鼠肝质膜蛋白质组研究的方法评估

细胞质膜是细胞中重要的细胞器, 在肝功能的发挥中具有非常重要的作用. 使用蔗糖密度梯度离心纯化细胞质膜, 通过电子显微镜观察和免疫印迹法检验膜的纯度. 结果显示, 与组织匀浆成分相比, 质膜富集了20倍, 线粒体的污染减少了约50%. 提取的蛋白质用二/一维凝胶电泳(2DE/1DE)分离、胰酶酶解、电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定, 或者提取的蛋白质直接进行溶液内酶解、液相色谱串联电喷雾离子阱质谱(LC-LTQ)(鸟枪法)鉴定. 一共鉴定了547个非冗余蛋白质, 其中34%为质膜或质膜相关蛋白质. 优化和评估了质膜蛋白质组研究的方法, 且对鼠肝质膜蛋白质组进行了系统的分析.     

海拔对大熊猫主食竹结构、营养及大熊猫季节性分布的影响

大熊猫主要采食竹子,因此主食竹对大熊猫生存具有重要的作用。在秦岭的佛坪地区的大熊猫主要取食巴山木竹以及秦岭箭竹。本文研究了海拔对这两种竹林的结构与营养含量的影响以及海拔与大熊猫季节性分布的关系。结果表明：（1）海拔对竹林基径、株高有显著影响（p0.05）;整齐度、均匀度、基径和株高分布的偏度值和峰度值均随海拔变化而变化。（2）海拔对主食竹营养含量的显著影响随季节而变化（春季粗蛋白和总糖p=0.02;夏季粗纤维p=0.01;秋季粗蛋白p=0.04、粗纤维p=0.04和总糖p0.01）。每个竹种在叶、枝、杆三个部位间的营养均有显著性差异（p0.05）。（3）海拔对竹林结构及营养的显著影响决定了大熊猫对主食竹的取食策略,夏季在高海拔活动,其余季节在低海拔活动。本文的研究结果对理解海拔、主食竹结构、营养以及大熊猫迁移活动之间的关系有重要作用,为圈养大熊猫的饲料配比提供理论依据,也为野外大熊猫的保护和规范保护区内部的人类活动提供科学支撑。     

次级淋巴趋化因子SLC的克隆及其在原核系统中的表达

以中国人的淋巴组织为材料抽提总RNA,用RTPCR的方法扩增了次级淋巴组织趋化因子(Secondary lymphoid\|tissue chemokine,SLC)的成熟肽基因。序列分析表明,我们克隆的SLC基因与文献报道的仅有一个核苷酸的差异,且并不影响氨基酸的编码。将SLC的cDNA插入含T7启动子的表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET-SLC,转化大肠杆菌BL21(DE3)筛选表达菌株。表达菌株经1mmol/L IPTG诱导表达3～5h后,超声破菌,离心后将上清进行SDS-PAGE,可以看到在18kD左右处有明显的表达条带。用Ni2+亲和层析柱纯化表达产物,纯度达到90%以上。     

ADAM家族研究进展

ＡＤＡＭ家族是近年来发现的一类锚定于细胞膜的细胞表面蛋白家族,该家族成员具有４个较为保守的潜在功能域,在细胞间粘连和融合等活动中有重要作用。迄今为止已有２５个成员被发现,它们在精卵结合、肌细胞融合、膜蛋白分子的加工等生理过程中发挥重要功能。     

嗜热脂肪芽孢杆菌高温蛋白酶的产生条件及酶学性质

对嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilis)WF146的产蛋白酶的条件进行了研究,在58℃条件下,WF146在pH值为75的Fd培养基中振荡发酵培养48h后,发酵液中高温蛋白酶产量可达600u/mL以上。对该酶性质的研究表明,酶分子量为34kD,最适作用pH为80,最适作用温度为80℃,具有良好的pH稳定性及热稳定性。Ca2+对该酶的稳定性具有重要影响,PMSF、DFP及IAA能强烈抑制酶活力,而DTT对该蛋白酶活力无影响     

