套式聚合酶链反应在HIV-1检测中的应用

根据HIV-1 gag.pol和env基因序列设计了套式聚合酶链反应(nesled polymerasechain reaction,nPCR)引物。将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增,其产物再经内侧引物扩增,直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100～1000倍,可检测到0.5fg质粒DNA和50μ1HIV-1感染者外周血样中的HIV基因。用本法检测63名HIV-1感染者全为阳性,而61名健康人和可疑者均为阴性,后者经追踪检测抗体排除了HIV-1感染。实验证明,nPCR是一种敏感性极高、特异性很强、操作简便易行的HIV-1基因检测技术。它已经在早期诊断和外周血病毒含量检测中发挥了重要作用,而且有着更广阔的应用前景。     

庐山土壤微生物类群及酶活特性

庐山土壤微生物类群及酶活特性陆杨森,熊金莲,张明（安徽农学院,合肥２３００３６）ＭｉｃｒｏｂｉａｌＧｒｏｕｐｓａｎｄＥｎｚｙｍｅＡｃｔｉｖｉｔｙｉｎＳｏｉｌｏｆＬｕｓｈａｎＭｏｕｎｔａｉｎ￥ＬｕＹａｎｇｓｅｎ;ＸｉｏｎｇＪｉｎｌｉａｎ;ＺｈａｎｇＭｉｎｇ（ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＣｏｌｌｅｇｅ,Ｈｅｆｅｉ２３００３６）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｌｏｇｙ１９９３,１２（５）：２５－２８。ＴｈｅｔｏｔａｌｎｕｍｂｅｒｏｆｍｉｃｒｏｂｅｓｖａｒｉｅｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｉｌｔｙｐｅｓｏｆＬｕｓｈａｎＭｏｕｎｔａｉｎ,ｂｅｉｎｇｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ（１．２×１０￣９ｎｕｍｂｅｒｓｇｄｒｙｓｏｉｌ）ｉｎｍｏｕｎｔａｉｎｏｕｓｙｅｌｌｏｗｂｒｏｗｎｓｏｉｌ．Ｔｈｅｅｃｏｌｏｇｉａｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｖａｒｉｏｕｓｍｉｃｒｏｂｉａｌｇｒｏｕｐｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｉｌｔｙｐｅｓｉｓｓｉｍｌｌａｒ。Ｂａｃｔｅｒｉａｉｓｍｏｒｅｔｈａｎａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓａｎｄｆｕｎｇｉ．Ｎｏｎｉｔｒｉｆｙｉｎｇｂａｃｔｅ－ｒｉａｃａｎｂｅｆｏｕｎｄＩｎｓｏｌｌｓｏｆＬｕｓｈａｎＭｏｕｎｔａｉ     

一种简易的小动物一氧化氮吸入系统的研制

作者自行设计一套小动物一氧化氮吸入系统,该系统主要包括有机玻璃舱,采气泵,流量计,ＮＯ／Ｎ２混和气体,纯氧,氮氧化物分析仪,Ｏ２,ＣＯ２监测仪。实验过程中,将６－７只大鼠置于舱内分别吸入２０ｐｐｍ,４０ｐｐｍ,８０ｐｐｍ和ＮＯ８ｈ,每２０ｍｉｎ记录一次舱内ＮＯ,ＮＯ２,Ｏ２和ＣＯ２的浓度值。结果表明舱内的实测ＮＯ浓度与实验所设计的ＮＯ浓度相近,舱内氧浓度与空气中的氧浓度相似,ＮＯ和ＣＯ２最大浓度分     

过氧化物酶染色增强剂对微血管染色增强作用的对比研究

本文用１０％福尔马林固定的Ｗｉｓｔａｒ大白鼠的脑、脊髓及皮肤等组织的冰冻切片组织为材料,对内源性过化物酶显色增敏剂的增强作用进行了对比研究。结果以镍、铜及钴等金属离子的增敏作用强、效果好、操作简单、重复性好。同时对增强剂的增敏原理进行了分析讨论     

