大肠杆菌tRNASec关键核苷酸位点

在原核生物中,硒蛋白合成需要tRNA~(Sec) (SelC)与硒代半胱氨酸合成(Sec synthase, SelA)、硒代半胱氨酸特异性延伸因子(Sec-specificelongationfactor,SelB)之间相互作用。【目的】基于大肠杆菌掺硒机器,寻找tRNA~(Sec)骨架上关键核苷酸位点,为解决硒蛋白目前面临的掺硒效率较低、产量低的问题提供新思路。【方法】以大鼠细胞质型硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase1,TrxR1)为掺硒模式蛋白为定点突变tRNA~(Sec),转化至BL21 (DE3) gor-获得阳性重组菌株(携带pET-TRSter/pSUABC’),用于表达大鼠硒蛋白TrxR1,然后使用2￠,5￠ADP-Sepharose亲和层析和凝胶过滤两步法分离纯化TrxR1,最后利用经典硒依赖型DTNB还原反应测定TrxR1的酶活,分析关键核苷酸位点,评价掺硒效率。【结果】在存在SECIS元件的前提下,当SelA、SelB、tRNA~(Sec)共表达时,与野生型相比,携带突变型tRNA~(Sec)所共表达的TrxR1酶活力呈现不同程度的降低,其中E.colitRNA~(Sec)的G18、G19这两个位点的所有的TrxR1酶活远低于野生型(10%);然而,a26和b7的酶活相对较高。【结论】E. coli tRNA~(Sec)骨架上G18和G19位点对于维持tRNA稳定性和灵活性发挥了关键作用,位点突变引起tRNA结构变化会影响tRNA~(Sec)与掺硒元件的互作,因此有望通过改造tRNA核苷酸位点来提高硒蛋白的掺硒效率。     

限制性内切酶NotⅠ提纯的新工艺

目前有关限制性内切酶NotⅠ的性质特征及功能机制等方面的研究日渐增多,但商品化NotⅠ及某些限制性内切酶的价格依然居高不下,其主要原因在于表达量低、提纯程序繁琐、得率低等问题的存在。为探索限制性内切酶NotⅠ提纯的新工艺,从豚鼠耳炎诺卡菌(Nocardia otitidis-caviarum)中克隆出限制性内切酶NotⅠ的基因并使之在大肠杆菌中高效表达。首先将由成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)中克隆所得甲基化酶EagⅠM(EagⅠ methylase gene)基因连接到pBR322载体上,转化大肠杆菌ER2566,将豚鼠耳炎诺卡菌中克隆所得的限制性内切酶NotⅠR(NotⅠrestriction endonuclease gene)基因连接到表达载体pACYC184-PT₇上,将此重组质粒转化到上述已转入甲基化重组质粒pBR322-EagⅠM的ER2566中,构建成NotⅠ蛋白表达菌ER2566 。重组工程菌经IPTG诱导可表达限制性内切酶NotⅠ,并对诱导条件进行优化使之以可溶形式高效表达。应用KTA purifier 100蛋白纯化系统,对纯化工艺进行创新,通过DEAE Sephrose FF离子交换层析、phenyl HP疏水层析和Superdex 75 10/300 GL分子筛层析对蛋白进行提纯。纯化后NotⅠ经酶活力及纯度鉴定,其比活力为1.37×10⁶U/mg,提纯35倍,得率为17.8％,产量达9.8×10⁶ Units /g wet cell,提纯时间缩减为原来的1/10,在产量和效率上较以前报道均有很大提高。该纯化工艺的新方法,为实验室制备及工业化生产Ⅱ型限制性内切酶提供了进一步的借鉴。且该酶的成功获得为后续研究提供了材料,为更多新发现内切酶的成功克隆提供了参考。     

拮抗链霉菌S24抗菌物质的提取及其部分理化性质

拮抗链霉菌S24对黄曲霉、赭曲霉、黑曲霉等粮食和饲料中常见的曲霉菌具有广谱抗性,本试验通过牛津杯法测定抗菌物质的效价,研究了大孔吸附树脂对链霉菌S24产生的抗菌物质的吸附、解吸性能,筛选了解吸剂,并研究了抗菌物质的部分理化性质。结果表明,大孔吸附树脂AB-8对抗菌物质的吸附及解吸性能最好,其饱和吸附量为7.0822×104μg/g,最佳解吸剂为85%丙酮,以85%丙酮进行动态解吸,解吸率达93.82%。该抗菌物质对热稳定,对紫外线敏感,对有机溶剂不敏感,对酸敏感,对碱稳定,紫外全波长扫描发现该抗菌物质为多烯大环内酯类抗生素。     

樟子松和落叶松径向生长对气候变化的响应

在全球变暖的背景下,升温可能会影响树木的生长,导致森林生态系统的平衡受到干扰。本研究利用树轮年代学方法中的生长-气候响应函数、滑动相关分析,探讨大兴安岭漠河地区樟子松和落叶松径向生长的限制因子,以及二者径向生长对快速升温的响应。结果表明: 樟子松和落叶松的径向生长受温度和降水的共同作用,樟子松对气候变化的响应比落叶松更为敏感,对气候因子的敏感性比落叶松更稳定。樟子松径向生长与当年生长季月均温及月均最低温呈显著正相关,而落叶松与冬季月均温及月均最高温呈显著正相关。冬季降水促进樟子松生长,前一年生长季后期降水抑制落叶松的径向生长。1990年快速升温后,降水对樟子松的限制作用由升温前的负相关转变为升温后的显著正相关,高温对樟子松的抑制作用大于促进作用;高温对落叶松的抑制作用增强,降水对落叶松的限制作用也在升温后增强,生长速率显著下降,二者生长速率与温度和降水的相关性变化存在明显差异。本研究可为大兴安岭森林生态系统管理与保护提供科学依据。     

