含人β-内啡呔融合基因的腺病毒/腺相关杂合病毒载体的构建与鉴定

目的:构建含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒。方法:构建腺病毒穿梭质粒pDC312-DTREE,与骨架质粒共转染HEK293细胞,细胞内同源重组包装出腺病毒腺相关杂合病毒。PCR法鉴定病毒及TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,ELISA法测定表达产物浓度。结果:穿梭质粒pDC312-DTREE经限制性核酸内切酶AatII及NotI酶切结果正确。PCR鉴定结果表明病毒DNA内有人β-内啡呔DNA序列,且无野生型病毒的污染,病毒滴度为1.29×1010PFUml。病毒感染细胞后第3d,细胞培养液内有高浓度的β-内啡呔。结论:成功构建了含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒,为进行下游相关研究奠定了基础。     

板层人工角膜辐照法病毒灭活验证方法的建立及灭活效果验证

目的建立板层人工角膜钴-60照射病毒灭活验证方法,用该方法对脂包膜病毒灭活效果进行验证。方法以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)为指示病毒,将干燥的板层人工角膜浸泡在高滴度病毒液中,在2~8℃浸泡5 h,经剪碎、研磨等步骤后4℃放置12 h,确立角膜吸附和释放病毒的条件。之后,将吸附病毒并呈干燥状态的角膜以0、5、10、15、20、25 k Gy辐照剂量进行钴-60辐照,以确立的条件释放病毒并进行滴定,考察灭活效果。结果板层角膜在2~8℃浸泡5 h可吸附足量病毒;病毒滴度可达到4 lg值以上,满足病毒灭活验证的要求。样品经25 k Gy剂量钴-60照射后灭活PRV为2.75~3.25 lg TCID50/100μL,灭活后的样品在敏感细胞上盲传3代均未出现细胞病变。结论成功建立了板层人工角膜病毒灭活验证的方法,并验证采用钴-60辐照法对PRV有较好的灭活效果。     

基于转录组序列的长柄双花木SSR标记开发

双花木属(Disanthus Maxim.)是金缕梅科(Hamamelidaceae)最原始的单种属,为东亚地区特有属。长柄双花木(D.cercidifolius var.longipes H.T.Chang)是日本特有植物双花木(D.cercidifolius Maxim.)的变种,仅分布于我国南方地区,为国家Ⅱ级保护植物,被列入我国濒危植物种名录,在研究金缕梅科系统发育和东亚植物区系地理演化等方面具有重要的科学价值。由于可利用的SSR标记引物数量不足,阻碍了长柄双花木遗传学研究。本研究对长柄双花木转录组序列进行高通量测序,采用de novo组装方法,共获得32325条unigene。利用MISA软件,搜索到13779个SSR位点,SSR位点发生频率为42.63%,位点分布频率为1/2.95 kb。不同重复基序类型中,二核苷酸重复基序数量最多,占总数44.10%;单核苷酸重复基序次之,占总数37.90%;三核苷酸重复基序,占总数16.71%。二核苷酸重复基序中,AG/CT重复基序数量最多;三核苷酸重复基序中,AAG/CTT重复基序数目最多,其次是ATC/ATG、ACC/GGT和AGC/CTG。从不同种群中任取1株构成8株无亲缘关系的随机样本,对随机合成的60对SSR引物的有效性进行琼脂糖电泳检测的结果表明,46对引物扩增出目的条带,扩增率达76.67%。进一步利用TP-M13-SSR技术基因分型结果显示,30对引物扩增产物显示出多态性,多态位点百分比为65.22%。这表明,基于转录组序列开发的长柄双花木SSR位点多态性较高。本研究结果有助于后续的长柄双花木种群遗传学及系统进化等方面研究。     

血浆氨酶促终点法测定的实验研究

介绍一种用谷氨酸脱氢酶-还原辅酶Ⅰ(GLDH-NADH)为反应系统的血浆氨酶促终点比色测定法.反应体系中加入1.9 kU/L的乳酸脱氢酶(LDH),可排除内源性丙酮酸盐引起NADH消耗所致的吸光度持续下降对测定的干扰.此法测定线性范围为6～200 μmol/L,回收率为90%～105%,批内变异系数小于5%,常规条件下的变异系数小于10%.30例健康志愿者清晨空腹静脉血浆氨水平为10～70 μmol/L.此法操作简单、迅速、精确,适合于常规分析.     

