哺乳动物卵母细胞的DNA损伤与修复研究进展

DNA损伤是影响配子发生和胚胎发育的关键因素之一。卵母细胞容易被各种内外源因素(如活性氧、辐射、化疗药物等)诱发DNA损伤。目前研究发现,对于各类DNA损伤,各发育阶段的卵母细胞能够做出相应的DNA损伤反应,通过复杂的机制对DNA进行修复或者启动细胞凋亡。相比于进入生长阶段的卵母细胞,原始卵泡卵母细胞更容易被DNA损伤诱导凋亡。DNA损伤不易诱导卵母细胞减数分裂成熟进程停滞,然而携带DNA损伤的卵母细胞的发育能力明显下降。在临床上,衰老、放疗和化疗是导致女性卵母细胞DNA损伤、卵巢储备降低和不孕的常见原因。为此,人们尝试了能够减轻卵母细胞DNA损伤和增强DNA修复能力的多种方法,试图保护卵母细胞。本文对哺乳动物的各发育阶段卵母细胞的DNA损伤与修复的相关研究进行了梳理和总结,并讨论了其潜在的临床价值,以期为生育力保护提供新的策略。     

微量元素五项联合红细胞四项检测在小儿缺铁性贫血中的诊断价值

目的:探讨微量元素五项联合红细胞四项检测在小儿缺铁性贫血(IDA)中的诊断价值。方法:选取2013年1月至2016年1月于我院进行治疗的小儿缺铁性贫血(IDA)患儿130例作为缺铁性贫血(IDA)组及同期于我院进行常规体检的健康儿童40例作为对照组。检测和比较其钙、镁、铜、铁、锌、血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)水平,并比较微量元素五项、红细胞四项检查以及两者联合对IDA患儿的诊断效能。结果:缺铁性贫血(IDA)组患儿微量元素镁、铁、锌含量以及Hb、MCV、MCH及MCHC水平均明显低于对照组儿童,差异具有统计学意义(P0.05);两组儿童微量元素钙、铜含量比较差异不显著(P0.05)。微量元素五项联合红细胞四项的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值均明显高于微量元素五项和红细胞四项(P0.05)。结论:IDA患儿微量元素镁、铁、锌含量以及Hb、MCV、MCH及MCHC水平较低,微量元素五项联合红细胞四项检测可以提高小儿IDA的检出率。     

白桦树羽扇豆烷型三萜类化合物与抑制PTP1B活性研究

蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(Protein tyrosine phosphatase1B;PTP1B)在胰岛素信号传递过程中起负调控作用,亦是研究治疗2型糖尿病的重要靶点。利用PTP1B生物活性导向分离方法,从白桦树皮的正己烷提取物中分离得到7个羽扇豆烷型三萜类化合物。经过光谱分析和文献比较,确定分离得到的7个化合物为:羽扇烯酮(1),羽扇豆醇(2),桦木酸(3),白桦脂醛(4),白桦脂酸(5),算盘子酮醇(6)和白桦脂醇(7)。其有效抑制PTP1B活性值(IC50)分别为:5.6±0.3μmol/L,4.1±0.2μmol/L,7.2±0.3μmol/L,12.6±0.4μmol/L,11.6±0.3μmol/L,9.6±0.4μmol/L和13.6±0.5μmol/L。     

Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌中的表达及其临床意义

目的：研究Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法：用免疫组织化学法检测134例正常前列腺、良性前列腺增生和前列腺腺癌石蜡包埋组织中Cox-2、P504s、CK34βE12和P63的表达。结果：正常前列腺组织或良性前列腺增生组织未见或偶见P504s弱表达,但CK34βE12和P63均表达良好;前列腺腺癌组织中P504s表达良好,但CK34βE12和P63均表达消失,P504s表达阳性率为91．07％;与正常前列腺组和良性前列腺增生组相比,前列腺癌组的P504s阳性表达率存在显著性差异（p=0．001）。COX-2在正常的前列腺组织几乎不表达,而良性前列腺增生组织及前列腺腺癌组织均可见阳性表达,阳性率分别为4．76％和80．36％;COX．2阳性表达率在正常前列腺组或良性前列腺增生组和前列腺腺癌组间有显著性差异（p=0．0027）。COX-2与P504s表达存在相关性（r=0．377,P=0．039）;COX-2的表达与年龄、临床分期、分化程度、有无远处转移等临床病理特征间无明显相关关系。结论：联合P504s、P63、CK3413E12和COX-2免疫组化检测可提高前列腺腺癌病理诊断的准确率。     

