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羟胺切割Neurturin融合蛋白表达载体的构建、表达产物纯化及生物活性 总被引:4,自引:0,他引:4
Neurturin (NTN)是新近发现的一种神经营养因子 ,是 GDNF家族的成员之一 .将 5′端引入了羟胺切割位点的 h NTN基因克隆到硫氧还蛋白融合表达载体 p Thio His A,在宿主菌 BL2 1中获得了稳定、高效表达 ,表达产物以包涵体形式存在 .在变性条件下经羟胺切割、柱层析纯化后复性 ,获得纯度达 90 %以上的 rh NTN.经鸡胚背根神经节 (DRG)培养法测定具有生物学活性 . 相似文献
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Neurturin基因克隆及在大肠杆菌中表达 总被引:1,自引:0,他引:1
Neurturin( N T N)是最近发现的一种与胶质细胞源性神经营养因子( G D N F)相关的神经营养因子.利用 P C R 方法以染色体 D N A 为模板,扩增获得了编码人 N T N 成熟蛋白的基因,将其克隆于 p U C19 质粒,进行序列分析,结果与文献报道一致.将基因重组于硫氧还蛋白融合表达载体p Thio His 系统,在宿主菌 Top10 中获得了高效、稳定表达,表达的h N T N 占菌体总蛋白 20% 左右.这为进一步的基础研究与临床应用奠定了基础. 相似文献
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戊型肝炎病毒DNA免疫的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
利用PCR方法获得1
163 bp的戊型肝炎(Hepatitis E Virus,HEV)开放读码框架(Open Reading
Frame,ORF)ORF2之3’大片段和369bp ORF3的完整片段,分别克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建两种含有HEV主要抗原表位的质粒DNApcE2和pcE3,分别或混合免疫Swiss小鼠三次(0时,第2周,第4周),观察其在小鼠体内诱发的体液免疫应答。ELISA检测结果表明,pcE2和pcE3在小鼠体内均可诱导出一定水平的HEVIgG抗体,且在第三次免疫接种两周后,100%的小鼠抗体阳转。与两种质粒单独免疫相比,两者同时注射的抗体水平较高。本研究为HEVDNA疫苗的研究打下一定基础。 相似文献
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两种pUC18高效T载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
T载体是用于直接克隆PCR产物的线性载体.在此之前,克隆PCR片段时一般先用Klenow片段酶或T4DNA聚合酶削平PCR产物两端,克隆过程中又大都不能使用碱性磷酸酶为载体片段脱磷,因为绝大多数PCR引物5’端未磷酸化,T载体的诞生使分子生物学工作者摆脱了这一窘境,而且,T载体的3’端突出的T碱基与PCR产物3’端由于Taq酶非模板依赖的末端转移酶活性而添加的A碱基[1]互补,使载体与PCR产物的连接效率大大提高.由于具有上述优点,T载体从一产生就引起人们极大的兴趣,很多公司也相继推出了各自的T载体系统,并运用该技术改造了很多传统载体.本… 相似文献
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从超数排卵的14只母兔获得438枚受精卵,卵龄16~22小时.显微操作在带微分干涉和相差的Nikon倒置显微镜下进行.注射针的尖端外也0.5μm,离尖端40和80μm处的外径分别为4.2和6.5μm.注射用外源基因是绵羊生长激素基因与MT-1启动基因藕连的线状DNA溶液(1ng/μl).140枚注射的受精卵和未注射的145枚受精卵(对照),在Ham’sF—10培养液(补充生长因子)中培养(38℃,5%的CO2).结果,培养48小时后,注射组卵裂发育率分别是:未卵裂7.9%(11/140)、卵裂至2~4细胞期11.0%(16/140)、卵裂至8~16细胞期80.7%(113/140).对照组相应的卵裂率分别是4.1%(6/145)、12.4%(18/145)和83.4%(121/145).两组卵裂发育率相近.本实验的显微操作对注射后卵的发育没有产生明显的伤害影响. 相似文献
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