1株含H9N2内部基因的H5N1亚型基因重配禽流感病毒的全基因测序及遗传进化分析

在对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况的流行病学监测过程中,从表观健康家鸭体内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/009/2008(简称Dk/SD/009/08)。为了解该毒株的基因组构成,对该分离株进行全基因测序。测序结果显示:该毒株HA裂解位点处的氨基酸序列为PLRERRRK-R/GL,符合高致病性禽流感病毒的分子特征,且参照H5N1国际统一命名准则,Dk/SD/009/08的HA基因属于2.3.4进化支。BLAST结果显示,HA、NA、NP及NS基因均与H5N1亚型病毒的核苷酸一致性最高,而RNA聚合酶基因(PB2、PB1、PA)及M基因则与H9N2亚型病毒的亲缘关系最近,故推测该分离株可能是一株天然重组病毒;遗传进化分析进一步表明,流行于华南地区鹌鹑中的G1-like H9N2亚型病毒可能为该分离株提供部分的内部基因。     

冬虫夏草培养子实体ITS,5.8S的分析及系统发育研究

对野生冬虫夏草的人工培养子实体的ITS1,ITS2和5.8S间区序列进行了克隆,并结合已有的序列对ITS1,ITS2和5.8S进行了系统发育分析。结果表明,人工培养子实体与中华被毛孢(Hirsutella sinensis L95DBM-1)具有96%的同源性,在NJ邻接树上形成明显的一支,与虫草属其它类群种间具有明显差异,表明分离培养的虫草子实体为中华被毛孢。遗传距离分析结果显示,培养虫草序列与已知虫草在种内也存在一定差异,可能暗示虫草种群在不同区域具有一定的遗传分化。     

雄性受体小鼠性腺对移植卵巢卵母细胞生长发育的影响

目的探索雄性受体性腺对移植卵巢卵母细胞生长发育的影响。方法将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,将雄性受体小鼠分为性腺摘除组和性腺在位组,于21d回收移植卵巢,以评价雄性小鼠性腺对新生小鼠卵巢移植体卵母细胞生长发育的影响。结果移植后21d,性腺摘除组和性腺在位组卵巢回收率分别为80.0%和92.9%,移植体生长增大;每个卵巢平均回收卵母细胞数分别为(30.4±4.3)和(42.4±11.1)个,两者差异不显著(P0.05);性腺摘除组回收的均为GV期卵母细胞,性腺在位组大部分为GV期卵母细胞,有的达到MII期。结论雄性受体小鼠能够支持移植卵巢卵母细胞的生长发育,雄性受体的性腺对其影响不明显。     

南岳衡山藤本植物资源特点及其应用

调查分析湖南省南岳衡山藤本植物资源的特性与现状。该区野生藤本植物资源丰富,共有59科129属282种,大多具有重要的观赏与经济价值,主要有药用、食用、饲用、纤维、观赏等几大类;探讨了藤本植物在立体绿化中的应用方式与类型,并对今后开发利用野生藤本植物资源提出建议。     

拟南芥纤维素合酶基因时空表达模式与功能预测

纤维素是细胞壁的主要组成成分, 研究纤维素合成可以从源头上解决关于高效降解纤维素的问题。该研究通过综合拟南芥(Arabidopsis thaliana)纤维素合酶基因(AtCESA)家族的进化和芯片表达分析及根据拟南芥全生育期GUS染色结果分析纤维素合酶基因的时空表达模式, 发现拟南芥纤维素合酶基因AtCESA1, 3, 6以及AtCESA4, 7, 8分别参与细胞壁初生壁和次生壁的合成并存在明显的共表达现象。其中, AtCESA1, 3, 6在全生育期表达, AtCESA4, 7, 8主要在根、茎和叶脉等次生壁细胞中表达。AtCESA5和AtCESA6、AtCESA2和AtCESA9以及AtCESA1和AtCESA10等基因对均有基因重复作用。根据AtCESA家族基因表达模式和分子演化关系可以推测, AtCESA5对AtCESA6以及AtCESA9对AtCESA2可能分别存在功能冗余。此外, AtCESA9的表达具明显的组织特异性。上述研究结果为深入认识拟南芥纤维素合酶基因的功能奠定了基础。     

