山羊生殖细胞特异报告载体pVASA-EGFP的构建及表达

为监测成体干细胞向生殖细胞分化的过程,分析生殖细胞特异性DEAD-box家族ATP依赖RNA解旋酶vasa在不同日龄山羊睾丸组织中的表达情况并构建山羊生殖细胞特异性报告载体p VASA-EGFP。通过免疫荧光及RT-PCR法监测vasa的表达情况,利用分子技术构建报告载体p VASA-EGFP,脂质体法转染山羊骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs),经过视黄酸(Retinoic acid,RA)诱导后,观察绿色荧光蛋白表达情况以鉴定该报告载体的有效性。免疫荧光结果显示,Vasa在性成熟不同阶段的山羊睾丸组织中均有表达,RT-PCR结果表明vasa基因在3月龄、10月龄山羊睾丸组织中显著高于10日龄组。测序及酶切鉴定结果表明,扩增的vasa基因启动子片段成功连至N1载体,转染BMSCs后经4 d的RA诱导,发现有绿色荧光蛋白表达,表明成功构建了山羊vasa基因启动子调控的报告载体p VASA-EGFP。以上结果表明,vasa基因在不同日龄山羊睾丸组织中均有表达,所构建的山羊生殖细胞特异性报告载体p VASA-EGFP具有示踪山羊成体干细胞向生殖细胞分化过程的能力,为下一步监测山羊BMSCs向生殖细胞分化的过程提供了鉴定和筛选方法。     

小梅山猪骨髓间充质干细胞Cx43基因修饰

通过在小梅山猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)中过表达缝隙连接蛋白43基因(Cx43),探究Cx43对小梅山猪BMSCs增殖及凋亡的影响,为构建转基因动物模型奠定基础。利用分子技术构建Cx43真核表达载体p EGFP-Cx43,Nucleofector TM法转染P3代BMSCs,检测细胞转染效率,经RT-PCR、免疫荧光和Western blotting鉴定Cx43的表达,流式细胞技术分析BMSCs的增殖能力和凋亡情况。酶切鉴定和测序结果表明,p EGFP-Cx43真核表达载体构建成功,转染BMSCs后,EGFP阳性细胞约占60%。转基因BMSCs中Cx43蛋白表达显著增加,细胞增殖能力显著提高、凋亡率显著下降。结果表明,在小梅山猪BMSCs中过表达Cx43不仅能促进细胞增殖而且抑制其凋亡,为下一步在体研究奠定了基础。     

人乳铁蛋白cDNA 基因乳腺表达载体的构建与鉴定

为了构建人乳铁蛋白基因 (hLF) 的乳腺表达载体并验证其在乳腺细胞中的表达情况,本载体以山羊β-casein基因上游包括启动子、外显子1、内含子1、部分外显子2作为5′端调控序列,下游包括部分外显子7、内含子7、外显子8、内含子8、外显子9及3′部分基因组片段作为3′端调控序列,长度分别为6.2 kb和7.1 kb,将hLF基因 (目的基因) 和Neo基因 (筛选标记) 分别插入到5′端调控序列和3′端调控序列的下游,构建成pBC1-hLF-Neo载体,其全长为25.348 kb。为了检测该载体的生物学     

胶红酵母利用番茄渣和豆粕为原料发酵生产类胡萝卜素的研究

基于降低微生物类胡萝卜素生产成本的考虑,采用番茄渣、豆粕的纤维素酶酶解产物培养胶红酵母,以单位体积发酵液中的总类胡萝卜素浓度增量作为优化目标,先后运用逐步单因素法和均匀设计法系统性地考查了胶红酵母的总类胡萝卜素产量和增量与各个相关因素之间的关系。实验获得的总类胡萝卜素最大产量以及扣除了番茄渣中的类胡萝卜素含量而计算得到的增量分别为12.25 mg/L和10.25 mg/L。实验结果证明设计的生产工艺能够以较低的成本生产出富含类胡萝卜素的饲料,因而是经济可行的。     

知识管理--新世纪医学图书馆的变革

医院专业技术人员集中,知识密集,是靠医疗技术发展的事业单位,医学的发展依赖于科学技术的创新,医院地位的高低、取决于治疗疾病的技术水平,医务人员在科研活动中对课题研究设计、查新、选材都离不开图书馆的帮助。医学图书馆不仅是知识宝库,而且是获得科技成果的金钥匙,同时也是培养科技人才的孵化器和摇篮。在医学知识经济时代,知识已成为主导地位的因素,作为知识宝库的图书馆被提高到了一个重要位置。而传统的有效维护馆藏品、整理资料、管理图书等为概念的管理模式在医学图书馆数字时代已变得不再准确,正在转向以知识导航和知识评价,信…     

图书馆通过创新服务吸引读者的研究

在知识经济走向全球化的今天,它已经翻开了更新知识、科技兴院,实施标准化管理及现代化服务的崭新一页,也为我们医院图书馆的建设和发展带来了机遇,同时对我们科技工作者做好信息服务工作又是一种严重挑战。如何面对现实,以开拓创新的全新的面貌,更好的吸引读者走进图书馆,是我     

