人肾素转基因小鼠的建立

为研究人肾素基因在体内的功能和建立其药物干预实验的动物模型,采用显微注射法,将纯化的人肾素基因导入小鼠受精卵,再培育成转基因小鼠.通过DIG DNA印迹和PCR分析,进行转基因整合检测.在出生的13只子代鼠中,得到一只转基因阳性鼠.整合率为7.7%,有效率0.3%,转基因已稳定传代.RT-PCR显示转基因阳性鼠的肾、心和肺组织中有肾素基因表达,而在肝脏与骨骼肌中则未检测到.阳性鼠血浆肾素活性较对照鼠明显升高,而肾与心脏组织的肾素活性则无明显变化.人肾素转基因小鼠可用于研究循环或组织的RAS中肾素基因的功能及有关其药物抑制实验.     

地中海贫血基因诊断

f4-地中海贫血（简写为f4地贫）是一种严重 影响人民健康和人口质量的遗传性疾病,在我 {IA广大地域（特别在南方）具有较高的发病率。 在p地贫中以重型患者后果最为严重,此类 病例在此化学上表现为夕珠蛋白链完全缺如 (# D纯合子）或极度减少（/j+纯合子,其fl链仅 相当于正常水平的5--30界）;在临床上则表现 为严重的或进行性贫血、肝脾肿大、骨骼改变及 红细胞形态异常等一系列综合征。防治该病的 根本措施是杜绝患儿出生,为此必须作好产前 诊断。我们在了解中国人fl类珠蛋白基因多态 性限制酶位点的分布的基础上,开始对某些有 可能患重型fl地贫危险的胎儿进行产前基因诊 断。产前基因诊断的原理大致是：根据对重型 召地贫患者及其父母夕类珠蛋白基因多态性限 制酶位点所组成的基因型和单体型（haplotgpe) 分析,将患者双亲携带地贫基因的染色体和携 带正常基因的染色体区分出来,然后对胎儿的 基因型和单体型进行分析,即可确定其两条含 fl珠蛋白基因的染色体中是否具有携带地贫基 因者。自1978年以来,文献已报道用上述方法 对数十例具有重型f4地贫家庭史的胎儿进行产 前基因诊断〔,一‘,,效果不错。     

蛋白质转运的细胞分子机制--1999年度诺贝尔生理学或医学奖简介

瑞典卡洛琳斯卡医学院 1 999年 1 0月 1 1日在斯德哥尔摩宣布 1 999年度诺贝尔生理学或医学奖授予美国洛克菲勒大学细胞分子生物家君特·布洛贝尔 (Ｂｌｏｂｅｌ,Ｇ) ,以表彰他发现蛋白质因具有信号序列而决定其在细胞内转运和定位的功绩。一、Ｂｌｏｂｅｌ提出了什么重要的科学问题人体由大约 1× 1 0 14 个不同类型细胞所组成。细胞外表由膜包裹 ,是组成机体的基本单位。细胞间可通过各种管道和基质进行物质交换、通讯联络和相互作用。细胞内含有各种形态各异、功能不一的亚细胞结构和细胞器 (如细胞核、内质网、线粒体…… ) ,这些细胞器…     

合成寡核苷酸的简易纯化方法

由手工或机器合成寡核苷酸到使用它们的过程中,纯化步骤经常成为速度限制因素,因为目前采用的常规纯化方法比较繁复,特别当样品数和每份样品量多时,往往难以满足工作的需求。有鉴于此,1986年Lloyd等报道了一个简易的纯化方法,似可克服上述不足。笔者从1986年以来曾多次参照Lloyd等法(仅在某些细节上略作改变)纯化由合成机合成的脱氧寡核苷酸片段(其长度为30-mer—50-mer),效果不错,在此作一介绍,以供参考。     

β地中海贫血的分子缺陷

一、前言地中海贫血(简称地贫)是常见的遗传性疾病,在地中海沿岸国家及我国南方携带地貧基因者比例很高。地贫基因主要有α和β两类。β地贫又包括β~+和β~0等主要类型,前者表现为红细胞中β珠蛋白链合成减少(为正常的5—30％),后者β链完全不能合成,但二者的β珠蛋白基因是完整的(除极少数病例外),其分子基础涉及到特异性分子缺陷,从而导致基因表达的异常或失能。现在已知,β地贫分子缺     

生物素代替放射性同位素标记探针——基因探测技术的新改进

迄今为止,分子生物学家研究人类DNA单拷贝基因组织的最灵敏方法是利用~(32)P-脱氧核苷三磷酸(~(32)P-dNTP)标记的分子探针,与转移到硝酸纤维素膜上的 DNA 杂交后观察放射自显影条带,进行限制性内切酶图谱分折。~(32)P-dNTP半衰期短,价格昂贵,使用不太方便;~(32)P-还含有一定的硬β射线,对实验者身体有害。最近美国耶鲁大学医学院Leary等用生物素标记探针,并借用免疫学方法,创建了一种快速、灵敏的酶标反应显色技术,(见Leary J.J.et al:Proc.Nat.Acad.Sci.USA,80:4045,1983)有可能打破同位素在     

miRNA的研究进展

微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一类长度在22nt左右、能调节mRNAs表达的非编码RNA基因产物。miRNAs最初在线虫体内被发现,广泛存在于真核生物体内,对于生物体的发育等诸多方面有调节作用,并在进化中保守。miRNAs作用机制尚不完全清楚,但已知其能通过与mRNAs的3′非翻译区结合而影响翻译水平。部分miRNAs可以行使类似siRNAs的作用。本文就miRNAs的生物发生、作用机制、应用方向等研究进展作一综述。相信对miRNAs的深入认识将为基因功能研究提供新思路,同时也将为基因操作技术提供新的手段。     

动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析

在建立国内首家犬,猫,猴,鼠传代细胞库,即7种动物肾细胞系（F－81,CRFK,MDCK,Vero,Vero-2,MA-104,BHK-21)的种子库和工作库的基础上,通过细胞染色体组型,G带核型,染色体数目变异率,结构畸变率分析,了解7种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况,以相应的细胞株皮下接种褐 形成肿瘤实验,软琼脂细胞克隆一苦恼经与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照,筛选出无致癌／致瘤性,符合细胞遗传学要求,无传染因子污染的细胞系（F－81,CRFK,Vero,Vero-2)或极低致癌性的MDCK细胞系用于制苗,发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功,细胞系染色体遗传特征决定致性质并具有种属特异性,得到一些100％成瘤和100％不成瘤的细胞株并了与染色体组型的关系,对于肿瘤的发病机理及实验治疗,都是非常好的模型,一些细胞系不仅成瘤而且还可转移（致恶性横纹肌样瘤的BHK－21和Vero 细胞株）,其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。