诱导的无论是IL-2 promoter还是NFAT-AP1enhancer调控的报告基因的表达。实验结果提示,所构建的Jurkat细胞瞬时表达模型可用于靶向于NFAT信号通路的FK506类免疫抑制小分子化合物的初步筛选。     

河西走廊不同生态型芦苇对干旱和盐渍胁迫的响应调节

长期稳定的自然变异植物种是研究植物适应逆境机制的理想实验体系。就河西走廊芦苇不同生态型的划分、4种生态型的光合响应调节、抗氧化保护机制、膜流动性修饰机制和渗透调节机制中的响应特征、胁迫诱导的特异表达成分等作了概述。     

基于多聚化重组抗原的检测戊型肝炎病毒IgM与IgG抗体的ELISA的建立及初步评估

建立并评估分别检测戊型肝炎（戊肝）病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原,建立戊肝捕获法IgM ELISA(E2-IgM)和间接法IgG ELISA(E2-IgG).利用29只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎血清、正常人血清以及单克隆抗体评估所建立的方法的敏感法与特异性,并与商品化试剂（Genelabs公司抗－HEV IgG和IgM试剂,GL－IgM/GL-IgM)进行比较。29只恒河猴E2－IgM和E2－IgG的阳转率均为100％,其中75％在感染后4周内阳转,均早于ALT异常时间。E2－IgM持续2－14周,平均6周;E2－IgG在70周时仍无一阴转。GL－IgG阳转率为79．3％（23／29）,多数晚于ALT异常时间,平均持续约18周,但最长为1只在感染后70周时仍为阳性。用E2－IgM试剂盒检测928份正常人血清,仅2份OD值略高于0．2。检测510份临床急性肝炎血清,可明显将其区分为2个部分,一个部分OD值小于0．2,其OD值分布与正常人相似;另一个部分OD值大于0．4,共131份,其中109份大于1．0。可能分别对应于急性肝炎中的非戊肝患者和戊肝患者。119份非甲－丙急性肝炎中,E2－IgM阳性57份,GL－IgM阳性29份（E2－IgM均阳性）。5060份普通人群血清的E2－IgG OD值在0．2以下,形成一个近似对数正态峰,均值为0．022,在OD值0．4以上则分布均匀。用E2－IgG试剂检测200份临床急性肝炎血清,结果OD值0．2以下也形成一个与普通人群类似的近似对数正态峰,但OD值在大于1．0－4．0间形成另一个尖峰（峰值在OD2．5处）,其中多数E2－IgM阳性。抗－HEV单抗可明显阻断E2－IgM及E2－IgG,单抗Fab段的阻断效果与完整抗体类似,提示这种阻断是表位特异的。建立的戊肝IgM试剂和IgG试剂具有良好的敏感性与特异性。IgM试剂适用于临床戊肝诊断,IgG试剂适用于既往戊肝感染诊断。     

戊型肝炎病毒中和性单克隆抗体的鉴定

阻断实验发现。用戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白重组抗原制备的8株抗HEV单克隆抗体(mAb),分别识别3个构象表位和2个线性表位。用抗体捕获反转录PCR方法证实,其中识别2个构象表位的3个mAb可以直接捕获HEV颗粒,表明这2个表位位于HEV颗粒的外表面。识别这两个表位的mAbSCll和8H3均可中和HEV对恒河猴的致病性和感染性。rnAb8C11缩短排毒时间的效应较明显,而mAb8H3延迟机体抗HEV抗体阳转时间的效应较明显。二者的中和效应具有较明显的协同作用。中和单抗8C11、8H3对戊肝不同感染时期的血清均有显著阻断作用,Fab片段的阻断作用与完整抗体类似,表明这两个mAb对应的中和表位是HEV体液免疫应答的优势表位。     

生物课件制作三步曲

制作多媒体教学课件已经成为现代生物教学的重要教育教学技能之一。本文结合作者的课件制作实践,就如何快速、高效地制作出多媒体生物课件提出了基本的制作方法和思路,对中学教师自己制作课件具有一定的参考价值。