人白细胞介素2受体β(IL-2RB)基因真核表达及与JAK1的相互作用的检测北大核心

[目的]构建含人白介素2受体β(IL-2RB)基因的真核表达质粒p ENTER-IL-2RB-His,并在293T中进行真核表达,并用免疫共沉淀检测JAK1与IL-2RB在细胞内的相互作用。[方法]在Hela细胞中提取人总RNA,通过RT-PCR获得人IL-2RB的基因全长,并将其克隆至真核表达载体p ENTER-His中。经PCR克隆,双酶切、测序鉴定后,将重组质粒p ENTER-IL-2RB-His转染至293T细胞中。免疫印迹法检测不同时间点的IL2RΒ蛋白(24 h、36 h、48 h)在293T细胞中的表达,用免疫共沉淀检测JAK1和IL-2RB蛋白之间的相互作用。[结果]经PCR克隆、双酶切、测序鉴定质粒克隆正确。免疫印迹可见61 k Da的目的蛋白。共同转染JAK1和IL-2RB的质粒,免疫印迹可见分别为133 k Da和61 k Da的目的条带。[结论]成功获得IL-2RB基因全长,成功构建p ENTER-IL-2RB-His真核表达质粒,并在293T细胞中成功表达,随着时间的推移其表达量增高。免疫共沉淀可以检测到JAK1和IL-2RB两者的蛋白相互作用,这为下一步研究JAK1和IL-2RB这一对蛋白的相互作用的作用方式及作用机制奠定了基础。     

B超引导下细针穿刺活检判断甲状腺结节性质的应用价值

目的:探讨B超及B超引导下的细针穿刺活检判断甲状腺结节性质的临床应用价值。方法:选取2018年1月～2019年10月我院收治的甲状腺结节患者200例,所有患者均接受B超检查和B超引导下细针穿刺检查,以手术病理结果为金标准,对比两种检查方式的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确率。结果:(1)200例患者共239个结节,手术病理结果证实良性结节64个,恶性结节175个;(2)B超引导下细针穿刺检查的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率明显高于B超检查(P0.05);(3)B超引导下细针穿刺对不同大小结节的诊断的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确率均优于B超检查(P0.05)。结论:B超引导细针穿刺活检判断甲状腺结节性质的应用价值明显优于B超检查。     

HSV转基因表达IL-1ra抑制P77PMC大鼠的惊厥发作

利用PCR基因克隆及基因转染技术 ,构建含人IL 1ra(IL 1receptorantago nist,IL 1ra)cDNA的质粒型单纯疱疹病毒 (herpessimplexvirus ,HSV)载体 ,再由HSV 1tsK株包装成假病毒颗粒 ,然后注入P77PMC听源性惊厥易感大鼠侧脑室 ,观察LacZ基因和IL 1ra在脑内的表达情况及对P77PMC大鼠惊厥程度的影响 .结果表明 :( 1 )LacZ在脑内神经和非神经细胞可持续表达 8周以上 ;( 2 )侧脑室注射pHSV IL 1ra假病毒可明显抑制P77PMC大鼠的惊厥发作 .原位杂交和免疫荧光染色发现脑膜和脉络丛上皮细胞及某些神经细胞有IL 1ramRNA和蛋白的表达 .结果表明HSV载体可有效地将IL 1ra基因转入脑内 ,并能明显抑制P77PMC听源性惊厥易感大鼠的惊厥发作 .     

肺癌CT征象与核因子-kappa B表达

目的:观察肺癌的核因子-kappa B(NF-κB)表达水平与CT影像的特点,探讨二者之间的相关性.方法:收集未经任何治疗的80例周围型肺癌及19例炎症占位组织学标本,采用免疫组织化学streptavidin peroxide(S-P)法检测NF-κB的核内表达水平.同时收集所有病变的CT图像资料,观察肿瘤的影像学特点并进行记录.首先分析NF-κB表达在良恶性占位中有无差异,再分析在不同病理类型的肺癌中有无差异.然后以肿块大小(直径≤5cm组和＞5cm组)、有无毛刺、分叶、坏死、转移这五个特点各分为两组,并就各组对应的NF-κB表达进行分析.结果:NF-κB在肺癌中表达明显高于在炎症病变中的表达,而在不同病理类型的肺癌中的表达无差异.CT表现有毛刺、已有转移者标本中NF-κB表达较没有毛刺及未发生转移组高;瘤体有坏死者表达较没有坏死者低.肿瘤大小组间及有无分叶之间其NF-κB表达未见明显差异.结论:NF-κB在肺癌中表达明显高于在炎症病变中的表达,对应的CT征像有其特点,可能与肺癌的浸润及转移相关.     