含有Epstein-Barr病毒膜抗原的重组表达质粒及其基因免疫

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒主要的膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因片段插入ｐＨＤ１０１－３质粒的ＣＭＶ启动子下游,构建了真核表达质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０,并转染２９３细胞进行瞬间表达。用免疫荧光法从细胞膜检测到表达的抗原能与其单克隆抗体发生特异性结合,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法证实,表达的抗原分子量为３５０ｋＤ．用能在真核细胞表达的重组质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０的ＤＮＡ,经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ柱纯化后,注射经普鲁卡因预处理的Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠的四头肌,观察到ＥＢＶ－ＩｇＡ／ＭＡ抗体水平比ＥＢＶ－ＩｇＧ／ＭＡ低,而ＥＢＶ－ＩｇＡ／ＭＡ的持续时间比ＥＢＶ－ＩｇＧ／ＭＡ长。采用表达ＥＢＶＭＡ的质粒ＤＮＡ与ＣＨＯ细胞表达的ＭＡ蛋白免疫小鼠,均获得抗ＥＢＶＭＡ的抗体。     

青鱼不同组织中同工酶的表达模式

采用聚丙烯酰胺垂直板状连续电泳的方法对青鱼（Mylopharyngodonpiceus）的脑、晶体、心脏、肾脏、肝脏、肌肉等六种组织进行了十种同工酶（α－AMY、EST、GOT、C6PDH、TDH、LDHMDH、ME、POX、SOD）的电泳研究,并对各种酶的同工酶位点表达及酶谱表型进行了分析。结果表明α－AMY、EST、TDH、LDH、MDH、ME、POX、SOD、C6PDH存在不同程度的组织特异性,COT无明显组织差异．并对同工酶的组织分布特异性的生理意义进行了讨论。     

华蓥山的大熊猫骨胳

1993年8月14日,在华蓥市洞穴科学考察中,于华蓥山中段西缘的天池镇刘家洞中发现一具较完整的兽类骨胳,经鉴定为大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)。在四川东部平行岭谷的华蓥山发现大熊猫完整骨胳化石尚属首次,现简介如下。     

海南捕鸟蛛毒素-IV突变体的固相合成和生理活性分析

海南捕鸟蛛毒素_IV(HNTX-IV)是从我国海南捕鸟蛛粗毒中分离出的一种TTX-敏感型的钠离子通道阻断剂 ,由 35个氨基酸残基组成 ,含 3对二硫键。为了研究HNTX-IV结构与功能的关系 ,用芴甲氧羰基 (Fomc)固相多肽合成方法合成了用丙氨酸 (Ala)替代HNTX-IV第 12位丝氨酸 (Ser12 )的突变体S12A_HNTX_IV和替代第 29位精氨酸 (Arg29)的突变体R29A-HNTX-IV。合成的突变体经谷胱甘肽法氧化复性和纯化后 ,分别用MALDI-TOF质谱进行分子量鉴定 ,用一维核磁共振波谱法分析空间结构的变化 ,膜片钳电生理方法分析生物学活性。结果表明 ,Ser12和Arg29被Ala突变后没有明显影响分子的空间结构 ,S12A-HNTX-IV的生物学活性与天然HNTX-IV的相近 ,提示Ser12与HNTX-IV的生物学活性无关或关系不大 ;而R29A-HNTX-IV的生物学活性下降了155倍 ,说明Arg29是与HNTX-IV生物学活性相关的关键残基之一。推测R29A-HNTX-IV活性的降低是由于Ala替代Arg后改变了HNTX-IV与受体作用的位点,而不是由于毒素分子整体空间结构变化所致。     

按酵母基因优化的HPV6型L1蛋白在大肠杆菌中高效表达

人乳头瘤病毒6型(human papillomavirus type 6,HPV6)是尖锐湿疣的主要病因,该病的发病率近年来持续上升,是仅次于淋病的第二位性病,并且其病情顽固,易复发,治疗困难.而尖锐湿疣与HPV6感染之间是单一的因果关系,这为用疫苗预防提供了可能.实际上HPV(如16、18、6、11等型别)L1的病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗正在进行Ⅱ期临床试验,前景看好[1].但是现在普遍采用昆虫细胞培养系统,价格昂贵.为降低成本,同时尝试了真核表达系统甲醇营养型酵母(Pichiapastoris)和原核表达系统大肠杆菌(E.coli)两种表达系统.按照Pichia酵母的密码偏爱性重新合成HPV6-L1基因,结果在该系统仅有少量表达[2].但是发现该合成基因在E.coli中能够高效表达,而目前文献报道的HPV L1蛋白多以融合方式(与GST)在E.coli中少量表达[3].现将工作结果报道如下,并对影响蛋白表达的可能因素作简要探讨.