克雷伯肺炎杆菌1,3-丙二醇氧化还原酶基因克隆及表达条件研究

1,3-丙二醇氧化还原酶是甘油歧化为1,3-丙二醇的一种关键酶。本研究从克雷伯肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)基因组中,用PCR方法克隆了其编码基因dhaT。TA克隆测序正确后,构建胞内表达载体pET-28a-dhaT和分泌表达载体pET-22b-dhaT,然后转化E.coliBL21(DE3)进行原核表达。表达部位确定、SDS-PAGE和酶活分析表明,该酶得到了高水平表达。其中使用pET-22b表达的目的蛋白大都是不溶的包涵体;而使用pET-28a表达的目的蛋白胞内可溶,占胞内可溶总蛋白的45%,占菌体总蛋白的25%。常规(30℃)诱导表达即呈现1,3-丙二醇氧化还原酶活性,但低温(20℃)14 h诱导显示3.7倍的酶活性。     

酶制剂清除食源性致病菌生物被膜的研究进展

食源性致病菌对人类健康与公众安全造成了极大的危害,形成生物被膜加剧了它们的致病与耐药风险。酶具有高度专一性,可靶向作用于生物被膜中的特殊物质,从而清除食源性致病菌的生物被膜,具有重要的科研价值和广泛的应用前景。因此,文中系统地综述了相关酶制剂清除食源性致病菌生物被膜的研究进展。根据酶制剂的不同作用靶点,着重介绍了群体感应抑制酶、环二鸟苷酸代谢酶、胞外基质水解酶等酶制剂的研究现状。文中还针对抗生物被膜酶制剂的未来研究方向进行了展望,旨在为食源性致病菌生物被膜的有效控制提供新的技术与策略。     

人工养殖扬子鳄野放初期的活动观察

2003年4月27日,将经过兽医检查挑选出来的两雌一雄人工养殖的健康成年扬子鳄(Alligator sinensis)释放到安徽宣城红星扬子鳄保护点,利用无线电遥测技术测定其释放初期4周内的活动区域,共记录372个位点;还通过白天望远镜观察和夜间灯光计数法观察了它们的活动情况。结果显示：3条扬子鳄经过3-14d后处于不同的稳定区域内,具领域特征;雄性个体的活动区域大于雌性,日活动区域面积的变化也大于雌性;局部环境选择上均趋向靠近岸边并具有茂密植被的区域。     

基于细胞色素b基因的中国岩羊不同地理种群遗传差异分析

为了揭示中国岩羊不同地理种群的遗传差异,探讨岩羊亚种分化的分子机制,采用中国岩羊不同地理种群的细胞色素b(Cyt b)基因的全序列,分析了碱基变异情况、遗传距离以及核苷酸序列差异。用最大似然法和贝叶斯法构建分子系统树并对获得的拓扑结构进行分析。结果发现,西藏亚种与四川亚种Cyt b基因平均序列差异为4.2%(±0.007),处于偶蹄目亚种的序列差异范围内,支持了目前对岩羊西藏亚种的分类地位。四川亚种内部各地理种群之间的遗传距离(0.033±0.0 111)与它们分别到西藏种群的遗传距离(0.042±0.007)差异不显著(t=1.824,P=0.084),说明四川亚种内部各地理种群间已经发生较显著的遗传分化。其中,四川、甘肃和青海种群亲缘关系较近,并与四川亚种内部的其它种群已产生了显著的遗传分化。因此认为四川亚种内部各地理种群的种下分化需要深入研究。     

丙酸梭菌简易培养及电转化方法

建立了一种简易的丙酸梭菌(Clostridium propionicum)厌氧培养方法——输液瓶蜡封法,从而使厌氧培养快速有效。基于输液瓶蜡封法,采用电击缓冲液PEB,结合0.03 g/mL维生素C的方法,通过对不同对数生长期的菌体细胞进行实验,在无需借助厌氧培养箱的条件下,成功地将外源质粒pGJ103(3 283 bp)转化丙酸梭菌,结果表明处于对数生长中期(18 h)的丙酸梭菌细胞最适宜用于电转化。该研究为严格厌氧微生物的培养提供了一种普适的方法,并且为丙酸梭菌的分子生物学操作奠定了一定的基础。     

