羊输卵管液中发情相关糖蛋白的性质研究

哺乳动物输卵管液为受精和早期受精卵的发育提供了一个理想的生理生化环境。人们对输卵管液的成分已进行了初步研究,其中发情相关糖蛋白（ＥＧＰ）是被研究的成分之一。ＥＧＰ仅存在在排卵核受精前后的输卵管液中。当受精卵进入子宫区,输卵管液中的ＥＧＰ就消失了。显然,ＥＧＰ是与哺乳动物的早期发育过程密切相关的。尽管人们对ＥＧＰ的确切生理功能尚不清楚,但作为第一步,首先弄清ＥＧＰ的理化性质是十分重要的。本文目的在于研究羊输卵管液中ＥＧＰ的理化性质。本文采用单向（１Ｄ）、双向（２Ｄ）ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和等电聚胶电泳（ＩＥＦ）,结合Ｗｃｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术对ＥＧＰ的性质进行了研究。由于单克隆抗体及花生凝集素（ＰｅａｎｕｔＡｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）和ＥＧＰ相结合的专一性很高,所以不必事先对ＥＧＰ进行纯化就可直接进行分析,我们的结果证明羊ＥＧＰ包括两种蛋白质,一种是酸性蛋白,它的等电点为数４．５;另一种是碱性蛋白,其等电点是８．０;这两种蛋白亚基的分子量相同,都是１０ＫＤ。从不同物种间ＥＧＰ这些理化数据上比较,羊和狒狒的非常接近,但和其他动物的有很多不同。我们认为来自不同动物的ＥＧＰ可能是一类性质相同的蛋白质,具有相     

小鼠2-细胞胚胎ATP合成酶6基因特异表达分析及鉴定

合子基因组活化是小鼠胚胎早期发育由细胞质调控向核调控转变的关键 .小鼠合子基因组活化发生在 2 细胞胚胎阶段 ,通过对 2 细胞胚胎阶段特异性表达基因的分析 ,可以从分子水平上揭示早期小鼠胚胎的发育机理 .用DD RTPCR技术 ,从单个小鼠 2 细胞胚胎与成熟卵母细胞 (MII细胞 )中分离了 2个差异片段 ,片段 2同小鼠睾丸中表达的一个未知片段具有高度同源性 .经过cDNA文库构建、筛选 ,分离到其全长cDNA .序列分析结果表明 ,该基因为小鼠ATP合成酶亚单位 6基因 .ATP合成酶亚单位 6基因由线粒体DNA编码 ,与细胞内ATP的合成相关 .小鼠 2 细胞胚胎特异表达的ATP合成酶亚单位 6基因可能与胚胎正常发育相关     

后生遗传修饰及其对动物克隆的影响

近年来,不断有新的哺乳动物和两栖类动物被成功克隆,但这并不能掩盖克隆效率过低和克隆动物异常的现实,为了解决这一问题,人们对克隆机理进行了大量研究。高度分化的体细胞核在去核的卵质中去分化和再程序化不完全是导致动物克隆失败的主要原因,而去分化和再程序化不完全主要是由于基因组去甲基化不充分和过早再甲基化引起克隆胚中甲基化水平比正常胚中偏高所至,这可引起一些重要基因的异常表达,尤其是印记基因。这些机制的研究对提高克隆效率有着重要意义。     

鸡胚肝凝集素受体的放射自显影和扫描电镜观察

近些年来用标记过的外源凝集素作探针以研究细胞膜的结构和功能已取得很大进展。本文首次用~(125)I标记鸡胚肝凝集素,再以~(125)I-凝集素亲和标记鸡胚肝细胞。标记的鸡胚肝细胞经放射自显影(ARG),可用扫描电镜(SEM)对细胞表面受体的位点进行直接观察,以研究鸡胚肝凝集素受体的分布特征。     

