蛹虫草线粒体基因型快速检测体系的构建及线粒体遗传稳定性的初步研究

本研究的目的是建立一种快速确定蛹虫草菌株线粒体基因型的技术体系,并探讨蛹虫草连续传代培养后线粒体的遗传稳定性。从已知线粒体基因组的蛹虫草菌株中扩增线粒体内含子位点,将扩增产物混合并制作出两套DNA分子量标准,即在8个内含子位点分别具有内含子的8条扩增条带组成的M-I和在6个内含子位点分别缺失内含子的6条扩增条带组成的M-II。从待检测的蛹虫草菌株（包括3个已知和2个未知线粒体基因组的菌株）中扩增同样的（假定）内含子位点,然后通过琼脂糖凝胶电泳分别与制备好的两个DNA分子量标准进行比较,能够准确判断蛹虫草菌株的线粒体内含子分布模式,从而验证了所构建的线粒体基因型快速检测体系的有效性。选择10个蛹虫草组织分离菌株和8个单分生孢子菌株连续转接培养15代,没有发现线粒体内含子分布模式发生改变。本研究成功构建了快速检测蛹虫草线粒体基因型的技术体系,并发现蛹虫草线粒体具有很高的遗传稳定性,为开展蛹虫草线粒体遗传规律的研究奠定了基础。     

POSSUM、P-POSSUM 和APACHE-Ⅱ评分对肝门部胆管癌手术后 住院死亡风险评估的对比研究

目的:通过利用POSSUM、P-POSSUM和APACHE-Ⅱ评分对我院行手术治疗的肝门部胆管癌病例的术后住院死亡率的预测进行预测,评价各评分的预测能力,为肝门部胆管癌术后死亡风险寻求有效的评估方法。方法:收集了2002年1月～2007年12月期间在东方肝胆外科医院接受手术治疗的348例肝门部胆管癌的病例资料,统计其手术后的住院死亡率;统计学方法:所有的数据通过SPSS15.0 for windows、Medcalc9.2.10 for windows进行分析处理,计量资料经t检验、计数资料以x2检验和Z检验,P<0.05为有统计学意义;O:E值和ROC曲线用来评价评分方法的判别能力。结果:348例患者的术后有6例发生住院期间死亡,死亡率为1.7%,POSSUM评分预测的住院死亡率为9.3%(33例),两者之间的差异有统计学意义(x2=19.80,df=1,P<0.01);P-POSSUM评分预测的住院死亡率2.8%(10例),两者之间的差异无统计学意义(x2=1.02,df=1,P>0.05);APACHE-Ⅱ评分预测的住院死亡率9.2%(32例),两者之间的差异有统计学意义(x2=18.82,df=1,P<0.01)。POSSUM、P-POSSUM和APACHE-Ⅱ评分对应的ROC曲线下面积分别为0.759、0741和0.608。结论:P-POSSUM评分能很好的预测肝门部胆管癌手术的术后住院死亡率,POSSUM和APACHE-Ⅱ评分不能准确的预测,明显高估了术后死亡风险。     

蛹虫草线粒体DNA与细胞核DNA进化关系的比较

【目的】分析蛹虫草是否存在核内线粒体DNA片段,比较蛹虫草线粒体DNA与细胞核DNA的碱基变异程度及所反映的菌株间的系统发育关系。【方法】通过本地BLAST或LAST对蛹虫草线粒体基因组和核基因组进行序列相似性搜索;从10个已知线粒体基因组的蛹虫草菌株中分别扩增7个细胞核蛋白编码基因片段,并与其在14个线粒体蛋白编码基因上的碱基变异情况进行比较。【结果】蛹虫草核基因组中存在5处较短的核内线粒体DNA片段,总长只有278bp。蛹虫草核DNA的变异频率整体上高于线粒体DNA。核DNA和线粒体DNA所反映的蛹虫草菌株间的系统发育关系存在显著差异。【结论】蛹虫草线粒体DNA与核DNA间不存在长片段的基因交流,二者变异频率不同,所反映的蛹虫草菌株间的系统发育关系也有差异。本研究增加了对蛹虫草线粒体与细胞核DNA进化关系的认识。     

异甘草酸镁对胆道梗阻致肝损伤肝功能保护作用的动物实验研究

目的:探讨异甘草酸镁注射液对大鼠梗阻性黄疸肝损伤的保护作用。方法:选用健康雄性SD大鼠32只,随机分成4组,每组各8只,分别为胆总管结扎+异甘草酸镁注射液常规剂量组(BMc组);胆总管结扎+异甘草酸镁注射液高剂量组(BMh组);胆总管结扎+0.9%生理盐水注射液组(BN组)和假手术组(Sham组)。BN和Sham组以生理盐水30 mg/kg/日腹腔注射,BMc组以异甘草酸镁30 mg/kg/日腹腔注射,BMh组以异甘草酸镁60 mg/kg/日腹腔注射。术后不同时间对各组大鼠眼眶取血并获得血清。在全自动生化分析仪器检测肝功能指标:丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、直接胆红素(Direct bilirubin,DBil)。结果:BN、BMc和BMh组大鼠在胆管结扎后血清中ALT和AST指标明显升高。随着梗阻时间的增加,BM和BMh组大鼠血清中ALT和AST的水平均明显低于BN组(P0.01),但两组之间并无明显区别。手术后BN、BMc和BMh组大鼠在胆管结扎后血清中D-Bil水平明显高于Sham组(P0.01),但随着梗阻时间的延长,各组间D-Bil的水平变化不明显。结论:异甘草酸镁注射液可以有效降低梗阻性黄疸大鼠血清转氨酶水平,对肝功能有明显的保护作用。     

五红汤对小鼠抗氧化作用的初步研究

文章主要研究五红汤的抗氧化、缓解焦虑、补气补血功效。采用小鼠分组，按相应剂量灌胃五红汤饲养30 d的研究方法。通过灌胃50%乙醇溶液建立氧化损伤模型，与灌胃五红汤后还原性谷胱甘肽（GSH）含量、蛋白质羰基（PCO）含量对比，验证五红汤的抗氧化能力；幽闭小鼠建立焦虑模型，对比糖水偏好、强迫游泳时间及出凝血时间，验证五红汤的抗焦虑功效及补气补血作用。因此得到实验结果如下：（1）GSH含量：五红汤可提高小鼠体内的GSH含量；（2）糖水偏好：五红汤有升高小鼠糖水偏好的趋势；（3）强迫游泳时间：五红汤可缩短小鼠抑郁后行为绝望的时间；（4）出血时间、凝血时间测定：五红汤可缩短小鼠出凝血时间；（5）PCO含量：五红汤可降低PCO含量。最终可得到以下实验结论：五红汤可提高小鼠抗氧化、缓解焦虑和补气养血能力。