微孔比色法在猪胰腺PLA_2制备中的应用

微孔比色法采用合成的磷脂类似物２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱作底物,在多孔聚苯乙烯板的小孔中反应,并用酶联免疫检测器连续测定和记录吸收值．同时应用此法及滴定法检测酶活力,从猪胰腺中制备了一种分子量低（１４．３ｋＤ）,对热、酸稳定,活性依赖Ｃａ２＋的ＰＬＡ２．两种方法检测结果具有可比性,而微孔比色法同时可测多个样品,有节约样品,灵敏度较高等优点．微孔比色法特别适用于大量的样品测定,如拮抗剂筛选、临床样品及制备酶时层析级分的检测等．     

地瓜儿苗──泽兰

泽兰（Lycopuslucidus）又名地瓜儿苗、地笋、地参、他留,是唇形科多年生草本植物。株高40－150厘米。地下根状茎横走,光瑞大呈圆柱形。叶对生,披针形,边缘具粗锯齿,无柄。花序轮伞形生于叶腋,花小,白色。花期7一9月。小坚果扁平,暗褐色。果期9一10月。泽兰分布于我国东北、西北及西南各地,俄罗斯、日本也有。陕西榆林地区南部和北部沙区都有野生泽兰分布,但很少见栽培。泽兰是一种药食两用植物。其茎、叶及地下根状茎均可入药,有活血、通经、利尿等功效,早在《神农本草经》中就有记载。在《救荒本草》中,又称泽兰为地瓜儿苗…     

TDZ在植物组织培养中的作用

ＴＤＺ是具有很强细胞分裂素活性的苯基脲衍生物,它对植物芽的增殖和再生、体细胞胚胎发生等有重要的作用。本文对发现ＴＤＺ具有这些作用以来的近２０年的研究作一评述。     

蓖麻蚕蛹蛹虫草人工培养研究

用蛹虫草菌种通过人工接种蓖麻蚕蛹,控制培养环境条件,经过40－60天培养,可长出子实体,最高达8．5厘米,经两年来探索研究,栽培种内已可达到100％出草率。     

IL-3基因转染的瘤苗与IL-2、低剂量环磷酰胺的联合抗肿瘤作用

用IL-3基因转染的瘤苗治疗实验性肺转移荷瘤小鼠,结果发现能使其肺转移性肿瘤结节比常规瘤苗治疗明显减少、存活期明显延长,而且当与IL-2或低剂量Cy合用后,可使荷瘤小鼠的肺转移结节更少,存活期更长,特别是当IL-3基因转移的瘤苗、IL-2、低剂量Cy三者合用时抗肿瘤转移作用最强,免疫学研究表明,经IL-3基因转染瘤苗治疗后,荷瘤小鼠脾脏CIL活性、NK活性、IL-2诱导的LAK活性均显著增强,脾细胞体外分泌IFN-γ和TNF水平显著升高;当与IL-2或低剂量Cy合用时,上述抗肿瘤免疫功能升高得更加明显,并且以三者联合应用后免疫功能增强最为明显,可见IL-3基因转染的瘤苗能有效地激活体内抗肿瘤免疫功能,具有显著的抗肿瘤作用.     

贵州长序狼尾草生物生态学特点及其利用的初步研究

长序狼尾草是我国牧草新资源。在野外调查和实验室分析的基础上,根据贵州的自然环境条件,对长序狼尾草的资源、生长特性、主要营养成份进行了调查研究和分析,结果表明：长序狼尾草是一种具有较大生物蕴藏量的、较优质的野生牧草,有进一步开发利用的价值。确定了长序狼尾草在贵州的５个主产区。