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序列特异的三锌指多肽的构建及其在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:1,他引:1
在获得单一锌指突变体的基础上,以小鼠转录因子Zif268的三锌指DNA结合区为模板,利用重叠(Over-lap)PCR技术,获得了关键氨基酸位点同时突变的三锌指突变体ZF123、2ZF123。ZF123、2ZF123分别克隆进pUC-18质粒,序列测定正确后,以pGEX-2T为表达质粒,在大肠杆菌JM109中实现了功能性的表达。经SDS-PAGE分析,表达出了分子量34.0kD的融合蛋白,扫描分析其含量在20%左右。菌体经超声波破碎后,对可溶性融合蛋白进行了纯化得到了游离的目的蛋白,为进一步的DNA结合特性分析、杂交转录因子的构建等奠定了基础。 相似文献
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锌指结构:最普遍的核酸识别元件 总被引:3,自引:0,他引:3
锌指是最大的DNA结合蛋白家庭,是识别DNA最有效、最成功的一种结构元件。其模块性结构特点及与核酸作用的相对简单性,使其成为研究蛋白-核酸相互作用的理想材料,以及人为设计筛选新的核酸结合蛋白的最佳元件。 相似文献
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红霉素类药物基因工程 总被引:1,自引:0,他引:1
红霉素类药物在临床上应用广泛,已通过化学修饰发展到第三代红霉素。红霉素基因工程发展迅速.不仅合成了100多种红霉素结构类似物.而且在提高红霉素产量方面也取得了重要进展,下面重点介绍红霉素类药物基因工程研究概况,特别对合成新的红霉素类似物和提高红霉素产量进行了阐述。 相似文献
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大环内酯类抗生素基因工程是近年来研究的一个新领域,迄今已合成了100多种新的聚酮类化合物。以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模板,用重叠PCR方法扩增出去除KR6酶域DNA的约32kb DNA片段,克隆于pWHM3载体,构建了同源重组质粒pWHM2201。PEG介导原生质体转化法将pWHM2201转入糖多孢红霉菌A226,并整合于染色体红霉素合成基因位点。整合体在R3M斜面上生长两代后,制备原生质体涂R3M平皿。利用PCR鉴定筛选出8株KR6敲除的突变体糖多孢红霉菌M(1-8)。ZabsPec Fab质谱鉴定,证实糖多孢红霉菌M1合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B,一种新的酮内酯类化合物。
〖HJ0 相似文献
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“外源基因全序列结构优化”是依据外源基因序列结构是影响其在大肠杆菌中表达的重要因素,而提出的一种新的实现外源基因在大肠杆菌中高效表达的策略。该策略包括以下几个步骤:1目的基因全序列变异文库的构建;2利用高通量表达筛选载体从变异文库中筛选表达突变体;3表达突变体的鉴定和表达研究。其中,变异文库的构建方法和性质对研究的结果有着重要的影响。变异文库的构建可有多种方法,其中低频率的随机突变方法是一重要的类型。为了探索最适合突变的方法,我们以HIV-1gp120-801基因为模型、选用了一组基于PCR技术的基因随机突变技术用来构… 相似文献
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以小鼠转录因子Zif268的三锌指DNA结合区为模板,利用重叠(Overlap)PCR技术,获得Zif268关键氨基酸位点同时突变的三锌指突变体ZF123、2ZF123。以ZFl23、2ZF123为模板,PCR扩增获得TAT—ZF123,TAT—2ZF123序列。构建表达质拉PET—28—a^ —TAT—ZF123,pET—28—a^ —TAT—2ZF123。为利用HIVTAT蛋白的跨膜功能,实现ZF123、2ZF123在哺乳动物细胞中的表达打下基础。 相似文献
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DNA重排及体外分子进化 总被引:1,自引:1,他引:1
DNA重排是目前为止最简便、最有效的体外定向进化技术,可以对单一基因、质粒、代谢途径、部分甚至整个基因组进行改造。本综述了DNA重排的基本原理、特点、与其它体外进化技术的不同,着重介绍了其在体外分子进化上的广泛应用,并对应用前景进行了展望。 相似文献
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