富含RNA酶大鼠腺体组织总RNA提取方法改良

为了改良传统提取富含RNA酶大鼠胰腺和腮腺组织总RNA方法,本研究将组织样本分成对照组,0.5％,1.0％和2.0％β-巯基乙醇处理组,对照组采用Trizol法提取总RNA,β-巯基乙醇处理组分别于Trizol试剂中加入0.5％,1％,2％β-巯基乙醇.测定不同处理组单链核酸含量、完整性,A260/280和A260/230;采用实时荧光定量PCR检测管家基因β-actin,GAPDH,胰腺淀粉酶AMY2和腮腺水通道蛋白AQP-5表达情况,并通过计算扩增效率,验证β-巯基乙醇是否对后续PCR实验有影响.结果表明,不同处理组单链核酸含量、A260/280,A260/230无显著差异,β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于对照组,1.0％,2.0％β-巯基乙醇组RNA完整性显著高于0.5％β-巯基乙醇组,1.0％β-巯基乙醇组RNA完整性与2.0％β-巯基乙醇组无显著差异;添加1.0％β-巯基乙醇对后续PCR试验无影响.综上所述,在传统Trizol法内添加β-巯基乙醇可显著提高胰腺和腮腺组织总RNA提取质量,其中添加1.0％β-巯基乙醇是最佳提取方案.     

宫颈冷刀锥切术治疗宫颈上皮内瘤变的疗效观察及术后切缘阳性的危险因素分析

目的:探讨宫颈冷刀锥切术(CKC)治疗宫颈上皮内瘤变(CIN)的疗效,并分析术后切缘阳性的危险因素。方法:回顾性分析2009年1月至2017年12月在广州医科大学附属第三医院接受治疗的509例CIN患者的临床资料,其中行CKC治疗的患者318例记为CKC组,行宫颈环形电切术(LEEP)治疗的患者191例记为LEEP组,对比两组患者的手术指标、术后并发症发生率、切缘阳性率以及复发率,根据所有患者术后病理检查结果将其分为切缘阳性组和切缘阴性组,采用单因素和多因素Logistic回归分析方法分析CIN患者术后切缘阳性的危险因素。结果:CKC组患者的手术时间、住院时间均长于LEEP组患者,术中出血量多于LEEP组患者,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。CKC组患者的术后并发症发生率、切缘阳性率、复发率均低于LEEP组患者,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析显示,切缘阳性组的手术方式、人类乳头状瘤病毒(HPV)感染、CIN病变分级、有无宫颈上皮腺体受累与切缘阴性组比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,手术方式为LEEP、HPV感染呈阳性、CIN病变分级为Ⅲ级、有宫颈上皮腺体受累是CIN术后切缘阳性的危险因素(P<0.05)。结论:采用CKC治疗CIN能够降低患者术后切缘阳性率和复发率,安全可靠。手术方式为LEEP、HPV感染呈阳性、CIN病变分级为Ⅲ级、有宫颈上皮腺体受累是CIN术后切缘阳性的危险因素,在治疗过程中应重视以上危险因素,并采取针对性措施以降低CIN术后切缘阳性的发生率。     

洋葱伯克霍尔德菌T1828质粒消除方法及条件

采用十二烷基硫酸钠和提高生长温度结合法、紫外线涂布平板法、冻融法、吖啶橙法和黄芩甙提取液消除法等方法消除洋葱伯克霍尔德菌T1828菌株质粒,探讨适合洋葱伯克霍尔德菌质粒消除的方法,并研究最佳质粒消除条件。结果表明十二烷基硫酸钠和提高生长温度结合法最适合于洋葱伯克霍尔德菌T1828质粒消除,同时最佳消除条件为:在T1828培养16 h后加入SDS使其终浓度0.1%,36°C处理18 h,消除率达到49%。筛选到的无质粒突变株可以用于进一步的研究。     

生长分化因子-5及碱性成纤维细胞生长因子诱导家兔椎间盘髓核细胞成骨作用的研究

目的建立家兔椎间盘髓核细胞的体外培养模型,研究重组人生长分化因子-5(recombinant human growth differentiation factor-5,rhGDF-5)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对髓核细胞成骨潜能的激发作用。方法将诱导剂rhGDF-5和bFGF分别及联合加入体外培养的髓核细胞中,观察髓核细胞的成骨表型表达和细胞学特性的变化。结果 rhGDF-5和bFGF均能促进钙盐沉积形成钙结节。rhGDF-5抑制髓核细胞增殖同时增加骨钙素表达;bFGF促进髓核细胞增殖及Ⅰ型胶原表达,但对骨钙素表达无显著影响。联合使用rhGDF-5和bFGF对髓核细胞成骨潜能(促进髓核细胞增殖、Ⅰ型胶原及骨钙素表达和钙盐沉积)的激发作用均优于单独使用其中任一细胞因子。结论 rhGDF-5诱导髓核细胞向成骨细胞分化,bFGF加强该诱导作用,联合使用rhGDF-5和bFGF能充分激发髓核细胞的成骨潜能。     