人p53蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表

将人p53基因装入Pichia分泌型质粒Phil-S1中,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合,经筛选得到一高表达p53蛋白的克隆。SDS-PAGE显示表达量约占分泌总量的30%。ELISA验证重组人p53存在免疫学活性。在诱导时就降低Pichia酵母系统水解酶活力等方面进行优化,经FPLC分离纯化得到约200mg/L表达量。     

反义c－fos和c－jun抑制IL－1诱导阿片肽分泌

白细胞介素-1(IL-1)及阿片肽作为神经调质参与了神经细胞兴奋性毒性作用.以大鼠大脑皮层神经细胞为研究对象,探讨了IL-1、阿片肽和c-fos、c-jun表达产物之间的关系.结果表明,IL-1β能诱导大脑皮层神经细胞c-fos、c-jun mRNA瞬时短暂表达,15min增高,30min达高峰,c-fos mKNA 2h回至基线水平,c-jun mRNA 8h回至基线水平;联合应用c-fos、c-jun反义寡核苷酸能部分抑制IL-1诱导的大脑皮层神经细胞脑啡肽及β-内啡肽分泌增加,呈一定量效关系,相应意义寡核苷酸无抑制作用.提示IL-1促进大脑皮层神经细胞脑啡肽及β-内啡肽分泌作用部分受Fos和Jun蛋白调控.     

腹腔镜与开腹手术治疗不同类型阑尾炎患者的临床效果对比

目的:对比分析腹腔镜与开腹手术治疗不同类型阑尾炎患者的临床效果。方法:从我院2013年3月~2015年9月收治的各种类型的阑尾炎患者中随机抽取106例进行研究,随机分为对照组(53例,行开腹手术)和观察组(53例,行腹腔镜手术),对比两组手术基本指标、疗效及术后并发症的发生情况。结果:(1)观察组的总有效率为94.34%,明显高于对照组的60.38%,差异具有统计学意义(P0.01)。(2)观察组手术时间、住院时间及术中出血量均明显少于对照组,住院费用显著高于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。(3)对照组总并发症发生率为16.98%,明显高于观察组的3.77%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:与开腹手术相比,腹腔镜手术治疗不同类型阑尾炎患者的临床效果更加显著,具有手术创伤小、术后恢复快、安全性高的特点,但住院费用较高,需要根据患者的实际情况和意愿选择合适的手术方式。     

春季环境因子对密点麻蜥活动规律的影响

密点麻蜥是变温动物,其活动规律深受环境因子的影响。本文探讨了春季环境因子对密点麻蜥活动规律的影响：４月份,当气温为１８８～２１４℃,栖息地地温为３１５～３６４℃,近地温为２６９～２９８℃,光照度为３３３×１０３～５８２×１０３勒克司时,最适合它们的活动。５月份,最适合它们活动的环境条件是：气温２２～２８８℃、栖息地地温３３９～３６８℃,近地温为３０６～３３℃,光照度为２０９×１０３～５６７×１０３勒克司。由于各项因子差异显著,其活动频率在４月份单峰型,在５月份为双峰型。     

豚鼠气道及肺组织原癌基因表达与哮喘的相关研究

目的：为研究原癌基因在哮喘发病中的作用。方法：以卵白蛋白致敏豚鼠建立哮喘模型,用Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ－ｂｌｏｔ分子杂交及免疫组化技术,分别观察正常及哮喘发作后豚鼠气道上皮及肺组织中原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ的表达水平。结果：正常豚鼠气道及肺组织中ｃ－ｆｏｓ及ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ无或很少表达,哮喘发作后豚鼠气道上皮及肺组织中ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达明显增强,３０ｍｉｎ达高峰,发作后４ｈ降至正常水平。地塞米松对ｃ－ｆｏｓ及ｃ－ｍｙｃｍＲ－ＮＡ有部分抑制作用。结论：原癌基因ｃ－ｆｏｓ及ｃ－ｍｙｃ在哮喘发病过程中可能起一定作用。