基于细胞三维培养的气道平滑肌细胞收缩效应检测方法的建立与应用

气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)是引起哮喘患者气道收缩狭窄、呼吸阻力增加的主要效应细胞。ASMCs收缩效应检测是研究哮喘病理生理机制、评估或研发新的支气管舒张药物的重要实验依据。而常用的活体组织张力检测以及单层培养ASMCs显微镜形态观察等方法存在样品取材或测量误差等问题。该研究利用胶原蛋白凝胶构建气道平滑肌细胞的三维立体培养模型,将凝胶与培养孔壁分离,在不同的时间点记录细胞收缩力作用下凝胶面积的变化值,以此反映ASMCs的收缩效应。结果显示,0.1,1,10 mmol/L的乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)刺激后,凝胶面积均显著缩小,随着剂量增加ASMCs的收缩反应增强。提前加入肌球蛋白ATP酶抑制剂BDM(butanedione monoxime),能明显抑制Ach诱导的ASMCs收缩反应,说明该方法的可重复性和准确性好。     

MED烟粉虱钙结合蛋白的鉴定及表达分析

【目的】钙结合蛋白作为钙信号传导途径的组分,通过与钙离子结合实现其生物学功能,调控细胞信号传导和细胞生命周期等过程,且钙结合蛋白可以通过与植物中钙离子结合降低钙离子浓度来保持昆虫的持续摄取。为明确钙结合蛋白在MED (Mediterranean)烟粉虱Bemisia tabaci体内的时空表达模式,烟粉虱取食后钙结合蛋白的表达特征及取食不同寄主的烟粉虱体内钙结合蛋白的表达量变化情况。【方法】利用RT-PCR和基因克隆得到烟粉虱钙结合蛋白cDNA序列,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析其在烟粉虱不同组织、不同龄期、不同寄主以及烟粉虱饥饿诱导取食后不同时间点的表达模式。【结果】生物信息学分析结果显示:烟粉虱钙结合蛋白基因的开放阅读框为669bp,编码一个由222个氨基酸组成的蛋白,其N端包含一段长为22个AA的信号肽序列,C末端具有钙离子结合位点。系统进化分析表明:烟粉虱钙结合蛋白与半翅目昆虫关系最近,分属同支。荧光定量PCR结果显示:钙结合蛋白在烟粉虱头部的表达量显著高于胸部、腹部、足和翅的表达量;钙结合蛋白在烟粉虱整个发育阶段均有表达,4龄若虫的表达量最高,卵期表达量最低,1-2龄、3龄、4龄和成虫期的表达量分别为卵期表达量的4.38倍、5.47倍、16.76倍和5.03倍;钙结合蛋白在取食棉花、辣椒和番茄3种不同寄主的烟粉虱中的表达量无显著性差异;饥饿诱导取食后1 h的烟粉虱成虫钙结合蛋白的表达量显著高于取食0 h,为取食0h的2.12倍。【结论】本研究克隆了烟粉虱钙结合蛋白基因并对其在烟粉虱中的表达模式进行分析,为进一步明确烟粉虱钙结合蛋白功能研究奠定基础。     

针对HBV前S2基因三靶位串状核酶的实验研究

我们设计合成了针对HBVaywDNA前S2区第110、122和132位碱基的三靶位串状核酶,观察了核酶对靶基因转录产物的体外切割作用,并将核酶重组到逆转录病毒载体上,转染包装细胞PA317,获取了较高滴度的重组病毒,为进一步研究核酶在细胞内及体内的作用奠定了基础。 核酶基因和靶基因的获取:核酶基因分两个片段进行人工合成,片段间部分互补,通过Klenow酶填补连接成105 bp的全片段,再经     

Mechanism of selective stabilization of extrinsic polypeptides in PSII particles by glycinebetaine

Ｔｈｒｅｅｅｘｔｒｉｎｓｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ,ｗｈｉｃｈａｒｅｌｏｃａｔｅｄｏｎｔｈｅｉｎｎｅｒｓｕｒｆａｃｅｏｆｔｈｙｌａｋｏｉｄｍｅｍｂｒａｎｅ,ｐｌａｙｅｓｓｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｏｘｙｇｅｎ.Ｔｈｅｙａｒｅｇｅｎｅｒａｌｌｙｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄａｓｌｉａｂｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆｔｈｅｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃａｐｐａｒａｔｕｓ,ａｎｄｃａｎｂｅｒｅｌｅａｓｅｄｂｙａｖａｒｉｅｔｙｏｆｐｈｙｓｉｃ…     

