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BTF2,又称TFⅡH,为一多亚基蛋白质复合物,具有解链酶、依赖DNA的ATP酶及磷酸激酶活性,参与mRNA转录起始以及与转录偶联的核苷酸切除修复过程,在转录起始复合物形成过程中,BTF2/TFⅡH在有TFⅡE存在时,可使RNA聚合酶Ⅱ的羧端区域(CTD)、TBP及有关转录因子磷酸化.磷酸化反应可影响转录起始复合物中的蛋白质-蛋白质相互作用,调节转录起始,因此,BTF2/TFⅡH是一种重要的基本转录因子. 相似文献
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HLH 蛋白是近几年来发现的一类 DNA 结合蛋白,其分子中含有一螺旋-环-螺旋(HLH)结构.至今,其家族成员已超过20个,它们参与转录调节、细胞癌变以及细胞分化等过程.骨骼肌发育成熟的各个阶段均受到特异生肌转录调节蛋白因子的控制.这些因子包括 Myo D1,myogenin 以及 Myf-5等,它们均系 HLH 家族成员,在生肌过程中起非常重要作用. 相似文献
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染色质的组成成分,组蛋白和非组蛋白在特异的蛋白激酶作用下可以发生磷酸化修饰,组蛋白和非组蛋白的磷酸化和脱磷酸化可能在染色质的结构,基因表达以及DNA复制中起着重要的作用。本文比较是小鼠腹水型肝癌细胞核和正常小鼠肝细胞核内酸溶性蛋白质及其磷酸化的差异。正常小鼠肝细胞核酸溶性蛋白质的电泳染色图谱有一条明显可见的组蛋白H_1~0蛋白带,而对小鼠腹水型肝癌来说,此带极浅,但在腹水型肝癌细胞核酸溶性蛋白质的电泳染色图谱上可见到表观分子量约为68K的一条蛋白带,而正常小鼠肝未见此带。此外,从电泳胶片~(32)P放射自显影图谱可见腹水型肝癌组蛋白H_1,H_2A和非组蛋白带Ⅱ(MW43K),带Ⅲ(MW.67K)带Ⅳ(M.w.97K)磷酸化程度明显高于正常小鼠肝。 相似文献
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细胞团子IL-1β可以诱导SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中APP基因的转录.为了研究APP基因启动子区的IL-1β反应元件,用含不同长度APP启动子片段的报告基因载体,瞬时转染SH-SY5Y细胞,发现APP启动子在SH-SY5Y细胞中有较强活性,其中-488到-303区为IL-1β诱导APP转录活性增加所必需,这个区域包括1个AP1结合位点和1个HSE元件. 相似文献
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淀粉样前体蛋白(APP)是阿尔茨海默氏病(AD)病因学中重要的分子,但其正常的生理功能尚不清楚.为了研究细胞内过量产生其各种片段对细胞生理机能的影响.将人APP695cDNA中编码C端105个氨基酸残基的DNA片段重组到真核表达载体pDORneo中形成重组质粒pDOR-neo-CT.然后用脂质体将其转染到人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中.用800μg/mlG418筛选获得了在mRNA和蛋白质水平均表达相应片段的稳定细胞系.MTT和LDH分析表明,APPC端的表达未能对SH-SY5Y细胞产生明显的毒性作用. 相似文献
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构建 cDNA 文库时,为了提高获得全长 cDNA 的可能性,在进行连接和包装反应之前,应当采用Sepharose CL-4B 柱层析对 cDNA 首先进行筛分。一般的方法是在提取 mRNA 之后,利用逆转录酶合成cDNA 第一链,然后直接在第一链反应混合液中加入同位素、RNase H 和 E.coli DNA 聚合酶 I 示踪合成cDNA 第二链,再进行甲基化、连接接头并以限制性内切酶消化,上 Sepharose CL-4B 柱层析进行分离。显然这一程序由于多次使用同位素,增加了放射污染材料扩散的可能,也给整个实验过程带来不便。 相似文献
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业已证明,鸡nAchRγ亚基基因5'连接区,-509/-302,-324/+36片段可独立激活异源启动子SV40的转录活性;γ基因近端两个E盒子(CANNTG)与生肌调节因子(myogenin)的相互作用及转录激活分析表明,近端两个E盒于是γ启动子活性必不可少的,但却是不充分的。利用胶阻滞和DNaseⅠ足纹试验观察了鸡nAcbRγ基因远端E盒子与GST-myogenin融合蛋白的相互作用。胶阻滞试验证明,-538/-288片段可与myogenin相互结合,引起(32) ̄p标记的DNA片段在PAGE中迁移率减慢,这种胶阻滞现象可被含E盒子的未标记片段消除,并被抗鸡myogenin单克隆抗体或抗血清所改变。DNaseⅠ足纹试验证明,myogenin系通过γ基因转录起始点上游-429/-424及-463/-458两个E盒子与γ基因5'连接区-538/-288相互作用。 相似文献
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先前曾报告鸡AChRγ亚基基因5'连接区-538/-288片段(含一对E盒子)与生肌调节因子(myogenin)的相互作用,为进一步观察DNA-myogenin相互作用对γ基因转录激活功能的影响,利用瞬时表达体系研究了鸡nAChRγ亚基基因5'端-538/-288片段调控机能。CAT分析表明:γ基因-538/-288片段可显著激活tk启动子在分化的C2C12肌细胞中的转录活性,但不能激活在未分化C2C12肌细胞中的转录活性。这种组织特异性转录激活作用与距离无关,因而是一个典型的增强子;-538/-288片段的增强子样作用既依赖于两毗邻E盒子的完整性,又依赖于myogenin等生肌调节因子的存在。强化表达myogenin可激活pBLCAT2-γ(-538/-433)和pBLCAT2-γ(-432/-288)(各含一个E盒子)在分化肌细胞中的表达,究竟是克隆片段中的独立E盒子对这种表达起贡献还是出现在克隆位点附近的反向E盒子(GTCGAC)或tk启动子中的另一个E盆子起作用?尚不十分清楚。 相似文献