HES4抑制急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat对阿糖胞苷的敏感性

摘要 目的：研究hes家族bHLH转录因子4（HES4）与急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞系Jurkat对化疗药物阿糖胞苷（Ara-C）的敏感性作用。方法：构建Lenti-pCDH-HES4-puro质粒,包装慢病毒感染Jurkat细胞,感染空载体Lenti-pCDH-puro为对照组,puromycin筛选阳性细胞,Realtime-PCR检测转录水平HES4过表达情况,CCK8法检测Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol?L^-1;设计3对针对于HES4的特异sgRNA序列,构建LentiGuide-sgRNA1-puro、LentiGuide-sgRNA2-Puro、LentiGuide-sgRNA3-puro质粒,LentiGuide-puro空载体为对照组,包装慢病毒感染Jurkat细胞,puromycin筛选,提取基因组DNA,PCR扩增sgRNA的靶序列,一代测序检测HES4的敲除效率,CCK8法检测敲除HES4后Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol?L^-1。结果：与对照组相比,HES4在Jurkat中过表达（2.37 ± 0.09）倍（P < 0.001）,在Ara-C为1 nmol?L-1、100 nmol?L^-1 浓度下,过表达HES4使Jurkat对Ara-C的药物敏感性降低（P值分别小于0.01、0.05）; sgRNA1、sgRNA 2、sgRNA 3敲除分值分别为83、71、63,其中sgRNA1的敲除效果最佳,在Ara-C为1000 nmol?L^-1浓度下,敲除HES4促进Jurkat对Ara-C的敏感性（P < 0.05）,3条sgRNAs之间无明显区别（P > 0.05）。结论：HES4抑制T-ALL细胞系Jurkat对Ara-C的敏感性,为T-ALL化疗耐受的机制研究提供指导。     

植物抗毒素研究进展及其作为食品功能性成分的应用前景

植物抗毒素是植物受到外界刺激或感染病菌后合成并积累的具有抗逆活性的小分子化合物.过去对它的研究集中在其生成机理以及作为植物免疫体系组成成分、起到抗病作用等方面.新近的研究表明,植物抗毒素对人体同样具有多重生物学功效,如抗氧化、抗炎、抗癌等.由此,植物抗毒素作为植物次生代谢产物的重要组成部分,在功能食品和膳食补充剂领域有着广阔的应用前景.本文综述了近年来关于植物抗毒素的种类、活性及在植物体内诱生和积累等方面的研究,为食品功能因子的选择性拓展提供依据和指导.     

幽门螺旋杆菌肿瘤坏死因子α诱导蛋白活性分子的构建、结晶及初步晶体学研究

幽门螺旋杆菌中的肿瘤坏死因子α诱导蛋白(Tipα)被鉴定为幽门螺旋杆菌致病感染中的新型致癌因子.Tipα通过NF-κB的激活诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)的大量表达,从而促使宿主的炎症反应以及肿瘤发生、发展的进程.Tipα的同源二聚体为其发挥生物学功能的活性形式,此二聚体以两个单体间N端半胱氨酸形成的二硫键(Cys25-Cys25与Cys27-Cys27)共价连接.Tipα(25-192)的基因克隆至载体pET22b中,并且在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中以可溶形式高水平表达.重组蛋白经过Ni2+金属亲和层析、阳离子交换层析和凝胶阻滞层析进行分离纯化.Tipα蛋白样品分别通过悬滴和microbatch的方法进行结晶搜索和优化.母体和硒代晶体分别衍射到2.2和2.6,均属于C2空间群,并且具有相似的晶胞参数.母体晶体的晶胞参数为a=127.01,b=47.57,c=96.5,α=γ=90°,β=127.5°.     

细胞外信号调节激酶在乳腺癌组织中的活化

目的：探讨人乳腺癌中细胞外信号调节激酶（Erk2,p42MAP）在蛋白表达水平、mRNA表达水平和激酶活性水平的变化。方法：应用Western-blotting,免疫沉淀、激酶活性测定和RT-PCR方法检测37例人乳腺癌及其周围正常组织的Erk2表达及活性变化。结果：与周围正常组织相比,37例人乳腺癌中Erk2蛋白表达显增加（100％）;其激酶活性亦显增高（75.68％）;在mRNA水平,Erk2的表达亦明显增高;Erk2表达与其活性变化无相关性。结论：人乳腺癌中Erk2蛋白表达、mRNA表达和激酶活性均显高于周围正常组织。提示Erk2参与乳腺癌的信号转导,为乳腺癌的活化信号,可能成为人乳腺癌治疗的新靶点。     

HPLC—ELSD法与HPLC—RID法检测蜂蜜中糖分的比较

采用高效液相-蒸发光散射检测方法测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量,从而判断蜂蜜中的糖是否符合国家标准有无掺假。采用ELSD法检测结果表明,果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的线性范围均是0．6—10mg／mL,相对标准偏差分别为0．308％、0．424％、0．327％、0．539％。并将ELSD法与国标中的RID法进行比较,结果显示前者的灵敏度更高,检出限更低,线性范围更广。由此看来,蒸发光散射检测器的比示差折光检测器的在我们检测糖项目上应用较好。     

