猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救

感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。     

经皮内镜下空肠造口术在胃癌术后胃排空障碍治疗中的应用

目的:报道经皮内镜下空肠造口术在胃癌术后胃排空障碍治疗中行胃减压及肠内营养支持的治疗效果。方法:28例胃癌术后胃排空障碍的病人在局麻或基础麻醉下行经皮內镜下空肠造口术,术后行胃减压及肠内营养支持?峁?28例患者均操作成功,平均操作时间为(19.5±4.6)min,无严重导管相关并发症。术后第2天开始通过空肠营养管进行肠内营养,平均术后(7.3土1.6)天完全摆脱肠外营养支持。术后平均(19.4土7.7)天恢复胃动力夹闭胃引流管。平均留置时间(35.8士11.8)天,拔管时营养状况较术前明显改善。结论:皮内镜下空肠造口术在胃癌术后胃排空障碍的治疗中能够起到有效的胃减压和营养支持,明显改善患者生活质量。     

经腹胃切开途径放置经皮内镜下胃造口管在晚期喉癌病人中的应用

目的:报道在晚期伴食管完全梗阻的喉癌病人中通过经腹胃切开途径成功放置经皮内镜下胃造口管的应用体会。方法:18例喉癌术后复发伴食管完全梗阻的病人,在局麻或硬膜外麻醉下经腹胃切开途径放置经皮內镜下胃造口管,术后行肠内营养支持。结果:16例在局麻下、2例在硬膜外麻醉下成功放置经皮內镜下胃造口管,手术平均时间32.1±5.8分钟,无手术及导管相关性并发症发生。结论:经腹胃切开途径放置经皮內镜下胃造口管是安全、简便及有效的营养支持途径,术后耐受好、易于护理,适合喉癌伴食管完全梗阻病人建立长期营养支持途径的需要。     

高压液相色谱在测定细菌DNA中鸟嘌呤G加胞嘧啶C克分子百分比方面的应用

1980年初,我们开展了应用高压液相色谱技术。对7株不同种的细菌 DNA 中G C 克分子百分比进行测定工作。结果表明用 Nucleosil C_(18)进行反相分配层析可以快速、简便、灵敏而又精确地测定用过氯酸水解后的 DNA 中 G C 克分子百分比,测定时进样量只需0.2—1微克,测定时间仅为8分钟,重现性好。试验测得数值与文献报导值接近。分子遗传学的研究证明脱氧核糖核酸     

组培繁殖天竺葵

天竺葵是牛儿苗科多年生草本植物。是花叶兼赏的盆栽花卉。其花期长 ,自春到秋开花不断 ,夏初盛花。在园林中也可用于布置花坛绿地 ,因此组培繁殖天竺葵具有重要意义。１ 培养条件（１）愈伤组织诱导培养基 :ＭＳ ６ -ＢＡ０．５ｍｇ Ｌ １（单位下同） ２ ,４ -Ｄ０．１２     

MMP-9和PTEN在胶质瘤中的表达及相关性分析

目的：检测脑胶质瘤组织中MMP-9和PTEN表达情况并探讨其意义。方法：采用免疫组织化学S-P法检测50例脑胶质瘤、10例正常脑组织中两者的表达。结果：脑胶质瘤组织中MMP一9和PTEN表达定位于细胞浆,其阳性表达率分别为74．00％（37／50）和60．00％（30／60）与正常脑组织0、100％有差异（P〈0．05）。两者的表达与胶质瘤患者的年龄、性别无明显相关性（P〉O．05）,但高级别组与低级别组之间表达有差异,具有统计学意义（P〈0．05）;在脑胶质瘤组织中MMP-9蛋白的阳性表达与PTEN蛋白的阳性表达有相关性,二者呈负相关（P〈0．05）。结论：MMP．9蛋白在胶质瘤组织中的表达明显高于正常脑组织,并且高级别胶质瘤组的表达明显高于低级别胶质瘤组中的表达,提示MMP-9可能与胶质瘤的浸润、发展、转移有关,可作为一个预测胶质瘤侵袭转移能力的肿瘤标志物。PTEN蛋白在正常脑组织中的表达明显高于胶质瘤,且高级别组表达明显高于低级别组,提示PTEN基因突变或缺失在胶质瘤的发生发展中起重要作用,且与肿瘤恶性分化程度密切相关,表明PTEN的失活预示着一个特殊的进展性的临床行为,在胶质瘤恶性进展中属于较晚发生的分子事件。     

Hsa_circ_0000745对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的作用及其机制

该文主要研究环状RNA hsacirc0000745对肝癌细胞的促肿瘤作用及其相关作用机制。首先,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测不同肝癌细胞中环状RNA hsacirc0000745的表达;其次,利用siRNA干扰技术敲低HepG2细胞中的hsacirc0000745;然后,采用CCK-8和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,用Transwell实验和划痕愈合实验检测肝癌细胞HepG2的侵袭及迁移能力,利用Western blot方法检测增殖、侵袭及迁移相关蛋白的表达。结果表明,干扰hsacirc0000745后,肝癌细胞的增殖及克隆形成能力降低(P<0.05),同时伴有增殖相关蛋白cyclin D1表达水平下降(P<0.001),细胞迁移和侵袭能力降低(P<0.05),上皮标志物E-Cadherin的表达水平上调(P<0.05),而间质标志物N-Cadherin和Vimentin的表达水平下调(P<0.05)。该研究结果表明,干扰hsacirc0000745显著抑制肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力和上皮–间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)。这为肝癌的诊断和治疗提供了新的潜在靶点和视角。     

P53抗体联合CYFRA21-1和CEA在非小细胞肺癌中的应用

目的:研究血清P53抗体在非小细胞肺癌临床病理特征之间的关系,并结合血清中的癌胚抗原、角质蛋白21-1以指导对临床上肺癌复发和转移的分析,用来选择合理的治疗方案。方法:正常组30例,肺良性疾病组10例,肺癌组45例,肺癌全组分别于手术前1天、术后10、30、60和90天时抽取清晨空腹静脉血2ml,23例肺癌病例于手术后120天,15例病例于手术后180天抽取清晨空腹静脉血2ml,肺良性疾病组分别于手术前1天、抽取清晨空腹静脉血2ml。正常组清晨空腹采集静脉血2ml。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清P53抗体和角质蛋白21-1,采用荧光酶标免疫法检测血清癌胚抗原。结果:血清P53抗体、CYFRA21-1和CEA在正常人组、良性疾病组、肺癌组术前阳性率的比较三种肿瘤标志物阳性率经X2检验,在肺癌组分别与正常人组和良性病例组有显著性差异(P<0.05),良性病例组和正常人组之间无显著行差异(P>0.05)。并与手术后复发与转移相关。结论:联合检测癌胚抗原、角质蛋白21-1及血清P53抗体水平有助于肺部良恶性疾病的诊断;手术前后动态测定肺癌患者血清P53抗体和角质蛋白21-1的变化规律,有助于判断疗效,监测预后和指导肺癌术后的综合治疗。