胸腺素β10的研究进展

胸腺素β10(Tβ10)是胸腺素β家族成员。与Tβ4一样,Tβ10也是与细胞运动有关的肌动蛋白隐蔽蛋白。研究发现Tβ10可能与某些肿瘤行为,如细胞增殖、细胞凋亡、血管生成、肿瘤转移等相关。目前细胞中Tβ10作用的分子机制尚不明确。有研究表明,Tβ10有差别地表达于胚胎发生和神经发育过程中,在炎症及肿瘤发生时其表达量也有所上调,甚至过表达。我们简要综述了Tβ10的研究进展,包括差异表达、功能、机制,以及在肿瘤治疗、创伤愈合等疾病中的潜在应用。     

通过染色体整合表达古菌乙酰化酶合成N-末端乙酰化胸腺肽β4

胸腺肽β4（Tβ4）是N-末端乙酰化的43肽,具有多种重要生物学功能.其生物合成存在两大难点,即乙酰化修饰和小分子肽的表达.本研究发现来自古菌Sulfolobus solfataricus的乙酰化酶ssArd1可以催化Tβ4的N-末端乙酰化修饰.利用Red同源重组技术将ssArd1基因表达盒整合至E.coli BL21（DE3）染色体的lpxM位点上,构建了可以实现Tβ4N-末端乙酰化修饰的新型宿主E.coli BDA.将Tβ4编码基因融合在改造的微型Spl DnaX Intein的N端,并在Intein的C端添加His标签,构建了表达载体pET-Tβ4-Intein.在E.coli BDA中表达的融合蛋白,经镍亲和层析纯化后用β-巯基乙醇诱导融合蛋白切割释放小分子多肽,获得了具有N-末端乙酰化的Tβ4.     

MM3工程菌的大规模发酵培养工艺研究

首先在50L发酵罐上研究了MM3工程菌的发酵培养工艺。确定了接种量、搅拌转速、pH和补料速率等参数,活菌数可达每毫升211亿。以溶氧为放大准则可成功地将该工艺在200L国产发酵罐上再现。说明该工艺具有可放大性,可在全国各药厂推广应用。     

碳源和IPTG诱导对工程菌MM2表达CTB的影响

研究了不同碳源如葡萄糖、乳酸和乙酸以及IPTG诱导对工程菌MM2表达霍乱毒素B亚单位(CTB)的影响。在YC培养基中分别加入0.048mol/L的葡萄糖、0.102mol/L的乳酸和0.167mol/L的乙酸,它们在完全氧化后可产生相同的能量。结果表明,加入葡萄糖会大幅度降低ctb基因的表达水平,其原因和培养过程中pH值下降有关;加入乳酸可提高ctb基因表达水平1.15倍,且不抑制菌体生长;加入乙酸可提高ctb基因的表达水平0.9倍,但对菌体生长有抑制作用。不同时间及不同浓度的IPTG诱导未能提高ctb基因的表达水平,说明lac启动子对ctb基因的表达没有影响或影响很小。     

利用基因组比对方法寻找大肠杆菌DH1基因组中的非必需序列

目的:寻找大肠杆菌DH1基因组中的非必需序列。方法:采用基因组比对的方法,通过软件MAUVE分别对大肠杆菌DH1与miniMG1655、miniW3110进行基因组比对,筛选得到大肠杆菌DH1基因组中的候选非必需序列,进而以基因必需性评分的方法确定非必需序列。结果与结论:通过基因组比对及基因必需性评分的方法,确定了大肠杆菌DH1基因组中64个非必需序列区域,占全基因组的26.3%。非必需序列区域的确定,为后续构建基因组减小的大肠杆菌miniDH1提供了基础。     

基因组编码小分子蛋白质研究进展

不超过50个氨基酸组成的蛋白在所有生物体中表现的特征都不明显.对其相应的基进行确实可靠的注释非常具有挑战性.由从细胞中纯化和鉴定小分子蛋白产物极其困难,难以确切知道细胞内有多少小分子蛋白,更不用说研究它们的生物学功能了.但越来越多的例子表明,小分子蛋白在细胞中分布广泛,而且有着不同的细胞生理学功能.本文即是对小分子蛋白研究进展的简要总结.     

新型佐剂——鞭毛蛋白及其突变体的原核表达和纯化

目的:改构鞭毛蛋白可变区,并优化目的蛋白表达与纯化参数,为评价并获得新型高效蛋白佐剂奠定基础。方法:以鼠伤寒沙门菌基因组为模板钓取2种鞭毛蛋白FljB和FliC的编码基因,分别构建FljB和FliC及其对应的删除可变区的突变体BNLC和CNLC的表达载体,在大肠杆菌中诱导表达,并纯化目的蛋白。结果与结论:原初鞭毛蛋白FljB和FliC均以胞内可溶形式表达,而改造后的鞭毛蛋白BNLC和CNLC则以包涵体形式表达。通过优化纯化条件,分别建立了针对4种蛋白的纯化方法,得到无热源、纯度大于95%的目的蛋白,为进一步研究鞭毛蛋白的结构与佐剂效应的关系奠定了基础。     

胸腺肽β4研究进展

β胸腺肽是一个多肽家族,由高度保守的极性氨基酸组成,相对分子质量约5000.研究表明,在绝大多数哺乳动物组织中,胸腺肽β4都是该家族丰度最高的成员。1991年发现胸腺肽β4是人血小板中主要的肌动蛋白隐蔽肽,随后发现它在创伤愈合和血管生成、角膜修复、抑制炎症及肿瘤转移等方面具有重要作用。我们简要综述胸腺肽β4的上述作用及临床应用的研究进展。     

培养条件对重组大肠杆菌生长及外源基因表达的影响

重组DNA技术发展至今,已有许多外源基因在大肠杆菌中获得表达,其中一些产品已投放市场。这些产品所以能进行大量生产在很大程度上得益于发酵培养技术的完善。本文综述培养基、温度、pH、溶氧、比生长速率等对重组大肠杆菌生长、外源基因表达及产物存在形式的影响,并探讨了提高表达水平的途径。     

通过一种新方法使T7基因Ⅰ置换araBAD基因簇

目的：用T7RNA聚合酶基因T7基因Ⅰ置换大肠杆菌基因组中的araBAD基因簇。方法：通过分析大肠杆菌基因组中araBAD基因序列,设计两侧同源臂,构建高拷贝数的打靶质粒,并且在这个质粒上的打靶片段两侧各加上一个归巢内切酶位点;将辅助质粒和打靶质粒同时转化到宿主体内,在L-阿拉伯糖的诱导下表达归巢内切酶和Red重组酶,实现体内重组,使T7基因I置换araBAD基因簇。结果：在4株不同的大肠杆菌中用T7基因I置换了araBAD基因簇。结论：成功地将T7基因Ⅰ整合到araBAD基因位置,为构建PAra-PT7表达系统奠定了基础。