肝脱细胞基质溶液包被对HepG2细胞增殖及基质金属蛋白酶活性的影响

目的:建立由猪肝组织制备肝脱细胞基质溶液的新方法,并研究基质溶液包被对人肝癌细胞HepG2增殖及基质金属蛋白酶活性的影响。方法:对猪肝脏进行脱细胞处理,经研磨、冻干及胃蛋白酶消化制备肝脱细胞基质溶液,利用此基质溶液包被聚苯乙烯培养表面,进行HepG2细胞体外培养,并使用CCK-8、实时定量PCR、明胶酶谱等检测细胞增殖以及基质金属蛋白酶的基因表达和活性。结果:建立了由猪肝组织制备肝脱细胞基质溶液的新方法。与未包被组相比,脱细胞基质溶液包被培养显著促进HepG2细胞增殖,其细胞周期蛋白cyclin D1的基因表达增高,为未包被组的1.95倍(P0.01)。此外,脱细胞基质溶液包被组HepG2细胞的MMP14基因表达为未包被组的2.01倍(P0.05),明胶酶谱检测基质溶液包被组细胞的MMP9活性为未包被组的6.66倍(P0.01)。结论:肝脱细胞基质溶液包被培养可显著促进HepG2细胞增殖并提高其MMP9的活性,在构建模拟肝癌微环境培养体系中具有一定的应用潜力。     

玛咖及玛咖复方产品对更年期综合征患者免疫指标及维生素水平的影响

目的：观察玛咖及玛咖复方产品对更年期综合征患者免疫指标及维生素水平的影响。方法：80名更年期综合征受试者,随机分成复方玛咖组（40名）和玛咖组（40名）,干预3个月后,比较两组之间及自身前后生化检验、血常规、lgA、lgM、血清维生素水平及体成分的变化。结果：共73名受试者完成研究（复方玛咖组37人、玛咖组36人）,失访率为8.75%。干预结束后,两组之间血生化指标、血常规、血清IgA、IgM及体成分差异无显著性（P＞0.05）;与干预前比较,两组血清IgA均显著增高（P＜0.05）,其中复方玛咖组能够显著增高IgM和降低血清总胆固醇水平;复方玛咖组和玛咖组维生素B1、维生素B2、维生素B12、维生素C、维生素D较干预前均显著增高（P＜0.05）,其中玛咖组维生素B6较之前也显著增高（P＜0.05）。结论：复方玛咖及玛咖产品均可调节更年期综合征患者免疫水平,改善其血清维生素水平,而且复方玛咖产品还能改善血清胆固醇水平。     

呼伦贝尔沙地樟子松外生菌根真菌多样性

沙地樟子松是我国北方重要的防风固沙造林树种,也是一种典型的外生菌根依赖型树种。为揭示呼伦贝尔沙地樟子松外生菌根真菌多样性,以中龄、近熟、成熟3个龄组沙地樟子松人工林和沙地樟子松天然林为研究对象,采用野外调查和分子生物学相结合的研究方法,鉴定分析沙地樟子松外生菌根真菌种群特征。研究结果表明：（1）呼伦贝尔沙地樟子松外生菌根真菌共有10个OTU属于子囊菌,48个OTU属于担子菌,隶属于21科25属。（2）天然林优势菌为糙缘腺革菌属Amphinema、丝膜菌属Cortinarius和乳牛肝菌属Suillus,人工林优势菌为乳牛肝菌属,其余菌种相对丰度随着林龄变化波动较大。（3）天然林与人工林外生菌根真菌种群Shannon、Simpson和Pielou指数存在显著差异（P<0.05）,人工林间alpha多样性指数差异不显著（P>0.05）。（4）呼伦贝尔沙地樟子松天然林和人工林外生菌根真菌种群组成存在较大差异,其中近熟林的外生菌根真菌群落组成与天然林的最为接近。     

血清嗜酸性粒细胞表达水平与鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤病理的相关性分析

摘要 目的：探讨血清嗜酸性粒细胞（EOS）表达水平与鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤（SNIP）病理的相关性。方法：选取我院2016年1月至2020年1月收治的63例SNIP患者作为研究对象,依照所有患者EOS水平将其分为低EOS组、中EOS组、高EOS组,对比三组患者的临床病理特征,并分析EOS表达水平与SNIP病理的相关性。行手术治疗后将63例患者分为预后不良组与预后良好组,对比两组患者的临床相关指标,并分析EOS表达水平对SNIP的预后预测价值。结果：三组患者临床分期、病理诊断对比差异显著（P＜0.05）;以EOS表达水平进行分级：高水平：＞300个/μL,中水平：100-300个/μL,低水平：＜100个/μL。Spearman相关分析结果显示：性别、年龄、病灶位置与EOS表达水平无明显相关性（P＞0.05）,临床分期、病理诊断与EOS水平呈负相关（P＜0.05）;预后良好组与预后不良组患者PLT水平对比无明显差异（P＞0.05）,预后两组患者L、EOS水平明显高于预后不良组,N、PLR、NLR低于预后不良组（P＜0.05）;logistic回归分析结果表明：NLR、EOS为SNIP的预后独立预测因素（P＜0.05）。结论：SNIP患者的临床分期、病理诊断与EOS表达水平呈负相关,且应用NLR和EOS可对SNIP术后复发情况进行预测,因此,可以考虑应用EOS表达水平对SNIP进行诊断与治疗效果判定。