温度对兰州百合鳞片埋培繁殖的影响

为了筛选出兰州百合鳞片埋培繁殖的最适温度和鳞片层次,解决兰州百合种源不足、繁育周期长的问题,该文以兰州百合鳞片为材料,采用温度(20、25、30℃)和鳞片层次(外层、中层、内层)二因素完全随机区组设计,研究了二因素对兰州百合鳞片埋培繁殖效果的影响。通过对鳞片疑似发病率、分化率及小鳞茎分化数进行统计与分析,结果发现不同温度处理及各鳞片层次对鳞片疑似发病率、分化率及小鳞茎分化数的影响存在显著或极显著差异。结果表明:(1)温度越高,鳞片的疑似发病率越低,在埋培2周时,20℃处理下疑似发病率最高(38.67%),30℃处理下最低(10%);各层次鳞片的疑似发病率由高到低依次为外层中层内层。(2)在25、30℃处理下,小鳞茎分化率最高,埋培结束(6周)时分别为91.33%、90.89%;中层及内层鳞片小鳞茎分化率极显著高于外层鳞片。(3) 30℃处理下鳞片形成小鳞茎数最多,在埋培6周时达到每片2.00粒;同时中层及内层鳞片小鳞茎分化数显著高于外层鳞片。综上结果表明,兰州百合鳞片埋培繁殖以选用中层(3~4层)、内层(5~7层)鳞片在25~30℃条件下繁殖效果最好。     

太平洋日本沿岸斑点原海豚的年龄鉴定与生长

本文利用改良的石蜡包埋切片染色技术,对太平洋日本沿岸收集到的286头斑点原海豚(Stenella attenuata)的牙齿标本进行了年龄鉴定,定义了斑点原海豚的牙齿质和牙骨质生长层组(GLGs)。从年龄和生长的角度对斑点原海豚的一些种群生物学特征进行了分析,并推算了部分种群参数。斑点原海豚在约18龄时,牙齿质停止生长,牙髓腔封闭。牙齿质中计数到的GLGs最多为18层,牙骨质中计数到的最多为42层。斑点原海豚的年龄与生长在一定范围内遵循一定的幂函数关系。5—6龄以前,斑点原海豚生长迅速,雌雄生长无明显差异。8—14龄之间,雄性的生长快于雌性。雌性约17龄时达到饱和体长191cm,雄性约22龄达到饱和体长201cm[动物学报51(3)：476-485,2005]。     

水稻胚乳发育中淀粉体和蛋白体ATPase活性的动态变化

利用ATPase定位技术,对水稻品种(OryzasativaL.cv.Minghui63)胚乳细胞发育中后期淀粉体和蛋白体的ATPase活性进行了超微细胞化学定位。结果表明,在淀粉体内外膜上、淀粉粒间的通道上和淀粉体四周的无定形物上呈现显著的ATPase活性。蛋白体Ⅰ和蛋白体Ⅱ的膜上和四周的囊泡、小泡上均出现ATPase活性产物。另外,胚乳细胞的胞壁和质膜,糊粉层和亚糊粉层细胞的胞壁、质膜、细胞核和胞间连丝上也有定位的ATPase活性产物分布。根据ATPase活性产物分布特点,推测淀粉体内的网状通道是便于养分进入淀粉体内部的转运通道。淀粉体膜和蛋白体膜上的ATPase主要是为养分进入内部提供跨膜动力。     

大蒜化学成分的气-质联用分析

本文采用环己烷、乙酸乙酯和正丁醇对大蒜（Allium sativum L.）新鲜鳞茎的95%乙醇提取物进行萃取,并与水蒸气蒸馏法提取的挥发油成分进行比较,用GC-MS对其成分进行定性和定量分析.在环己烷萃取物中共检出112个成分,鉴定了38个化合物,占环己烷萃取物总量的80.08%;在乙酸乙酯萃取物中检出86个成分,鉴定了26个化合物,占乙酸乙酯萃取物总量的56.70%;在正丁醇萃取物中未检出挥发性成分.在水蒸气蒸馏法提取的挥发油中共检出109个成分,鉴定了29个化合物,占挥发油总量的83.58%.大蒜95%乙醇提取物的环己烷和乙酸乙酯萃取物及大蒜挥发油中皆以含硫化合物为主.在环己烷和乙酸乙酯萃取物中,阿霍烯的含量分别为生药的0.00395%和0.00145%,大蒜中阿霍烯含量达0.00540%.     

胸苷酸合成酶表达调控的分子机制

胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)是生物体内催化胸苷酸合成所必需的酶．多年来一直作为肿瘤化疗的重要靶酶。对TS基因调控机制的研究表明：基因扩增、转录、翻译和翻译后过程都参与了TS表达的调控。先前的研究表明：TS可与自身的mRNA结合形成TS-mRNA复合物,使mRNA翻译受阻,5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)等抗代谢药物可与TS蛋白结合,结合后的复合物不能与TS mRNA作用,导致体内TS的表达升高,是肿瘤细胞产生抗药性的重要分子机制之一。现对TS基因表达调控研究进展、翻译调控与抗药性产生的分子机制进行综述。