鹅膏菌中毒小鼠解毒药物的筛选

考察了几种中药对鳞柄白鹅膏中毒小鼠的解毒作用。鳞柄白鹅膏为极毒真菌,当其干燥子实体水溶液质量浓度>10mg/mL时,小鼠全部死亡,质量浓度为10mg/mL时,小鼠在9 h内全部死亡,选择这一浓度使小鼠中毒,使用所选中药对小鼠进行解毒试验。结果表明:水飞蓟(7.8 g/kg)、绿豆(3.9 g/kg)及甘草(1.3 g/kg)均能延迟小鼠的死亡时间,但与对照组相比差异不显著。灵芝(1.95 g/kg)对小鼠的死亡时间有明显的延迟作用,并与对照组相比差异显著(P<0.05)。同时使用灵芝剂量为首次解毒试验剂量的100倍水煎液(195 g/kg)和300倍水煎液(585 g/kg),以及按原料剂量为195 g/kg提取其中三萜及多糖用于对鹅膏中毒小鼠的解毒试验。结果表明:试验组小鼠的死亡时间均有延迟,其中195 g/kg剂量灵芝组和灵芝三萜试验组与对照组相比差异显著(P<0.05)。     

浅谈高中物理概念教学

物理概念是物理知识的最重要、最基础的组成部分,也是认识物理规律、构建物理公式、完善物理理论的基础和前提。物理概念的抽象性及高中生认知结构中的一些缺陷,构成了学生学习物理的障碍。因此,搞好高中物理课程的概念教学工作,充分发展学生的认识能力,是高中物理教学工作的重要任务[1]。     

胞膜窖与钾离子通道

胞膜窖（caveolae）是细胞质膜内陷形成的凹陷小窝,参与细胞内多种重要的生理活动的调节.近年研究表明,电压门控钾离子通道、钙离子 激活的电压门控钾离子通道和ATP敏感的钾离子通道等多种钾离子通道家族 成员的功能调节与胞膜窖有关.本文概括介绍了胞膜窖和钾离子通道调节关系的研究进展．     

蓝藻对UV-B增强的响应及其紫外屏蔽物质的研究

紫外线辐射对生物体危害日趋严重,逐渐引起了人们的重视.由于蓝藻在生物进化中的特殊性和在生态系统中的重要性,用于研究UV-B对生物体的影响具有诸多优势,目前国内关于UV-B对蓝藻的影响相关报道较少.本文介绍了近年来国外该领域的相关研究,主要包括UV-B对蓝藻生物量、生理效应,特别是光合作用等方面的影响,同时着重介绍了蓝藻中的紫外吸收物质的研究现状,并进一步探讨了其应用情况.     

枳实提取物及其药效组分对OX—LDL损伤的人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达和NO释放的影响

目的：研究枳实提取物及其药效组分橙皮苷和新橙皮苷对氧化低密度脂蛋白（oxidized lowd ensity lipoprotein,Ox—LDL）损伤的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells line,HUVEC）细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）表达和一氧化氮（nitric oxide,NO）释放的影响。方法：体外培养HUVEC,50μg／mLOX—LDL制造HUVEC损伤模型。以MTS染色法检测细胞毒性确定用药浓度。细胞ELISA法测定细胞表面ICAM-1的含量,试剂盒测定细胞培养上清液中NO含量。结果：①枳实提取物小于等于2mg／mL时,橙皮苷浓度小于等于0．03125mg／mL时,新橙皮苷浓度小于等于0．25mg／mL时,HUVEC存活率分别大于80％。②2．0mg／mL和1．0mg／mL两个浓度的枳实提取物、15．625μg／mL的橙皮苷和0．2500mg／mL新橙皮苷对OX—LDL诱导的HUVEC的ICAM-1表达有显著抑制作用。③2．0mg／mL枳实提取物显著提高OX—LDL诱导的HUVEC和正常HUVEC培养液中的NO含量;7．813ixg／mL、15．625μg／mL和31．250μg／mL 3个浓度的橙皮苷能显著提高OX—LDL诱导的HUVEC培养液中的NO含量,31．250μg／mL的橙皮苷能促进正常HUVEC的NO释放;0．2500mg／mL和0．1250mg／mL 2个浓度的新橙皮苷能显著提高OX—LDL诱导的HUVEC培养液中的NO含量。结论：枳实提取物及其药效组分橙皮苷、新橙皮苷能抑制Ox-LDL诱导的HUVEC的ICAM-1表达,促进Ox-LDL诱导的HUVEC的NO释放。     

短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)对鲤鱼养殖水质及其生长特性的影响

试验共设单因素4 水平, 分别对应水体中含0 mL、20 mL、60 mL、100 mL4 种体积短短芽孢杆菌的试验组。通过测定养殖水体COD、NH4+-N、DO、pH 等指标, 鲤鱼生长性能及消化酶活性等指标, 研究短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)对鲤鱼养殖水体水质及鲤鱼生长特性的影响。结果显示, 短短芽孢杆菌能有效降低养殖水体中COD 和NH4 +-N 浓度(P<0.05), 维持DO 在较高水平(P<0.05), 保持pH 稳定, 改善养殖水质。试验组中鲤鱼的肥满度、增重率及特定生长率与对照组相比均显著提高(P<0.05), 鲤鱼肠道蛋白酶、淀粉酶和肝胰脏淀粉酶活性与对照组相比显著升高(P<0.05)。