甲醇-山梨醇混合碳源诱导提高抗HER2抗体在糖基工程毕赤酵母中的表达

目的：以抗HER2抗体为模型,研究抗体在糖基工程酵母菌中的表达及工程菌发酵技术。方法：首先通过摇瓶试验分析诱导用甲醇浓度对抗体表达的影响,并用高表达HER2的SK-BR-3细胞分析抗HER2抗体的抗原结合活性。以此为基础,在5 L发酵罐中研究甲醇-山梨醇混合碳源流加诱导对抗HER2抗体表达水平的影响;收集发酵培养液,采用阳离子交换层析对目标产物进行纯化;利用SDS-PAGE、Western印迹、Lowry法对抗体的相对分子质量、浓度等进行分析。结果：摇瓶试验结果表明,甲醇浓度为0.5%时抗体表达量最高,且糖基工程毕赤酵母菌表达的抗HER2抗体具有与SK-BR-3细胞抗原结合的活性;在5 L发酵罐中,利用甲醇和山梨醇混合诱导方式发酵表达抗体,其表达量可提高至0.6 g/L,比摇瓶诱导表达的抗体产量提高了近10倍;非还原SDS-PAGE及Western印迹表明抗体相对分子质量为1.5×105,与商业化抗体Herceptin的大小一致;经过一步阳离子交换层析纯化,纯化后抗体浓度为0.365 g/L。结论：采用甲醇-山梨醇混合碳源诱导方式在5 L发酵罐中进行发酵表达,能够提高抗HER2抗体在糖基工程酵母菌中的表达量,本研究可为抗体在酵母中的规模发酵技术提供重要参考。     

北京和湖南烟粉虱生物型及其抗药性监测

烟粉虱是蔬菜等园艺作物上为害严重、最难以防治的害虫之一,生产上防治该虫主要还是依靠化学药剂。本研究鉴定了北京、湖南地区设施蔬菜上烟粉虱的生物型,并监测了其对6种不同杀虫剂的抗药性。结果表明,北京、湖南地区蔬菜烟粉虱生物型分别是Q型和B型。两地烟粉虱对阿维菌素尚处于敏感状态;对烯啶虫胺及其他烟碱类杀虫剂噻虫嗪和吡虫啉的抗药性达中抗到高抗水平,湖南地区抗性水平比北京地区更高,抗性倍数最高达到71.58倍;传统杀虫剂毒死蜱和联苯菊酯对湖南、北京两地烟粉虱的毒杀活性差。     

蛋白质质谱分析的无标记定量算法研究进展

作为发现疾病相关生物标志物的重要途径,定量研究已成为蛋白质组学的热点问题.随着实验方法的发展和改进,定量数据处理算法也在不断更新和完善.将现有的无标记定量方法归纳为需要/不需要鉴定结果两类方法,分析比较了两类方法的异同及优缺点,详细讨论了所涉及的主要算法,总结了一些常用的无标记定量软件及对应的网络资源.展望了无标记定量数据分析的未来研究方向.     

专科医院开展常态化医疗核心制度督查的实践与体会

通过对专科医院开展常态化医疗核心制度督查工作过程及运行效果进行分析,总结了核心制度督查工作中取得的经验和存在的问题,认为开展常态化医疗核心制度督查是促进医疗质量稳定提高的有效方式。     

环青海湖地区土壤、牧草及牦牛血液中矿物质元素动态变化研究

2005年3月(冬春季草场)和2005年7月(夏季草场),分别对环青海湖地区放牧牦牛的全血、牧草和土壤中的Zn、Ca、Cu、Fe、K、Na、S、P、Cl、F、I、Se 12种矿物元素和Ca、Cu、K、Fe、Na、P、Se 7种矿物元素的营养状况进行了测定.结果 显示,除夏季牦牛全血Se和S有显著增加外,其它矿物质含量均显著降低,提示夏季草场由于牦牛生长发育迅速其矿物质元素的缺乏更为严重,在生产中更应进行有关矿物质元素的补饲,进一步提高其生产性能.     

金黄色葡萄球菌致小鼠慢性输卵管炎性不孕模型制作

目的通过金黄色葡萄球菌直接感染小鼠输卵管,建立炎症致不孕的动物模型。方法用1×109/mL的金黄色葡萄球菌接种小鼠,制作慢性输卵管炎症模型,观察输卵管病理炎性改变以及小鼠的受孕情况。结果造模术75 d后,模型组小鼠受孕率、输卵管通畅率显著低于对照组（P〈0.001）。模型组肉眼观察输卵管有不同程度积水积脓、僵硬,输卵管与周围组织均有不同程度的粘连;病理学观察输卵管管腔被异物肉芽组织完全阻塞,全层均见大量慢性炎细胞浸润。结论输卵管内接种浓度1×109/mL的金黄色葡萄球菌可以成功建立小鼠输卵管炎性不孕模型。     