云南纳西族HLA—DRB1基因多态性研究及其族源分析

首次在国内采用本室改进的高分辨率的基于内含子的PCR－SBT分型方法,检测云南纳西族HLA－DRB1基因多态性。在60例纳西族个体中共检出37种HLA－DRB1等位基因,其显著特点是等位基因的类型检出较多,频率分布比较平均,除12021（17.50%）外其他的等位基因频率均低于8％,其他较常见的等位基因（＞5％）还有1404（7.50%）,1504（5.83%0,04051（5.83%0,08032（5.83%）,09012（5％）,03011（5％）。这几种中频等位基因共占可检出等位基因的35％,与12021一起共占52.49%,其中DRB1＊0305、0438、1123、1132、1310、0812为首次在我国人群中检出,并且在世界各地人群中也比较罕见。以纳西族和世界各地人群的HLA－DRB1频率进行了聚类分析。比较分析的结果显示纳西族明显属于中国南方族群,未显示出其族源来自北方的痕迹。根据遗传数据,并参照民族学、历史学研究,对其民族起源做了初步的分析。     

大鲵保护生物学及其研究进展

大鲵（Andrias davidianus)为我国特有的珍稀两栖动物,已列入国家二级保护动物名录,并列入CITES公约附录Ⅰ中。自20世纪50年代起,由于过度收购、非法捕杀和栖息地丧失等原因,大鲵种群数量下降极为严重,湖南、安徽等地的大鲵产量在20世纪50年代至70年代下降超过80％,分布区也极度萎缩,形成了12块岛屿状区域,目前分布于以我国中部山区的长江流域为主的17个省区。部分已建立的大鲵保护区经费短缺,人员不足,管理不力,状况不容乐观。非法捕捉和栖息地丧失仍是威胁大鲵生存的主要因素,保护管理力度还需进一步加强。     

野生扬子鳄洞穴口的位置选择

1999年至 2 0 0 2年 7～ 10月内的 4个时段 ,在安徽扬子鳄国家级自然保护区内调查发现野生扬子鳄洞穴 4 0个 (现用 2 4个 ,遗弃 16个 )。对洞口的方向、隐蔽程度、距水面高度、与水源距离及与村落距离等 5个可能影响扬子鳄洞穴选择的环境变量做了测定。结果表明 :87 5 %的洞口在水面 0～ 0 5m及 <0m ,85 0 %距水源 <5m ,32 5 %朝北 ,72 5 %植被覆盖度≤ 70 % ,4 2 5 %距村落 <10 0m ;距水面高度、与水源距离、洞口方向和隐蔽程度的主成分贡献率依次降低 ,累计达 76 6 %。方便入水是洞口位置选择的主要因素     

原核生物DNA的程序性复制

原核生物ＤＮＡ的程序性复制薛建华明镇寰（杭州大学生命科学学院,杭州３１００１２）关键词聚合酶Ⅲ全酶复制叉程序性ＤＮＡ的复制是一个复杂的过程,需要各种蛋白质、酶之间及蛋白质与ＤＮＡ之间的相互作用,才能顺利完成。原核生物（如Ｅ．ｃｏｌｉ）是以ＤＮＡ聚合酶...     

食源性致病菌耐药机制研究进展

食源性致病菌是危害食品安全与人体健康的关键因素,而细菌耐药性的不断出现与传播,更加剧了食源性致病菌的潜在风险,成为全球普遍关注的公共卫生焦点问题。本文中,笔者首先综述4种主要的细菌耐药机制:降低细胞膜通透性机制、外排泵机制、药物靶标位点突变机制以及酶解作用机制。在此基础之上,系统回顾了常见食源性致病菌耐药机制的研究进展,并对食源性致病菌耐药机制进一步的研究方向进行了展望,以期为食源性致病菌耐药机制的深入研究提供基础资料,为食源性致病菌耐药性风险的控制提供科学依据。