大豆异黄酮糖苷酶的纯化及性质研究

利用Absidiasp.R菌株,通过液体发酵的方法,得到了一种高活性的大豆异黄酮糖基水解酶。该酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Cellocuse(DE-52)离子交换层析纯化,被纯化了11倍,收率为10.9%;经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的分子量为53kD;该酶的最适反应温度为50℃;最适pH为5.0;温度低于60℃,pH在5.0~7.0范围内该酶较稳定,Co2 、Ca2 对该酶有激活作用;Ag 、Cu2 对该酶有抑制作用。当以染料木甙为底物时该酶的米氏常数(Km)为1.3×10-2mol/L。等电聚焦电泳测得其等电点为3.2。     

植物中丛枝菌根形成的信号途径研究进展

丛枝菌根(arbuscular mycorrhizal, AM)共生是丛枝菌根真菌与大多数陆地植物的根系之间形成的一种互利共生关系。植物给菌根真菌提供碳水化合物; 作为回报, 菌根真菌能够增强植物对矿质营养元素(尤其是磷)的吸收。菌根的形成过程是一系列信号交换和转导的结果, 具有严格并且一致的顺序。本文以植物中菌根形成的信号途径为主线, 对菌根真菌的形成过程和信号转导途径及其方式进行了分析和讨论。高等植物中菌根形成的信号途径与豆科植物的结瘤信号途径部分共享, 并且与钙离子信号途径相关, 但前者更为广泛。尽管该途径中很多过程目前还不十分清楚, 但是相信在不久的将来就可以揭开菌根形成过程中的众多谜团。     

三种杀虫剂对中华按蚊的毒效观察

中华按蚊是我国按蚊的优势蚊种,是我省疟疾和马来丝虫病的主要传播媒介。为了观察近几年来DDT、马拉硫磷和杀螟硫磷对中华按蚊的毒效作用,我室于1996年在独山、荔波两县进行了3种杀虫剂对中华按蚊的毒效测定,为今后我省合理使用杀虫剂提供科学依据。1材料和方法1．1杀虫剂为     

表皮穿透和GABAA受体不敏感性在小菜蛾对阿维菌素抗性中的作用

用氚标记阿维菌素点滴处理阿维菌素敏感（ABM-S）和抗性（ABM-R）种群小菜蛾幼虫,结果显示,在5～360 min内的7个不同处理时间,ABM-R种群的平均表皮穿透量比ABM-S种群少1.5倍,处理24 h后,ABM-R种群仍有45.9%的3H-阿维菌素滞留于体表,而ABM-S种群却有98.4%的药剂穿透表皮。放射配体结合分析表明,GABAA受体结合性质的改变是小菜蛾对阿维菌素的另一抗性机制,ABM-S种群（K_d=10.9368±0.4374 nmol/L）和ABM-R种群（K_d=9.8328±0.3933　nmol/L）的受体亲和力无显著差异,但抗性种群的最大结合量（B_max=71.2842±4.9910　fmol/mg 蛋白）比敏感种群（B_max=112.0255±7.8418　fmol/mg 蛋白）降低63.6%,即抗性是受体数目的减少而非结构上的改变。     

菠萝杂种胚愈伤组织分化成苗

“邱”ד皇后”菠萝杂种胚愈伤组织已分化成苗。将带杂种胚的种子培养在含有苄基腺嘌呤或吲哚丁酸的培养基上,诱发胚芽愈伤组织。愈伤组织从根部形成,最终包裹了整个胚。将原始愈伤组织进行多次中间培养,就可促使它继续生长。中间培养的愈伤组织中,发现有芽分化。将从芽丛上分离的单株移至基本培养基上培养。从一个杂种胚平均可获得20～25株发育完全的植株。     

表面肌电信号的下肢痉挛信号的特征分析与识别

脑卒中患者康复治疗中会引起下肢肌肉痉挛,这种现象给患者的康复训练过程带来极大的危害,因此能够在训练过程中识别痉挛并及时中断训练具有重要的实际意义。本研究通对下肢表面肌电信号的采集,采用基于形状的模版匹配法来识别痉挛信号,并以皮尔逊相关系数来分析表征下肢痉挛信号的相关性大小。分析结果表明,通过仿真验证了模版匹配法在个人痉挛信号识别中的准确性,显示了在泛用痉挛信号识别中的可行性。