miR-155对肝癌细胞增殖的影响

目的:在肝癌细胞系中过表达miR-155,研究其对肝癌细胞增殖的影响。方法:将pc DNA3.0-miR-155表达载体瞬时转染Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系,通过实时定量PCR技术对miR-155在转录水平的表达进行检测,采用CCK8法及克隆形成实验检测miR-155过表达后对Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系增殖的影响。结果:转染细胞后72 h,经实时定量PCR检测,Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞中成熟miR-155的表达分别上调约431及16倍(P0.01),说明其能有效高表达;CCK8法及克隆形成实验结果显示,miR-155能够明显促进肝癌细胞增殖(P0.01)。结论:pc DNA3.0-miR-155转染Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系后能高效表达成熟miR-155,同时证明过表达miR-155能使肝癌细胞的增殖受到非常明显的促进。     

‘正午’牡丹微繁殖体系的建立

本研究以‘正午’牡丹腋芽为外植体,建立了高效的牡丹微繁殖体系。腋芽的初始培养基为WPM+0.5mg/L BA+0.2mg/L GA3,培养50d后,一个丛生芽平均可切分为13个繁殖体用于增殖培养;增殖培养基为WPM[1668mg/L Ca(NO3)2·4H2O]+0.5mg/L BA+0.2mg/L GA3,以35d为一个继代培养周期,增殖率为3.0,共继代培养7次;生根培养时,先将无根苗在复壮培养基[1/2MS(296mg/L CaCl2)+0.5g/L活性炭]上培养20d,再转入根诱导培养基[1/2 MS(296 mg/L CaCl2)+1.0 mg/L腐胺+1.0 mg/L IBA]培养30d,最后转入根形成培养基[1/2 MS(296mg/L CaCl2)+4.0g/L活性炭]培养20d,其生根率达77.2%;驯化与移栽基质为珍珠岩∶蛭石∶草炭土=1∶1∶1,组培苗移栽成活率高达92.1%。这表明以‘正午’牡丹腋芽建立的微繁殖体系具备规模化商业生产的价值。     

携带TGEV DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及安全性与免疫性分析

【目的】探讨以减毒沙门氏菌为载体,进行TGEV DNA疫苗口服免疫可行性。【方法】通过RT-PCR扩增TGEV四川株（SC-H）S基因5’端约2.1 kb的主要抗原位点片段,将其插入真核表达载体pVAX1,构建重组质粒pVAX-S,体外转染COS7细胞,间接免疫荧光检测S基因表达。通过电转化将pVAX-S转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建SL7207（pVAX-S）重组菌,并在体外感染小鼠腹腔巨噬细胞,以RT-PCR、间接免疫荧光检测细胞内S基因的转录与表达情况。将SL7207（pVAX-S）重组菌以5×108、1×109、2×109CFU剂量口服接种BALB/c小鼠,分析其安全性,并以1×109CFU剂量的重组菌3次免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA检测免疫小鼠的血清IgG与肠道粘膜IgA抗体。【结果】成功构建重组质粒pVAX-S,且重组质粒能在COS7细胞中表达。重组菌SL7207（pVAX-S）感染巨噬细胞后检测到目的基因的转录、表达。小鼠口服接种不同剂量重组菌,具有良好的安全性。免疫小鼠于二免后两周可检测到针对TGEV S蛋白的特异性血清IgG与肠道粘膜IgA抗体,且三免后两周与SL7207（pVAX1）空载体免疫组间分别存在显著性差异（P<0.05）和极显著性差异（P<0.01）。【结论】携带TGEV DNA疫苗的减毒沙门氏菌小鼠试验显示了良好的免疫原性与安全性。     

糖基转移酶基因rbfCxoo缺失突变导致水稻白叶枯病菌毒性表达增强

摘 要：【目的】阐明水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,简称Xoo)基因组中推导的脂多糖O抗原合成蛋白基因rbfCxoo (XOO2599) 的结构和生物学功能。【方法】通过基因克隆、序列分析、缺失突变和表型测定,对rbfCxoo的分子特征及其功能进行了鉴定。【结果】 用特异性引物进行PCR扩增,从野生型菌株PXO99A基因组DNA中成功地获得了与己测序菌株KACC10331序列完全一致的全长基因序列; RbfCxoo序列N端和C端分别具有一个糖基转移酶的保守结构域(Glycos_transf_2)。用标记置换法获得了基因缺失突变体△rbfCxoo。与PXO99A相比,△rbfCxoo 脂多糖O抗原合成能力并未发生变化,但鞭毛素糖基化能力有所降低。此外,△rbfCxoo鞭毛运动性、生物膜形成和胞外纤维素酶和木聚糖酶活性都无明显改变,但对水稻的致病性显著增强,毒性相关基因的表达也有所增加。【结论】RbfCxoo可能与细菌鞭毛素糖基化修饰以及毒性表达有关。     

siRNA分析nm23-H1基因与人慢性髓性白血病的关系

设计并筛选靶向nm23-H1基因的siRNAs序列,探讨nm23-H1基因与人慢性髓性白血病之间的关系。依据siRNA设计原则,设计3条siRNA序列。将不同靶点的siRNA用lipofectamine2000转染人慢性髓性白血病细胞株K562。转染后24h RTPCR检测nm23-H1mRNA水平变化;转染后48h免疫细胞化学法检测nm23-H1蛋白表达。MTT法检测转染后24h、48h和72h有效siRNA对K562细胞生长的影响。3条siRNA中,siNM526能有效地抑制K562细胞nm23-H1基因表达,转染siNM526的K56细胞生长受到抑制。说明下调nm23-H1基因的表达有抑制K562细胞增殖的作用,即降低了K562细胞的恶性程度。nm23-H基因有可能成为白血病治疗潜在的分子靶点。     