伊曲康唑治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染患者的疗效和安全性分析

目的 评价伊曲康唑治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染患者的疗效和安全性.方法 回顾性分析伊曲康唑治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染患者的有效性和安全性.治疗方法:静脉注射伊曲康唑0.2g静脉滴注q12h 1天或者2天后改为伊曲康唑0.2g静脉滴注qd,疗程2～4周.结果 共有16例患者符合入选标准和排除标准纳入本研究,男女比例为3∶1.其中4例由白色念珠菌感染所造成,4例为热带念珠菌感染,8例为曲霉感染.临床结果:4例肝衰竭合并白色念珠菌感染患者,其中3例治愈出院,1例死于肝衰竭.4例肝衰竭合并热带假丝酵母感染患者,其中2例治愈出院,1例死于肺部感染,1例死于肝衰竭.8例肝衰竭合并肺曲菌病感染患者中,5例感染控制,其中2例治愈出院,2例接受肝移植,1例死于肝衰竭.3例肺部感染加重,死于呼吸衰竭.结论 伊曲康唑治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染安全有效,可以作为治疗肝衰竭合并侵袭性肺部真菌感染患者的选择.     

高效缺氧诱导表达载体的构建与鉴定

目的：构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法：通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件（HRE）和最小CMV（mCMV）启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）或萤光素酶报告基因的可诱导载体;通过酶切鉴定和测序分析,证实载体获得正确的构建;将重组载体转染HeLa细胞,观察EGFP荧光强度并检测萤光素酶活性。结果：HRE／mCMV启动子调控的报告基因载体具有特异和高效的诱导活性。结论：构建了可以进行特异和高效缺氧诱导的报告基因载体,为其进一步的开发和应用奠定了实验基础。     

根皮素对HepG2肝癌细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的：探讨根皮素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测不同浓度（30、40、50 ug/mL）根皮素对肝癌 HepG2 细胞增殖的抑制作用,流式细胞技术检测根皮素对HepG2细胞凋亡的影响,ELISA 法检测不同浓度根皮素干预后细胞中 Bcl-2 和Bax表达的变化,Western blot法检测30 ug/mL根皮素在8,16,24 小时后检测p-AKT 蛋白表达情况。结果：30、40 和50 ug/mL 的根皮素对肝癌HepG2 细胞的增殖均有抑制作用（P＜0.01）,同时,30、40 和50 ug/mL 的根皮素在24 小时后可诱导 HepG2 细胞发生早期凋亡,凋亡率分别为0.1321± 0.0224, 0.2607± 0.0457, 0.3712± 0.0884（P＜0.01）;另外,30、40 和50 ug/mL的 根皮素作用24 小时后细胞内Bcl-2 表达降低,Bax 表达增高（P＜0.01）;最后,30 ug/mL根皮素可以明显减少p-AKT 表达量,这 种作用呈现时间依赖性。结论：根皮素能够抑制肝癌HepG2 细胞的增殖和促进细胞凋亡。     

免疫磁珠法分离纯化胚胎大鼠脊髓源运动神经元的方法探讨

目的探讨应用免疫磁珠法分选脊髓源性运动神经元的实验条件,为研究运动神经元的特性,培养和移植创造有利条件。方法取孕16天胚胎大鼠的脊髓腹侧组织,制备成单细胞悬液,应用免疫磁珠分选系统,在无血清限定性培养基条件下获得相对纯化的运动神经元。应用运动神经元特异的胆碱乙酰转移酶（ChAT）抗体对培养细胞进行免疫细胞化学鉴定。结果分离纯化的细胞在体外可以存活,经免疫荧光检测,ChAT阳性率可达95%。结论本实验提供了一种有效的纯化脊髓运动神经元的方法,纯化所得的运动神经元可用于进一步的运动神经元的后续实验研究。     

衣原体逃逸宿主免疫反应机制研究进展

衣原体感染常表现为持续性感染,能够引起人和动物的多种慢性疾病。衣原体成功逃逸宿主免疫反应是其维持持续感染的前提,目前已知衣原体可通过逃避宿主细胞溶酶体融合、调控宿主细胞免疫反应、干扰宿主细胞凋亡与自噬活动以及诱导宿主细胞蛋白质组改变等方式逃逸宿主免疫反应。现就衣原体逃逸宿主免疫反应的相关研究作一综述。