与单一顺序DNA互补的大鼠肝癌核RNA和聚核糖核蛋白体RNA的变化

对癌细胞的生物学和生物化学研究,揭示了癌细胞的去分化特征和异常分化现象,从这些实验事实出发,认为癌可能是一种分化异常的疾病。这些异常和去分     

大鼠肝癌发生过程基因转录调控机理的研究 Ⅰ.与DNA重复顺序互补的RNA的比较

肝细胞癌变过程,除去在细胞形态和代谢活动方面发生变化外,而且还呈现出某些胚胎肝的表型,如甲胎蛋白和胚胎性同功酶谱等。这些胚胎性蛋白在肝癌细胞中的再现,可能是由于肝细胞基因表达的调控系统,在肝细胞癌变过程中发生了异常变化,以至使己分化成熟的成年肝细胞去分化,进而发展为恶变细胞。我们用二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠肝癌,在肝癌发生过程中,观察基因调控失调,及其与肝癌发生的关系。首先,     

混合氨基酸粉作饲料添加剂的价值研究

目前国内许多工厂采用酸水解法由猪毛中提取胱氨酸和精氨酸,但收得率不高,提取过氨基酸的废液中仍含有不少各种氨基酸,将这些含有氨基酸的废液丢掉是一个浪费。我们将废液蒸干,得含有各种氨基酸的干物质,可作饲料添加剂使用。为了检验其应用效果前,我们用大白鼠做了营养试验。现将实验结果报告如下:     

马氏钳蝎的哺乳动物神经毒素的分离和纯化

用CM-Sephadex C-50柱层析法将马氏钳蝎(Buthus martensi Karsch)粗毒分成13个蛋白组分。其中XI峰对哺乳动物(小鼠)、甲壳动物(潮虫科鼠妇属甲壳虫)和昆虫(丽蝇幼虫)都有较强毒性;XII峰对前两类动物有较强毒性;VIII峰对后两类动物有较强毒性。XI峰通过DEAE-Sephadex A-50柱层析被分成XI-1和XI-2两个组分。XI-1峰与XII峰再分别经过Sephadex G-50柱层析被纯化后,经聚丙烯酰胺碱性不连续圆盘电泳和等电聚焦圆盘电泳鉴定均为单一区带。它们都是神经毒素,分别被命名为马氏钳蝎神经毒素I和II。经小鼠腹腔注射,测定粗毒、神经毒素I和II的LD_(50)分别为2.4mg/kg、0.48mg/kg和0.63mg/kg。毒素I有较好的耐热性。工作中还测定了神经毒素I和II的氨基酸组成,它们分别由67和63个氨基酸残基组成,最小分子量分别为7567和7181。     

云南红豆杉愈伤组织诱导和组织培养

云南红豆杉愈伤组织的诱导频率为Ｗｈｉｔｅ〉ＭＳ〉Ｂ５,其中最高达８０％,叶片和种子之间差异不大,但不同时期的叶片差异较大,以嫩叶诱导为佳,激素配比以２,４－Ｄ２．０－３．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡＰ０．５－１．０ｍｇ／Ｌ为宜,在继代培养阶段,Ｂ５比Ｗｈｉｔｅ和ＭＳ更适合细胞的快速生长、繁殖,并且有利于克服组织的褐化,适合于细胞生长的激素配比也以２,４－Ｄ２．０－３．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡＰ０．５－１．０ｍｇ／Ｌｏ     

蝎神经毒素分子生物学研究的若干进展

从蝎粗毒中分离纯化得到的蝎神经毒素是一类具有特异生物活性的多肽物质。它们作为重要的工具物已被广泛地应用在神经生物科学相关靶离子通道受体的基础研究中。个别蝎神经毒素的分子作为未来新药研制和开发的模板和探针,已受到生物医学界的高度关注。本文综述了近几年来应用分子生物学的技术和概念研究蝎神经毒素的若干结果和进展。     