高通量筛选瞬时受体势V3通道调节剂细胞模型的建立

为发现TRPV3调节剂,通过荧光成像分析系统检测钙浓度,建立高通量筛选瞬时受体势V3通道(Transient receptor potential V3,TRPV3)调节剂的细胞模型.将TRPV3表达载体转染人胚肾(HEK-293)细胞,抗生素筛选稳定表达TRPV3的细胞系,选取TRPV3特异性调节剂作用于细胞模型,应用荧光成像分析系统测钙实验检测TRPV3高表达细胞系药理学特征,同时优化实验条件,考察模型的稳定性,并评估应用于96孔板及384孔板进行高通量筛选的可靠性及准确性.获得了高表达TRPV3的HEK-293稳定细胞系,通过TRPV3离子通道调节的钙流信号与TRPV3特异性调节剂成剂量依赖关系,优化得到了最适筛选条件,该模型稳定,灵敏,通过Z因子及Spiking检测,完全符合高通量筛选需求.利用此细胞模型通过检测钙信号可筛选TRPV3调节剂.     

H1N1亚型猪流感病毒的拯救

利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后, 分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中, 构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞, 30 h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5 mg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清, 经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代, 得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出H1N1亚型猪流感病毒, 为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。     

尘螨变应原Der f1全序列的原核表达及生物信息学分析

目的 构建尘螨变应原Der f1原核表达体系,并了解其分子特征.方法 提取粉尘螨总RNA,用RT-PCR合成Der f1编码基因,将其克隆至pMD19-T载体,亚克隆至表达载体pET-28a( ),转化至大肠杆菌并用IPTG诱导表达.用生物信息学软件对测序结果进行分析并预测其空间结构.结果 从粉尘螨总RNA中扩增获得Der f1 cDNA片段,成功构建了表达质粒pET-28a( )-Der f1,Western blotting显示原核表达获得成功.测序结果提交GenBank,登陆号为EU095368,该基因长966 bp,与参考序列同源性达99.9%,推测其编码氨基酸321个,属疏水蛋白,位于细胞外,信号肽位于1～18氨基酸处.同源性分析提示Der f1和Eur m1相似率为88%,而Der f1和Der p1的相似率为77%,分子进化树中粉尘螨和梅氏嗜霉螨聚成一簇.Der f1的二级结构由α-螺旋(109 aa,33.96%)、延伸链(55 aa,17.13%)、β-转角(18 aa,5.61%) 和随机卷曲(139 aa,43.30%)组成.结论 尘螨变应原Der f1原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础.生物信息学分析表明粉尘螨和梅氏嗜霉螨的亲缘关系可能更近,而与屋尘螨关系稍远,此与现行的形态学分类系统并不符合.     

硫化氢中毒的急救与护理

硫化氢是一种毒性较剧烈的窒息性毒物,具有细胞窒息作用及中枢神经抑制作用.患者吸人高浓度硫化氢时,可立即失去知觉,甚至呼吸停止死亡.2004～2006年我院共收治了10例硫化氢中毒患者,现将抢救过程中的护理体会总结如下.     

泡桐花油的GC-MS分析及抑菌作用研究

本文采用索氏提取法提取泡桐花脂溶性成分,并用GC-MS联用技术对其成分进行分离鉴定.共分离出45个组分,各组分提取质谱图,经用人工解析及NIST05标准谱库检索定性,峰面积归一化法定量分析,计算出各成分的相对百分含量.其中含量较高的化学成分有3,7,11,15-四甲基十六-1,6,10,14-四烯-3-醇(14.74%)、二十三(碳)烷(5.79%)、9,19-环羊毛甾-24-烯-3-醇(5.41%)、十六(烷)酸(5.09%)、十六烷基环氧乙烷(4.93%)等.对泡桐花索氏提取后的部分进一步水提,并分别测定其脂溶性成分和水溶性成分对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的体外抑菌作用.得知其脂溶性成分对金黄色葡萄球菌抑制作用较强,而水溶性成分则对大肠杆菌抑制作用较强.本次实验,可为泡桐花资源的进一步开发利用提供一定的理论依据.