ASCT2胞外域ECL2原核可溶性表达条件的优化及其纯化

目的构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体,优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件,并获得纯化的ECL2蛋白。方法以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段,插入至pET-41b载体中,构建ECL2的原核表达载体,转化至大肠埃希菌,优化可溶性表达条件,GSH—Agarose亲和层析纯化并鉴定,与MCF-7细胞结合活性的测定。结果免疫印迹显示,ECL2融合蛋白既表达于包涵体中,也能以可溶性形式表达。随IPTG浓度的增高,可溶性表达水平提高;培养温度为28℃和33℃时可溶性产物高于37℃;而随诱导时间的延长至12h以上,可溶性表达量下降。可溶性表达优化条件为：温度33℃、IPTG浓度0．4mmol／L、诱导时间4h。经亲和层析获得高纯度ECL2蛋白并具有与MCF-7细胞结合活性。结论优化了ECL2融合蛋白的可溶性表达条件,通过亲和层析一步法可获得高纯度融合蛋白。     

体外共表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M蛋白可形成异源二聚体

为了探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因编码的GP5蛋白和ORF6编码的M蛋白体外共表达特性,分别构建了PRRSV ORF5、ORF6单基因或双基因共表达的真核表达质粒pCI-ORF5、pCI-ORF6和pCI-ORF5/ORF6,转染BHK-21细胞,Western blot检测证实共表达的GP5和M蛋白能够形成异源二聚体。同时,以绿色荧光蛋白(EGFP)和红色荧光蛋白(RFP)为示踪,发现当ORF5-EGFP和ORF6-RFP共表达时,能促进GP5蛋白从内质网向高尔基体转运,提示GP5-M异源二聚体的形成可能与GP5蛋白的翻译后修饰、转运、定位有关。     

SARS患者尸检肺组织的TGF-β检测

为了研究TGFβ1在严重急性呼吸综合征(Severeacuterespiratorysyndrome,SARS)尸检肺组织中的表达情况及其在患者肺组织损伤中的可能作用,对2例SARS尸检肺组织进行病理学观察;应用免疫组化方法检测TGFβ1在尸检肺组织及对照肺组织中的表达情况,并进行半定量分析。结果显示病例一尸检肺组织主要病理改变为弥漫性肺泡损伤,透明膜形成及渗出性炎症。病例二尸检肺组织除了上述改变外,还伴有肺泡间质纤维增生和肺泡早期纤维化等机化性肺炎改变。TGFβ1平均灰度值在SARS患者肺组织为103.43±0.62;小叶性肺炎组织为131.47±2.64;正常肺组织中为144.24±0.09。3组比较有显著差别(P值<0.05)。SARS病毒感染后可引起急性肺间质和肺泡渗出性炎症,中后期病例还伴有肺泡间质纤维增生和肺泡早期纤维化;SARS患者肺组织损伤及纤维化与SARS冠状病毒感染后TGFβ1表达增强有关,提示抗TGFβ1治疗在SARS患者肺损伤、纤维化的预防、治疗过程中可能具有一定的临床意义。     

维甲酸与星状孢子素联合分化诱导HL—60细胞过程中酪氨酸蛋白…

以人早幼粒因病细胞株（ＨＬ－６０）为材料，对维甲酸与星状孢子素联合诱导ＨＬ－６０细胞过程中胞浆和膜部分的蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化进行了研究，结果表明，诱导后２－２４ｈ范围内，ＴＰＫ活力出现波动，随时间延长（２４－２７ｈ），胞浆部分ＴＰＫ活力下降，膜溶脱部分ＴＰＫ活力上升；ＰＴＰＰ活力明显升高且上升幅度比ＴＰＫ大得多，利用ｔｙｒ－ＢＳＡ抗体分析底物含量变化的结果与相应时相的ＴＰＫ和ＰＴＰＰ活力变化     

生物多样性与生态系统服务关系研究进展

生物多样性与生态系统服务关系是当前生态学研究的热点之一,2005年千年生态系统评估之后如何将两者关系应用到生态系统管理和政策制定中逐渐受到重视。然而,从理论上的两者关系认知到应用上的管理实践仍面临着严峻挑战,梳理已有研究成果有利于更好地指导管理实践。本文基于近年生物多样性与生态系统服务关系的主要研究成果,从生物多样性对生态系统单种服务、多种服务、生态系统服务权衡的影响以及环境变化如何影响这些关系等方面,总结了两者关系的主要研究进展,概述了两者关系在自然保护区管理、森林生态系统管理、退化生态系统恢复和农业生态系统改善等领域中的应用,分析了两者关系研究中依然存在的不足之处,强调未来需加强的研究方向主要包括: 生物多样性不同组分相互作用和多营养级生物多样性相互关系对生态系统服务的影响、环境耦合变化对两者关系的复合效应以及生物多样性改善生态系统服务的实践途径。     

化肥减量配施有机肥对棉田土壤微生物生物量、酶活性和棉花产量的影响

在甘肃河西走廊棉区进行连续3年的定位施肥试验,研究了化肥减量20%～40%并配施不同有机肥对棉田土壤微生物生物量、酶活性和棉花产量的影响。结果表明:与单施化肥相比,化肥减量配施有机肥能显著提高土壤细菌和放线菌数量,降低土壤真菌数量,化肥减量配施普通有机肥加生物有机肥(COBF₂)处理土壤细菌最多,较单施化肥(CF)在棉花蕾期、铃期和吐絮期分别提高了84.6%、57.1%和43.5%,化肥减量配施生物有机肥(CBF₂)处理放线菌数量最多,较CF在棉花蕾期、铃期和吐絮期分别提高了28.2%、32.7%和32.2%,CBF₂土壤真菌数量最低,较CF在棉花蕾期、铃期和吐絮期分别降低了35.8%、29.3%和13.4%。化肥减量配施有机肥提高了土壤细菌/真菌、放线菌/真菌和脲酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶活性,其中COBF₂对酶活性的提升最有效。化肥减量配施有机肥提高了棉花单株铃数,对棉花长势、地上干物质积累有一定的促进作用,COBF₂棉花产量最高,籽棉和皮棉产量分别较CF提高了14.2%和10.9%,增产显著。综合分析土壤微生物生物量、酶活性和棉花产量,COBF₂处理,即化肥减量40%配施1800 kg·hm^-2普通有机肥和600 kg·hm^-2生物有机肥效果最佳。     

囊泡运输的探秘者：兰迪？谢克曼

2013年10月7日凌晨,加州大学伯克利分校的兰迪·谢克曼教授正在加利福尼亚的家中熟睡。此时,电话响起一阵清脆的铃声。谢克曼太太被惊醒,马上意识到喜事临门,她兴奋地大声尖叫：“得奖了!     

囊泡：另类的快递员——2013年诺贝尔生理学或医学奖解读

2013年10月7日,詹姆斯·罗斯曼、兰迪·谢克曼和托马斯·聚德霍夫三位科学家,因破解了“囊泡运输调控机制”之谜,而获得了2013年诺贝尔生理学或医学奖。     

囊泡运输的探秘者：詹姆斯？罗斯曼

听到获奖消息感觉似“灵魂出窍” 现任职于母校耶鲁大学医学院细胞生物学系的詹姆斯·罗斯曼,在深夜接到诺贝尔奖委员会的获奖通知电话时正在睡觉。罗斯曼在听到获奖消息后非常震惊,他形容那一刻感觉有如“灵魂出窍”。要求媒体的记者先给自己十分钟洗澡镇定—下,再接受采访。