模拟酸雨对柚木幼苗生长、光合与水分利用的影响

模拟pH6.5(对照)、4.5和2.5三个酸雨梯度,研究其对1a生组培柚木(TectonagrandisL.f.)幼苗生长、光合与水分利用的影响。结果表明,尽管不同处理间的各项生理指标差异不明显,但模拟酸雨对柚木形态构件参数造成较严重的影响。pH4.5和pH2.5处理组柚木基径(D)和树高(H)增长明显下降,使得D2H下降更加显著;不同处理下柚木叶片净光合速率(Pn)和蒸腾速率(E)日变化趋于一致,气孔导度(gs)日变化与对应的叶片净光合速率日变化十分相似,同时,对照与两个处理的Pn与gs之间都表现正相关(p<0.01),且在pH4.5处理表现更为显著,但是对照和两个处理的E与gs的线性关系不显著;pH4.5和2.5处理的水分利用效率(WUE)日变化趋于一致;对照胞间CO2浓度与大气CO2浓度比(Ci/Ca)均值最低,表明对照柚木对CO2利用最有效。     

基于序列分析的天蚕素A串连融合表达载体的构建

天蚕素A(Cecropin A,CA)是来源于惜古比天蚕(Hyalophoracecropia)的含有37个氨基酸的抗菌肽,在非极性环境中形成α螺旋型结构,具有抗菌活性强、抗菌谱广等特点。为降低天蚕素A对宿主的毒性及提高其表达丰度和稳定性,在序列分析的基础上设计了3条天蚕素A氨基酸序列,分别为CA19、CA36和CA210。根据大肠杆菌密码子的偏爱性分别合成相应的3对寡核苷酸链,并通过重叠PCR方法合成成熟肽CA。将含有CA19、CA36、CA210和CA1～5个拷贝基因的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)和BLR(DE3)PlysS,成功构建了串连融合表达载体,为下一步的抗菌活性及免疫表位的分析打下基础。     

过敏性紫癜患儿急性期免疫学指标的变化及意义

目的:探讨过敏性紫癜(HSP)患儿急性期淋巴细胞亚群和免疫球蛋白的变化及其临床意义.方法:采用流式细胞仪(FCM)和全自动生化分析仪检测46例HSP患儿和30例健康儿童外周血淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56和免疫球蛋白IgA、IgM、IgG及补体C3、CA.结果:与健康儿童组比较,HSP患儿外周血CD4、CD4/CD8、CD16+56细胞水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01);CD8、CD19水平明显升高(P＜0.05).36/46(78.3%)HSP患儿出现血清IgA、IgG或IgM水平异常.免疫球蛋白异常的HSP患儿有16/36(44.4%)出现肾脏或者消化道并发症,而免疫球蛋白正常的HSP患儿有2/10(20.0%)出现肾或者消化道并发症(P＜0.05).32/46(69.6%)HSP患儿血清IgA水平升高,其中10/32(31.3%)例HSP患儿出现紫癜性肾炎(HSPN);而血清IgA水平正常HSP患儿有1/14(7.1%)出现HSPN(P＜0.01).结论:HSP患儿急性期存在细胞和体液免疫功能紊乱.IgA升高患儿易出现肾脏或者消化道并发症.     

内蒙古头蝇三新种及—中国新记录种(双翅目:头蝇科)

双翅目(Diptera)芒角亚目(Aristocera)无缝组(Aschiza)的头蝇科(Pipunculidae)昆虫多为小型暗色种类,体短翅长,头球形或半球形,复眼红褐色,占据头的大部分,雄虫腹端向上左扭转弯向腹面,雌虫产卵器长而尖弯在腹下。 头蝇为同翅目叶蝉、飞虱等害虫的寄生性天敌;常见于草原和农田,低飞徘徊寻找寄主若虫产卵。我国的头蝇曾记述30多种,都是南方种类,近年我们报道了一些北方的新种,内蒙古则缺乏调查。本文初次描记内蒙3新种及1中国新记录种,模式标本均保存在北京农业大学昆虫标本室。     

金针菇细胞色素c过氧化物酶基因（ffccp）及其在菌柄伸长的差异表达初步分析

细胞色素c过氧化物酶（cytochrome C peroxidase,CcP）是细胞内H₂O₂的主要降解酶,参与真菌的氧化应答过程。本研究基于基因组数据获得一个金针菇细胞色素c过氧化物酶编码基因,命名为ffccp。该基因全长1 913bp,包含一个1 098bp的完整开放阅读框,编码365个氨基酸。生物信息学分析结果显示,该基因编码的蛋白质（FfCcP）无跨膜结构和信号肽,不形成二硫键结构,亚细胞定位于线粒体上,具备血红素结合蛋白的保守位点。序列比对和进化分析结果显示,金针菇与糙皮侧耳Pleurotus ostreatus等大型真菌的CcP序列高度相似（相似度均超过70%）,属于CcP家族蛋白。RT-qPCR的检测结果显示,氧化胁迫和损伤胁迫均能诱导ffccp基因上调表达,但两种胁迫对ffccp表达的调控机制可能并不相同。进一步检测ffccp在子实体发育过程中的差异表达情况,发现ffccp在伸长期菌柄出现显著上调表达,且表达量与菌柄伸长速度的相关性达到0.998,为极强正相关。推测ffccp的上调表达可能有利于菌柄的伸长。