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方宏清 《中国生物工程杂志》1992,12(6):21-24
大肠杆菌是基因工程中被广泛使用的受体菌之一,干扰素、白介素、集落刺激因子等等都在其中表达成功。重组菌的培养有其自身的特点,即目的基因克隆在质粒上,存在结构不稳定性和分配不稳性;基因剂量的可变性;基因表达易调节控制等。本文综述了培养基、温度、pH、溶氧、代谢副产物、比生长速率等因素对重组菌培养的影响以及重组菌的培养方式。 相似文献
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昆虫杆状病毒系统表达外源蛋白的糖基化 总被引:4,自引:0,他引:4
昆虫表达系统作为一类应用广泛的真核表达系统 ,具有与多数高等真核生物相类似的翻译后修饰的过程。但其生产的重组糖蛋白一般仅具有高甘露糖或寡甘露糖型糖链 ,难以生成复杂构型糖链成为该系统的缺陷之一。综述了目前昆虫杆状病毒系统表达外源蛋白的糖基化研究进展。 相似文献
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在大肠杆菌内引入甲羟戊酸途径高效合成抗疟药青蒿素前体——紫穗槐-4,11-二烯 总被引:1,自引:1,他引:0
以青蒿素为基础的联合药物疗法 (ACTs) 被认为是目前治疗恶性疟疾的最有效方法。然而青蒿素供应不足且价格昂贵,限制了ACTs的广泛使用。采用基因工程手段构建异源类异戊二烯生物合成途径,利用大肠杆菌发酵能高效合成抗疟药青蒿素前体——紫穗槐-4,11-二烯。首先在大肠杆菌Escherichia coli DHGT7中引入人工合成的紫穗槐-4,11-二烯合酶基因,利用大肠杆菌内源的法尼基焦磷酸,成功获得了紫穗槐-4,11-二烯。为提高前体供给,引入粪肠球菌的甲羟戊酸途径,紫穗槐-4,11-二烯的产量提高了13 相似文献
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基于PTS缺陷型大肠杆菌构建莽草酸生产菌 总被引:2,自引:0,他引:2
对大肠杆菌芳香族氨基酸合成途径进行代谢流改造, 以实现高效的生物制备莽草酸。以磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PTS系统)敲除菌DH5α△ptsHIcrr (DHP)为基础, 特异性敲除aroL、ydiB基因并转入受阿拉伯糖诱导表达的T7-RNA聚合酶基因, 最终构建一系列产莽草酸宿主菌。再将aroE、aroB、tktA、glk、aroFfbr组成的系列基因串联起来置于质粒上, 在T7启动子控制下表达, 经摇瓶培养检测得知, 不同重组菌产莽草酸能力与对照相比均有明显提高, 其中DHPYA-T7/pAOC-TGEFB菌株产量最高, 可达到392 mg/L。为进一步构建高表达莽草酸工程菌奠定基础。 相似文献
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目的:应用大肠杆菌表达系统表达纤溶性蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase。方法:运用PCR技术扩增人工合成的目的基因,引入Nde Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切位点;目的基因经Nde Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切后,克隆到pET22b载体上,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行胞内表达,对获得的包涵体进行体外透析复性;应用纤维蛋白原水解法、纤维蛋白平板法和纤维蛋白层叠法检测复性后蛋白的降纤活性。结果:目的蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中获得高表达,复性后的蛋白具有降解纤维蛋白(原)的活性。结论:Alfimeprase包涵体可以通过复性获得活性产物。 相似文献
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多肽类药物制剂研究现状 总被引:1,自引:0,他引:1
多肽类药物制剂研究所面临的主要问题是多肽的不稳定性、体内半衰期短和生物膜透过性差。本文综述了(1)引起多肽不稳定性的原因;(2)提高多肽稳定性的方法;(3)多肽类药物制剂货架时间的确定;(4)多肽类药物的分析手段;(5)多肽类药物的控释研究;(6)多肽的非注射途径给药研究。最后提出了多肽类药物制剂研究的展望。 相似文献
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经过10年的临床前和临床研究,Unigene公司的重组降钙素近期将向FDA提出申请。该药品拟以与普通药品相似的审批程序审批,因此公司不必证明该药品能缓解骨质疏松症状。普通药品公司仅需向FDA证明他们的药品 相似文献
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用重叠PCR技术将PTH(parathyroid hormone, 甲状旁腺激素)基因与TFN(transferrin N_terminal half_molecule, 转铁蛋白N端半分子)基因在体外融合,融合基因克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115。转化子经甲醇诱导后,融合蛋白得到了表达并分泌到发酵上清液中。经 SP Sepharose F F阳离子交换层析、Phenyl Sepharose Fast Flow疏水层析纯化获得了纯度大于95%的PTH_TFN样品。Western blot分析及腺苷酸环化酶实验证明融合蛋白中的PTH具有与抗PTH抗体结合能力及刺激腺苷酸环化酶的活性,铁饱和实验证明融合蛋白中的TFN和单独的TFN具有相同铁结合能力。因而TFN可望作为PTH的天然运输载体。 相似文献