A型肉毒毒素保护性抗原的基因修饰及高效表达

在A型肉毒毒素保护性抗原基因初步表达的基础上,为提高表达水平,依据EMBL的DNA数据库中A型肉毒毒素基因全序列,重新设计上游引物,通过修饰基因片段N端,保持氨基酸序列不变,从已获得的A型肉毒毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因中,扩增小的突变基因,克隆入pGEM-T载体进行测序,并以pBV220为表达载体构建重组表达质粒,在大肠杆菌中实现高效表达。结果表明,重组表达产物占全菌蛋白的40%,酶联检测重组表达产物具有特异结合活性。A型肉毒毒素保护性抗原基因的高效表达,为下一步基因工程抗毒素和疫苗的研制奠定了基础。     

禽细胞因子的新功能——免疫治疗和疫苗佐剂

许多国家已明令禁止在饲料中使用抗生素类饲料添加剂和化学抗菌药物 ,从而使得肉品生产者急于寻求新的替代产品。细胞因子是一种在感染或免疫接种后产生的蛋白质 ,能够影响免疫应答的类型和水平 ,因此是一种绝佳的天然替代产品。随着更多的禽细胞因子基因的发现 ,临床应用细胞因子成为可能。由于禽类的免疫系统与哺乳动物的相似 ,因此相关工作也为研究细胞因子在控制家畜疾病上提供了颇具前景的动物模型。这里综述了禽细胞因子的最新研究进展 ,并侧重阐明了细胞因子作为治疗制剂和疫苗佐剂的功能与前景。     

大肠杆菌BL21(pTrc-gsh)与酵母耦联合成谷胱甘肽的研究

谷胱甘肽 (ＧＳＨ)广泛存在于动、植物和微生物细胞内 ,有参与氨基酸的跨膜运输、维持细胞的还原状态等重要生理功能 ,在临床、保健品、食品等行业有广泛用途 ,如 :重金属解毒、抗氧化延缓衰老等 ,我国基本靠进口。开发高效、低成本的ＧＳＨ生产工艺势在必行。谷胱甘肽的制备有化学合成法[1 ] 、提取法[2 ] 、微生物发酵法[3] 、酶法[4] 等。由于酶法合成ＧＳＨ的产率高、后续的分离提取较简单而倍受关注。它是以ＡＴＰ为能量供体、由γ 谷氨酰半胱氨酸合成酶 (ＧＳＨＩ)和谷胱甘肽合成酶 (ＧＳＨＩＩ)连续催化合成的 :谷氨酸 半胱氨酸 Ａ…     

人肿瘤坏死因子衍生物b cDNA的构建与表达

构建了人肿瘤坏死因子缺失1～7位和102～107位共13个氨基酸编码序列的cDNA,即人肿瘤坏死因子衍生物b(rhTNFαDb),转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导后,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白量的30%～60％。其中可溶性rhTNFα Db蛋白约占超声上清总蛋白的40%。经柱层析纯化后,目的蛋白纯度达95%以上。以L929细胞株检测rhTNFα Db的细胞毒活性,测得rhTNFα Db的比活性为2×10⁸IU/mg。较rhTNFα 原型提高一个数量级。rhTNFα Db的体内外抑瘤试验也取得了初步结果     

PTHrP受体胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

PTHrP(甲状旁腺激素相关蛋白,Parathyroid hormone related protein)与多种肿瘤的生物学行为有关,尤其对肿瘤的骨转移起重要作用。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常值得研究的课题。从肾癌组织中提取RNA,采用逆转录PCR (RT-PCR)方法获得PTHrP受体N端胞外区543碱基对的带信号肽的cDNA片段。将其核苷酸序列与国外发表的资料相比,基因中第262位核苷酸由T变为C,相应密码子由TAC变为CAC,导致氨基酸变异,即由酪氨酸变为组氨酸。将获得的受体基因克隆到原核表达载体pET-3a,在大肠杆菌得到高效表达,经ELISA证实表达产物可与PTHrP特异性结合。体外生物学活性检测表明表达产物可阻断PTHrP的生物学活性。     

假丝酵母C-5的不对称生物还原作用研究

生命与手性密切相关,凡涉及到生命现象和生理活性物质几乎都离不开有关分子的空间立体构型问题,不同构型的手性分子具有不同的生理活性。利用酶反应的立体专一性,用生物转化法取代部分传统的化学方法,可以很方便地制备具有所需手性中心的化合物。因此,近年来生物转化...     

桑蓟马在桑树中空间分布的研究

桑蓟马Pseudodendrothrips mori是桑树的一种主要害虫。它的寄生直接影响供桑叶的质量和产量。我们通过泰勒幂法则和Morisita的散度指标对桑树蓟马在植株和桑园内的空间分布进行检验，结果显示：P. mori种群在植株内和桑园里的分布都存在局部化。桑树中蓟马的分布在树内显示出幼虫蓟马位于低层(从上面叶子起5—10层), 但成虫更喜欢上层(从上面叶子起1—5层)。同一植株叶子的不同方向上蓟马密度没有出现明显变化。桑园内蓟马主要分布在桑园东部、南部和北部的植株上,中部,西部植株上的蓟马密度较低。P. mori的成虫和幼虫在叶子上的分布呈现明显聚集化。     

新疆准噶尔盆地东缘猎隼的繁殖生态

猎隼（Falco cherrug）主要繁殖于我国西部省区，为国家Ⅱ级重点保护动物。2005年在新疆准噶尔盆地东缘采用野外调查方法研究了其繁殖生态。猎隼繁殖期为4—7月；窝卵数平均为(4.0±0.63) (3—5)枚；卵长径为（55.40±3.06）mm，卵短径为（41.11±1.70）mm；猎隼的孵化率、雏鸟成活率和繁殖力分别为70.8%、64.7%和1.8；巢成功率为83.3%雏鸟体重、跗蹠长的生长符合逻辑斯谛曲线增长。食物的可利用性是限制新疆猎隼窝卵数和生殖力的主导因素。要有效保护猎隼首先应保护栖息环境和猎物的多样性及丰富度。     

昆明滇蛙的取食策略

目前国内研究两栖类食性选择或偏好多未考虑蛙胃内不同食物的丰盈程度与栖境不同食物资源是否存在相关性。在分析了采自昆明白龙寺和昆明石林西街口的494只滇蛙(Rana pleuraden)的食性的同时，分析了采自对应栖境中的食物资源组成。结果表明，滇蛙的食物成份与食物资源相具有稳定性，主要类群均为直翅目、同翅目、半翅目、鞘翅目、双翅目、鳞翅目、膜翅目和蛛形纲等8类。但又存在变异性，不同产地、不同年份和不同月份之间的蛙标本胃内的食物成分各类群的比例均不相同。主要食物成份与食物资源相的差异显著性分析、相关性分析和选择性分析等方面的结果均支持或证明：滇蛙对食物具有选择性或取食偏好。栖境的食物资源相与蛙胃内的食物成分不存在相关性 (白龙寺：r=0.077, P=0.575; 西街口：r=-0.086, P=0.500)。直翅目(Ei<-0.35)和同翅目(Ei<-0.37)昆虫是滇蛙取食时回避的食物，而对鞘翅目、鳞翅目、膜翅目和蛛形纲等4个类群(Ei>0.45)具有明显偏好。