山羊发情相关输卵管糖蛋白(gEGP)基因的克隆

哺乳动物的输卵管精心设计了一个独特的液体环境 ,使得雌、雄性生殖细胞的运输及最终成熟、受精和早期胚胎发育能够顺利进行 .其中有一种源于分泌细胞的蛋白—发情相关的输卵管糖蛋白 (ｅｓｔｒｕｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｏｖｉｄｕｃｔｕａｌｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ,ＥＧＰ) ,自从Ｓｕｔｔｏｎ等于 1984年首次在绵羊中发现的[1] ,在其他的物种中 ,如 ,狒狒、人、小鼠、猕猴、牛、羊、猪、仓鼠等 ,也都有发现[2 ,3 ,4] .虽然已有实验数据证明 ,当卵子经过输卵管时 ,它们可与卵子的透明带 (ｚｏｎａｐｅｌｌｕｃｉｄａ ,ＺＰ)和 或卵黄周…     

用原位杂交法定位猪乳铁蛋白基因于染色体2q12

本研究以非放射性标记的猪乳铁蛋白(Porcine Lactoferrin简称PLF)cDNA 为探针,通过染色体原位杂交法,对PLF基因进行了染色体定位。实验中采用金胶抗体技术并结合使用银增强系统,提高了方法的灵敏度。利用染色体的组型分析,对杂交点的分布进行统计学分析。52%(26/50)的分裂相在第2号染色体具银粒分布,实验结果表明：PLF基因定位于猪2号染色体2q¹²区域。     

转pGH基因猪外源基因染色体定位研究

应用地高辛标记探针对转pGH基因(猪生长激素基因)猪染色体进行原位杂交,经胶体金抗体、银增强放大系统检测外源pGH基因在染色体上的整合位点。研究表明,转基因阳性个体间外源基因整合位点存在差异,但对个体而言,外源基因总是集中分布于某一特定的染色体上。本研究将为探究外源基因整合位点与其表达效率的关系及今后定点整合的研究提供理论指导。     

干扰素α应答基因的克隆及在兔早期胚胎发育中功能分析

干扰素(interferon,IFN)在哺乳动物早期胚胎发育过程中具有重要的生理功能,但是其作用机制尚不清楚.通过筛选卵巢cDNA文库和5′-RACE方法,克隆了兔卵巢干扰素α应答基因(interferonresponsivegene,IFRG)的全长cDNA(登录号:AJ584672).利用RT-PCR证明IFRG在兔卵母细胞和植入前胚胎中均有表达,这将为深入研究IFN在早期胚胎中的作用机制提供理论参考,卵巢原位杂交表明IFRG在成熟卵泡(类型5)的颗粒细胞中有表达,在初级和次级卵泡的膜鞘细胞和粒层细胞中有很高的表达,鉴于这些细胞与卵泡的发育密切相关,推测IFRG在卵泡的发育、成熟和排卵中发挥重要作用.     

用改进的模式系统克隆红细胞发育相关基因(英文)

红细胞发生的研究主要依赖于MEL细胞系和分离到的少量的小鼠成红细胞。MEL细胞由Friend病毒转化而来 ,对促红细胞生成素不敏感 ;而成红细胞主要来源于鸡、人、小鼠、大鼠胎肝、小鼠肾脏或骨髓 ,因量少 ,所以严重困扰着红细胞发生在分子水平上的研究。本文采用现宰杀的胎羊血液 ,不仅满足了分子生物学起始材料量的要求 ,又能直接反映出红细胞发生在体内的真实状况。通过对mRNA差异显示技术的改进 ,在DNA测序胶上比较胎羊成红细胞和怀孕母羊淋巴细胞扩增的cDNA片段 ,发现两条差异条带 :其中一个片段是新基因 ,进行蛋白质序列预测发现与UV敏感的锥状视蛋白、视紫红质有一定的同源性 ,由于其血细胞对辐射很敏感 ,故推测该片段与辐射造成的细胞杀伤作用有关 ;另一个片段为葡萄糖诱导基因 /延伸因子 2的 3′非编码区 ,该片段最早在葡萄糖诱导后的牛主动脉平滑肌细胞被克隆到。通过反向Northern杂交证明 ,所发现的新基因具有真实性。