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多彩色荧光原位杂交技术原理及其应用 总被引:9,自引:0,他引:9
多彩色荧光原位杂交是一门新兴的分子细胞遗传学技术,它用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针,进行原位杂交,同时检测间期细胞或中期细胞中的几个特异核酸序列,为分析癌症遗传不稳定性提供了一种简便、快速、可靠的方法,并广泛应用于物理图谱绘制、致突变研究、肿瘤病理学和产前诊断. 相似文献
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昆明山海棠诱导人白血病细胞HPRT基因突变的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
为研究昆明山海棠(THH)的遗传毒性和药理作用,采用单细胞克隆培养,双向筛选计数,多重PCR扩增与电泳分析,研究了THH诱导HL-60细胞HPRT基因突变率及分子突变谱。发现随着染毒剂量的增加,细胞接种存活率逐渐下降,突变频率明显升高;THH诱发突变主要由缺失和点突变两部分组成(46.6%和53.4%),而自发突变几乎全是点突变(92.3%);HPRT基因突变位点在各个外显子的分布较集中于基因的3′末端,且外显子1缺失只出现于全基因缺失中,外显子7/8与9多表现为连锁缺失(71.4%)。结果提示,THH具有明确的诱导HPRT基因突变的作用,且诱发突变与自发突变的分子图谱不一样,这可能与其作用机制有关。上述发现有助于阐明THH遗传毒性作用机理。
Abstract:The genotoxicity and pharmacologic activity of a Chinese medicinal herb,Tripterygium hypoglaucum(Lévl) Hutch (THH),was investigated by methods of single cell clone culture,two-way screening count,multiplex PCR amplification and electrophoresis technique.THH showed clear cytotoxicity and mutagenesis in human promyelocytic leukemia (HL-60) cells.When doses were increased,cell plating efficiency reduced and mutation frequency increased.The analysis showed that the spectra of spontaneous and THH?induced mutants were different.46.6% of THH?induced genetic changes were deletions,whereas the majority of spontaneous mutants(92.3%)exhibited point mutations.Mapping of all intragenic deletion breakpoints showed a random distribution of breakpoints in 9 exons,but toward the 3′ end of the HPRT gene.Exon 1 deletion only appeared in total gene deletion,and exon 7/8 and 9 deletion often showed chain deletion(71.4%). 相似文献
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目的探讨不同麻醉方法建立大鼠肺鳞癌模型的差异。方法体重180~220g Wistar大鼠,依不同麻醉方法分为2组:实验Ⅰ组(110只)用0.3%戊巴比妥钠麻醉;实验Ⅱ组(80只)基础麻醉用盐酸氯胺酮44mg/kg,然后乙醚吸入麻醉。两组均采用额镜直视法,灌注3-甲基胆蒽(MCA)、二乙基亚硝胺(DEN)与普通碘油混悬液于大鼠左下叶支气管。结果麻醉显效时间和维持时间分别为:Ⅰ组,(23.50±1.98)min,(246.56±15.46)min,Ⅱ组,(3.05±0.45)min,(12.47±1.35)min,两组间有显著性差异(P〈0.01);灌注成功率、存活率、诱癌率分别为:Ⅰ组94.55%,48.08%,90.00%,Ⅱ组93.75%,90.67%,92.65%,两组成功率、诱癌率差异无显著性(P〉0.05),存活率有显著差异(P〈0.01)。分别于不同时间处死大鼠,2组基本病理过程相同。结论戊巴比妥钠麻醉剂量易控制,以小剂量灌注雄性大鼠为佳;盐酸氯胺酮与乙醚复合麻醉较难控制,但速度快,实用性强。 相似文献
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目的探讨二氢杨梅素(DHM)对高糖(HG)诱导的心肌细胞H9C2损伤的影响及机制。
方法细胞处理分为对照组、35 mmol/L HG组、35mmol/L HG+50 μmol/L DHM组及50 μmol/L DHM组。CCK-8法检测细胞活力,化学比色法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平,流式细胞术检测ROS水平;荧光定量PCR法及Elisa法分别检测TNFα、IL1β、IL6 mRNA和含量,Western Blotting检测p-IκBα、IκBα蛋白及核蛋白NF-κB p65的表达水平。采用单因素方差分析进行组间比较。
结果对照组、35mmol/?L HG组、35?mmol/L HG+50?μmol/L DHM组、35?mmol/L HG+100?μmol/L DHM组的细胞活力分别是(100±0.00) ﹪、(52.23±5.69) ﹪、(74.58±6.12) ﹪和(86.04±3.76)﹪,差异具有统计学意义(F?= 40.61,P?< 0.01)。对照组、35?mmol/L HG组和35?mmol/L HG+100?μmol/L DHM组的MDA和ROS水平,SOD和CAT活性分别是(0.44±0.06)?nmol/?ml,(2.33±0.40)?nmol/?ml,(1.48±0.41)?nmol/ml、(156.0±9.00)U/ml,(325.3±10.69)U/ml,(244.0±9.54)?U/ml,(10.62± 1.59)?U/?ml,(5.18±0.34)U/ml,(7.75±0.53)U/ml,(11.31±0.98)?U/ml,(5.20±1.12)?U/?ml和(8.06±0.66)U/ml,差异具有统计学意义(F?= 30.34,29.75,14.72,P均< 0.01)。DHM预处理可明显拮抗HG对H9C2心肌细胞TNFα、IL1β和IL6 mRNA及含量的上调作用,差异存在统计学意义(P?均< 0.01)。DHM可抑制HG对H9C2心肌细胞p-IκBα/?IκBα蛋白和核蛋白NF-κB p65表达的增加作用,差异存在统计学意义(P均< 0.01)。
结论DHM可拮抗HG诱导的H9C2心肌细胞损伤,这可能与其抑制NF-κB信号通路有关。 相似文献
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采用ENU(乙基亚硝基脲)作用于裸露的λgt11 DNA,经体外重包装,转染宿主菌 E. coli Y1090,在含底物X-gal,诱导剂IPTG的选择性培养基上铺皿,发现被处理的λgt11 DNA除了使噬菌体存活率下降外,还出现了靶基因"LacZ"较高频率的突变.其中以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂,当存活率分别为3.5×10-3、1.6×10-3和5.5×10-4 时,相应的突变率依次为1.1×10-3、3.2×10-3和5.2×10-3,DMSO溶剂对照突变率则<5.0×10-5 .对ENU诱导的5个阳性突变体进行了扩增,以PCR产物为模板,采用正向引导,对阳性突变体靶基因LacZ进行了部分测序,在被测序的260bp范围内,发现了9个位点的碱基突变.碱基突变的类型有颠换(67%)、转换(11%)和移码突变(22%).颠换主要以A→T、G→C为主.似乎胞嘧啶(C)更易发生突变(占43%). 相似文献