孕育对褶纹冠蚌滤食率的影响及鳃微结构变化

对比了褶纹冠蚌(Cristaria plicata)孕育蚌、未孕雌蚌和雄蚌的滤食率,并运用组织学、扫描电镜和透射电镜对实验蚌的鳃结构进行比较观察,以此探讨鳃结构变化对滤食功能的影响。滤食实验结果表明:孕育事件显著降低了雌蚌的滤食率,而未孕雌蚌与雄蚌的滤食率无显著差异。孕育雌蚌内外鳃均由两鳃小瓣愈合而成,每一鳃小瓣由成排的鳃丝组成,在中介区鳃丝之间通过丝间隔连接,在内部侧区则通过瓣间隔相连。雌蚌内鳃的鳃间隔为外鳃的2～3倍,而雄蚌的内外鳃无差异。孕育雌蚌外鳃在初级水管、瓣间隔等出现明显的变化,并出现了二级水管结构,而内鳃未发现显著变化。扫描电镜显示:在褶纹冠蚌鳃丝表面存在3种类型的纤毛(前纤毛、前侧纤毛和侧纤毛),其形态结构和分布各具特点,长径58～85μm椭圆形的鳃小孔成排相间分布于鳃丝之间,而3组实验蚌的内外鳃丝之间无明显差异。透射电镜观察发现:孕育雌蚌鳃丝表皮细胞表面形成突起,显著增加了表面微绒毛的数量,可能有利于雌蚌在孕育期间由于初级水管转化成育儿囊后对呼吸、滤食等功能的补偿,与其他蚌科物种报道类似。综合实验表明,孕育雌蚌外鳃结构的变化,尤其是初级水管的结构改变和二级水管、鳃丝表面褶皱的出现可能是影响孕育雌蚌滤食功能的主要原因。     

黄瓜 CsCCD7 基因的克隆及表达研究

使用RACE技术克隆黄瓜(Cucumis sativus L.)腋芽生长抑制基因并进行生物信息学和半定量RT-PCR分析。结果表明:从黄瓜腋芽中成功克隆了拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtCCD7/MAX3同源基因,命名为CsCCD7(GenBank登录号:HQ005419);CsCCD7基因序列含有1665 bp的开放阅读框(ORF),编码554个氨基酸;编码的蛋白质命名为CsCCD7,隶属于CCD蛋白家族成员,蛋白质的二级结构和三级结构预测显示其富含β折叠和β转角以及无规卷曲,是不稳定蛋白。CsCCD7在根中的表达量最高,在多分枝、矮化黄瓜D0462中的表达量最低,这说明CsCCD7蛋白可能参与调控植物分枝信号的转导及分枝相关基因的表达调控。     

黄荆种子总生物碱对棉蚜无翅成蚜的毒力及其对几种酶活力的影响

采用酸水溶液提取法获得黄荆(Vitex negundo L.)种子总生物碱粗品,通过生物测定和生化分析方法研究了黄荆种子总生物碱对棉蚜(Aphis gossypii Glover)无翅成蚜的生物活性.结果显示:黄荆种子总生物碱对棉蚜无翅成蚜的触杀毒力较高,对单头棉蚜无翅成蚜的LD50为0.073 μg;用质量浓度0.500、1.000、2.000、4.000和8.000g·L-1总生物碱处理棉蚜无翅成蚜后24、48和72 h的忌避中浓度(AFC50)分别为1.256、1.720和3.923 g·L-1,具有一定的忌避和持续控制作用;用总生物碱LD30剂量(每头0.045 μg)处理棉蚜无翅成蚜,其存活时间较对照缩短7d,单头雌成蚜的繁殖力较对照降低了30.43％;单头棉蚜无翅成蚜每天的平均排蜜频率和排蜜量分别较对照减少了4.26滴和27.10 μg,差异达显著水平.在离体条件下,黄荆种子总生物碱对棉蚜无翅成蚜的羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶的活力有显著的抑制作用,IC50分别为0.778、1.901和4.216 g·L-1;但对多酚氧化酶的活力则有明显的激活作用,激活程度呈明显的量效关系.用总生物碱LD50剂量(每头0.073 μg)处理棉蚜无翅成蚜后3、6、12和24h,成蚜体内羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶的活力显著低于对照,而体内的多酚氧化酶活力则显著高于对照.研究结果表明:黄荆种子总生物碱对棉蚜无翅成蚜的杀虫作用机制与其对几种酶活力的影响效应相关.     

asr基因酵母双杂交系统的构建及筛选鉴定

为研究asr作用的分子机制,分析该基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白,分别构建诱饵质粒载体和转基因拟南芥cDNA文库,通过转入酵母细胞中,初步的鉴定分析证实成功构建了诱饵质拉载体和拟南芥cDNA文库.构建的酵母双杂交系统为发现asr基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白奠定了基础.