人甲状旁腺素(1-34)衍生物在大肠杆菌中表达、纯化及其生物学活性

为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序列 ,转入E .coliJM10 9中 ,IPTG诱导表达 .该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 2 0 %以上 ,主要以包涵体形式存在 ,盐酸羟胺切割表达产物 .分析表明 ,80 %左右的融合蛋白被裂解为GST6 9△和Gly hPTH(1 34) .经分子筛柱层析和反相层析分离纯化获得重组Gly hPTH(1 34)衍生物 ,纯度达 98%以上 ,回收率约为 10mg/升发酵液 ,分子量为 4 177,等电点 (pI)为 8 4 0 ,N端 16个氨基酸 ,除第一个为甘氨酸外 ,其余与天然hPTH(1 34)序列一致 .Western印迹结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物具有hPTH(1 34)的免疫学活性 .体外活性测定结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物能刺激人成骨细胞HOSTE85增殖、增加细胞内胶原合成、ALP活性增高和cAMP生成量增加 ,并呈量效关系 ,提示它具有与化学合成的hPTH(1 34)相同的生物学活性 ,N端多一个Gly对其活性无明显影响 .     

血管紧张肽转化酶2与肾素-血管紧张肽系统的研究进展

肾素-血管紧张肽系统（RAS）在维持血压稳态、水盐平衡,及局部组织器官的正常功能等方面具有重要的作用。局部RAS的失衡将导致这些器官的疾病。血管紧张肽转化酶2（ACE2）是ACE的同源物,作为RAS的重要负调节因子,平衡血管紧张肽Ⅱ的产生,维持循环系统和局部组织中RAS的稳态。本文综述了在心血管、肺、肾、肝等器官的多种急、慢性疾病患者或动物模型中,RAS与ACE2所发挥的重要作用。     

干扰与生态系统演替的空间分析

演替不光是生态系统在时间序列上的替代过程,而且也是生态系统在空间上的动态演变。演替的空间属性有演替系列的格局、范围、尺度、演替方向和速率、稳定的程度、多样性、以及在自然和人为干扰下的恢复等。干扰破坏了生态系统的稳定性,形成生态系统结构和功能的破损,使生态系统处于一种过渡状态。但是干扰也是生态系统演替的外在驱动力,自然的和人为的干扰引起的生态系统的对称性破缺,推动了系统的进化和演变。外界因素作用于生态系统的干扰因子包含了很多种类,如火、风倒、洪水、病虫害、人类活动等。干扰的属性有范围、频度、季节、强度、损害度、返回时间和循环周期。讨论了这些干扰的类型和生态系统演替所具有空间的特征,并且介绍了干扰和生态系统演替空间分析常用的方法,如空间解绎和辨识、空间统计分析、空间格局分析和地理信息系统的空间分析、以及空间模拟。利用了一些典型的实例来深入阐明空间分析在干扰和生态系统演替中的应用。利用美国加利福尼亚北部火干扰的历史和空间分布的记录,进行了火干扰的空间分析的研究;用Spies等在美国俄勒冈州西部1972～1988年的多时段的变化的实例说明了收获干扰的影响;利用俄勒冈州东部山地的主要两个虫害(山地松树甲虫(Mountain Pine Beetle)和云杉蚜虫(Spruce Budworm))22a的数据分析了病虫害干扰的空间分布格局及其与海拔、温度、降水和植被类型的关系。在生态系统演替的空间分析方面,以美国俄勒冈州西部的历史和现实植被演替格局的分析为例,讨论了如何利用空间分析方法研究区域尺度生态系统的演替,同时比较了历史和现实植被的空间格局指数的变化;用两个实例来说明空间分析在辨识大陆和国家尺度生态系统变迁中的应用,一个是美国原生的老森林(Old～growth)植被从1620年到1920年,300a的空间格局变化,另外一个是加拿大植被从1600年到2000年,大约400a的空间分布变化。最后,对生态系统演替的空间分析的一些重要问题作了探讨,例如：空间分析可否帮助确定地带性顶极群落;如何将外貌与成分结合更好地识别生态系统演替的空间格局与演变趋势;以及如何利用空间分析研究由于人类活动干扰加剧所造成的生态系统自然演化规律的异化。     

两种方法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性的对比分析

目的 对比分析2种检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(exendin-4-Fc fusion protein, Ex4-Fc)生物学活性的方法。方法 分别用细胞ELISA和报告基因法检测Ex4-Fc的生物学活性,同时对2种方法的专属性、检测范围、重复性、准确性和一致性进行考察。结果 2种检测方法均具有良好的专属性,检测范围基本一致(3.05 ng/mL～50.00μg/mL),重复性验证中RSD均<15%,回收率均在80%～120%之间,且2种方法检测结果差异无统计学意义(P=0.565)。结论 本研究评价的细胞ELISA和报告基因法对Ex4-Fc生物学活性的检测结果均具有良好的重复性和准确性,且两种方法具有良好的一致性,可根据具体的实验条件和要求选择不同的检测方法。