人促红细胞生成素基因的合成及在大肠杆菌中的表达

人促红细胞生成素(简称hEPO)是一种能够促进祖红细胞分化发育并进而促进红细胞生成的细胞生长因子,它在临床上可用以治疗某些贫血病人特别是由于慢性肾衰所引起的肾性贫血^〔1－3〕．hEPO是一种由166个氨基酸组成的糖基化蛋白质．它的前体还带有27个氨基酸的信号肽^〔4－6〕。有两对由Cys7-Cys161和Cys29－Cys33组成的二硫键,其糖基化位点为Ash--24。Ash一38．Asn一83和Ser一126^〔7－8〕。由于天然来源hEPO的量极少．因此通过基因工程的手段是当前获得大量hEPO的较好的途径^〔9－10〕。我们在前文中曾经报道用单链方法合成天花粉胰蛋白酶抑制荆基因〔11〕以及用单链和PCR相结合来合成绿豆胰蛋白酶抑制荆基因的方法〔12〕．我们在合成hEPO基固(包括带有信号肽的hEPO基因)时也采用了这两种方法：合成的hEPO基因在大脑杆菌、CHO细胞和昆虫细胞中均得到表达。本文报道hEPO基因的合成及在大肠杆菌中的表达结果。     

克隆的口蹄疫病毒蛋白疫苗——在牛和猪体内的反应

从口蹄疫病毒A_(12)的病毒粒子RNA中制取得到编码其致免疫的衣壳蛋白VP_3的DNA序列,并把它接到质粒上,通过大肠杆菌色氨酸起动—操纵系统表达出一个嵌合蛋白。当被这个质粒转化的大肠杆菌在无色氨酸培养基上生长时,全部细胞蛋白中有大约17％是不溶性的,稳定嵌合蛋白。纯化的嵌合蛋白与口蹄疫病毒的VP_3蛋白等克分子地竞争抗口蹄病毒的特异性抗体。给六头牛、二头猪接种这种蛋白能诱发出高水平的中和抗体和抗口蹄疫病毒侵袭的保护反应。     

苏芸金杆菌的一个新血清型

苏芸金杆菌云南变种(Bacillus thurtngtensts subsp. Yunnanensis)113菌株的H-抗原和 H-抗血清均与已知苏芸金杆菌H一血清型l到19的所有参考标准菌株的H一抗血清和H一抗原不发生交叉凝集反应。113菌株的生化反应结果与所有参考标准菌株也不相同。此外,113菌株对致倦库蚊(Culex pipiens var. quinquefaseiatces)(双翅目)(Bombyx mori) (鳞翅目)幼虫均无毒性。 因此,113菌株是一个新血清型20,即苏芸金杆菌云南变种,血清型20(Bacillus thuringiensis subsp. Yunnanensis H20)。     

质粒R100.1汞抗性基因表达的调控

利用Mud1(Ap~rlac)噬菌体将lac结构基因融合到质粒R100.1的汞基因(mer)中,得到了47株mer-lac基因融合菌株。根据这些菌的互补试验、对氯化汞的敏感性以及氯化汞对β-半乳糖苷酶诱导特性,可把这些菌分为3类:merA-lac merR-lac和merO或P-lac。从这些试验也可看出mer基因表达象阿拉伯糖(ara)操纵子那样是受双重调节的。     

相变:一种控制因子的进化

细菌中的相变受某一特异DNA位点上同源重组的调节。这种重组事件引起一段970碱基对的倒位,这段DNA序列包括鞭毛基因转录所必要的启动子。这个可倒位的片段的两侧为倒位所必需的位点并包含有其产物能执行倒位的一个基因(hin)。hin基因与所在转座子Tn3上携带的TnpR基因显示广泛的同源性,也与在细菌噬菌体Mu上所携带的gin基因有同源性。这些关系表明相变系统可以通过转座子与一个固有的基因相结合而发生进化,随后这些因子特异化,从而调节鞭毛抗体的表达。     

寡聚脱氧核苷酸d(G-C)_3的激光喇曼谱及其分析

用改进的固相磷酰三酯法合成了oligo-d(G-C)_3。以氩离子激光为激发光源,波长488nm.,在室温条件下,分别测定了纯化后的oligo-d(G-C)_3和其组分单体5’-dGMP和5’-dCMP的激光喇曼谱。观察到被测定的物质在300-2500cm~(-1)频率区间,各自都有其特征的谱形和喇曼峰。5’-dGMP和5’-dCMP谱中大多数特征峰在寡聚体的谱中消失,而在oligo-d(G-C)_3谱中出现了几处新的喇曼峰。经查证,峰832,851和899cm~(-1)系糖-磷酸主链的特征喇曼峰,另外几处峰与DNA的构象有关。实验结果表明oligo-d(G-C)_3在水溶液中(室温)主要以B-构象存在。     

动物血管造影剂及造影方法

对动物血管进行实验性的研究中,目前除采用常规的血管色剂注射和血管铸型等方法外,不少研究者还利用X线进行血管造影。血管造影能显示出器官内部较细小血管的分支和分布状况,它可补充血管色剂注射等方法的不足。因此,这一方法已成为研究血管的一种不可缺少的重要手段。 临床上所用的血管造影剂和造影方法,已有详尽介绍。临床上造影是在病人身上进行,所以造影剂必须对人体无毒害,这种造影剂价格昂贵。实验动物血管的造影大多是将动物杀     

用DNA多聚酶A温度敏感突变株E.coli C600-ML分离转座子-2(Tn-2)插入突变体

用DNA转化将Co1E1型质粒RSF1030(Tn-2载体)引入大肠杆菌C600-ML细胞,然后用限制性温度和在氨基苄青霉素LB培养基上选择的方法,分离到了大量的Tn-插入突变体。经测定,其中有46株营养缺陷型。用琼脂糖电泳检查这些突变体的DNA提取物,发现它们都失去了质粒RSF1030。这些Tn-2插入引起的营养缺陷型在回复到原养型的同时,也失去了氨基苄青霉素抗性。已经插入到细菌染色体的Tn-2还能进一步转座到其他基因组。这些都表明,用这种方法获得的营养缺陷型是Tn-2插入突变体。     

海藻糖对乳酸菌的抗逆保护研究

研究了在冷冻干燥、高温及冻融等胁迫条件下,海藻糖对嗜热链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒ－ ｍｏｐｈｉｌｌｕｓ）和植物乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）菌体细胞的保护作用。结果表明在冷冻干燥过程 中,海藻糖保护的细胞存活率分别达７５％和３３％,而对照分别为１９％和ｌ％;用９０℃高温处理干燥 状态和溶液状态的嗜热链球菌,证明海藻糖能明显提高细胞的耐热性;用冻融法反复处理嗜热链球 菌４次和８次,加海藻糖保护的细胞存活率显著高于对照。在扫描电镜下观察这