发展中的mRNA差别显示技术

随着PCR技术的出现（1985）,在分子生物学界又相继出现了两个很有影响的新技术－PAPD技术（1990）和mRNA差示法（1992）,前者用于分子标记,后者用于基因分离。mRNA差示法的生物学基础是基因的差别表达,即：单个细胞中表达的基因仅占基因总数的15％,这种基因的差别表达决定了生命的所有过程,如：发育和经、对逆境的反应、细胞分裂、老化等。图一给出了该方法最初的技术路线。提取要比较的两种或两种以上样品的mRNAs,分别逆转录成cDNAs,经过PCR扩增后,直接进行测序胶电泳即可识别差别的mRNA。其中、关键是的PCR扩增时两个引物的设计。3′端引物Oligo(dT)MN很容易与具有N′M′－poly(A)-3′末端的大多数mRNA结合,进行cDNA的逆转录合成。M、N提供锚定位点,防止3′端引物在poly(A)序列不同位置上的随机结合。5′端为10个碱基的随机引物。这个经验上的碱基数较理论的6－7个碱基（表一）更能满足测序胶电泳要求的条件：分子大小在500bp左右,每条泳道上条带数在100条左右。该方法近年来又有如下改进：一、PCR退火温度由42℃改为40℃,可在保持特异性的同时,增加泳道上的条带数。cDNA合成的底物改用总RNA,可避免poly(dT）柱纯化mRNA时的污染,造成电泳抹带（smear）现象。二、第二代引物3′端的M位（3′端倒数第二位）碱基改用4个简单碱基,减少了引物的组合数,提高该法的效率和经济性。第三代引物在两种引物的5′端加HindIII酶切位点,3′端引物改为单随机碱基,既：5′－AAGCT11N－3′;5′端引物为5′－AAGCTT＋（AP）7。大大提高了克隆效率和克隆cDNA的可操作性。三、可能由于10个碱基随机引物的特异性还不够,泳道上出现的cDNA条带数多得超过了不可分辨的程度,造成了假阳性现象。有人尝试用不变性凝胶代替变性凝胶、或用Northern亲和层析加以解决。收效不大。也许,还是需要在引物设计上下功夫。四、经比较,^33P的半衰期和放射性强度介于^32P和^35S之间,价格最贵,但效果最好。通过对正常细胞与病变细胞、处理与未处理细胞、不同生理状态和不同发育时期的细胞,以及抗逆性强弱所作的mRNA差别显示分析,在动植物生理、病理以及抗性研究中取得了大量成果。但是,由于该技术要求底物有poly(A）尾,只能限于真核生物核基因组差异表达的研究。而且,所选择的研究材料除要求目的的基因有差异外,其它基因差异要尽可能小。GenHunter公司已推出了方便的专用试剂盒,但使用的是与人有害的、需要较长曝光时间的放射性同位素,这些都是需要进一步改进的,还包括向技术的自动化改进。     

发展中的mRNA差别显示技术

随着ＰＣＲ技术的出现（１９８５）,在分子生物学界又相继出现了两个很有影响的新技术──ＲＡＰＤ技术（１９９０）和ｍＲＮＡ差示法（１９９２）,前者用于分子标记,后者用于基因分离。ｍＲＮＡ差示法的生物学基础是基因的差别表达,既：单个细胞中表达的基因仅占基因总数的１５％。这种基因的差别表达决定了生命的所有过程,如：发育和分化、对逆境的反应、细胞分裂、老化等,图一给出了该方法最初的技术路线。提取要比较的两种或两种以上样品的ｍＲＮＡｓ,分别逆转录成ｃＤＮＡｓ,经过ＰＣＲ扩增后,直接进行测序胶电泳即可识别有差别的ｍＲＮＡ。其中、关键的是ＰＣＲ扩增时两个引物的设计．３＇端引物Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）ＭＮ很容易与具有Ｎ＇Ｍ＇－ｐｏｌｙ（Ａ）－３＇末端的大多数ｍＲＮＡ结合,进行ｃＤＮＡ的逆转录合成。Ｍ、Ｎ提供锚定位点,防止３＇端引物在ｐｏｌｙ（Ａ）序列不同位置上的随机结合。５＇端为１０个碱基的随机引物。这个经验上的碱基数值较理论的６－７个碱基（表一）更能满足测序胶电泳要求的条件：分子大小在５００ｂｐ左右,每条泳道上条带数在１００条左右。该方法近年来又有如下改进：一、ＰＣＲ退火温度由４２℃改为４０℃,可在保证特异性的同时,增加泳道上的     

运用AP-PCR对中国慈姑属内亲缘关系的研究

用AP-PCR技术测定了中国慈姑属植物基因组DNA的多态性,以其为分子性状用UPGMA方 法聚类,结果表明:中国慈姑属植物可分为3大类,包括7种3变种或变型(未包括浮叶慈姑)。本文的结果与基于形态和核型分析的结果一致。