拮抗链霉菌S24抗菌物质的提取及其部分理化性质

拮抗链霉菌S24对黄曲霉、赭曲霉、黑曲霉等粮食和饲料中常见的曲霉菌具有广谱抗性,本试验通过牛津杯法测定抗菌物质的效价,研究了大孔吸附树脂对链霉菌S24产生的抗菌物质的吸附、解吸性能,筛选了解吸剂,并研究了抗菌物质的部分理化性质。结果表明,大孔吸附树脂AB-8对抗菌物质的吸附及解吸性能最好,其饱和吸附量为7.0822×104μg/g,最佳解吸剂为85%丙酮,以85%丙酮进行动态解吸,解吸率达93.82%。该抗菌物质对热稳定,对紫外线敏感,对有机溶剂不敏感,对酸敏感,对碱稳定,紫外全波长扫描发现该抗菌物质为多烯大环内酯类抗生素。     

大肠杆菌tRNASec关键核苷酸位点

在原核生物中,硒蛋白合成需要tRNA~(Sec) (SelC)与硒代半胱氨酸合成(Sec synthase, SelA)、硒代半胱氨酸特异性延伸因子(Sec-specificelongationfactor,SelB)之间相互作用。【目的】基于大肠杆菌掺硒机器,寻找tRNA~(Sec)骨架上关键核苷酸位点,为解决硒蛋白目前面临的掺硒效率较低、产量低的问题提供新思路。【方法】以大鼠细胞质型硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase1,TrxR1)为掺硒模式蛋白为定点突变tRNA~(Sec),转化至BL21 (DE3) gor-获得阳性重组菌株(携带pET-TRSter/pSUABC’),用于表达大鼠硒蛋白TrxR1,然后使用2￠,5￠ADP-Sepharose亲和层析和凝胶过滤两步法分离纯化TrxR1,最后利用经典硒依赖型DTNB还原反应测定TrxR1的酶活,分析关键核苷酸位点,评价掺硒效率。【结果】在存在SECIS元件的前提下,当SelA、SelB、tRNA~(Sec)共表达时,与野生型相比,携带突变型tRNA~(Sec)所共表达的TrxR1酶活力呈现不同程度的降低,其中E.colitRNA~(Sec)的G18、G19这两个位点的所有的TrxR1酶活远低于野生型(10%);然而,a26和b7的酶活相对较高。【结论】E. coli tRNA~(Sec)骨架上G18和G19位点对于维持tRNA稳定性和灵活性发挥了关键作用,位点突变引起tRNA结构变化会影响tRNA~(Sec)与掺硒元件的互作,因此有望通过改造tRNA核苷酸位点来提高硒蛋白的掺硒效率。     

樟子松和落叶松径向生长对气候变化的响应

在全球变暖的背景下,升温可能会影响树木的生长,导致森林生态系统的平衡受到干扰。本研究利用树轮年代学方法中的生长-气候响应函数、滑动相关分析,探讨大兴安岭漠河地区樟子松和落叶松径向生长的限制因子,以及二者径向生长对快速升温的响应。结果表明: 樟子松和落叶松的径向生长受温度和降水的共同作用,樟子松对气候变化的响应比落叶松更为敏感,对气候因子的敏感性比落叶松更稳定。樟子松径向生长与当年生长季月均温及月均最低温呈显著正相关,而落叶松与冬季月均温及月均最高温呈显著正相关。冬季降水促进樟子松生长,前一年生长季后期降水抑制落叶松的径向生长。1990年快速升温后,降水对樟子松的限制作用由升温前的负相关转变为升温后的显著正相关,高温对樟子松的抑制作用大于促进作用;高温对落叶松的抑制作用增强,降水对落叶松的限制作用也在升温后增强,生长速率显著下降,二者生长速率与温度和降水的相关性变化存在明显差异。本研究可为大兴安岭森林生态系统管理与保护提供科学依据。     

鹅膏菌中毒小鼠解毒药物的筛选

考察了几种中药对鳞柄白鹅膏中毒小鼠的解毒作用。鳞柄白鹅膏为极毒真菌,当其干燥子实体水溶液质量浓度>10mg/mL时,小鼠全部死亡,质量浓度为10mg/mL时,小鼠在9 h内全部死亡,选择这一浓度使小鼠中毒,使用所选中药对小鼠进行解毒试验。结果表明:水飞蓟(7.8 g/kg)、绿豆(3.9 g/kg)及甘草(1.3 g/kg)均能延迟小鼠的死亡时间,但与对照组相比差异不显著。灵芝(1.95 g/kg)对小鼠的死亡时间有明显的延迟作用,并与对照组相比差异显著(P<0.05)。同时使用灵芝剂量为首次解毒试验剂量的100倍水煎液(195 g/kg)和300倍水煎液(585 g/kg),以及按原料剂量为195 g/kg提取其中三萜及多糖用于对鹅膏中毒小鼠的解毒试验。结果表明:试验组小鼠的死亡时间均有延迟,其中195 g/kg剂量灵芝组和灵芝三萜试验组与对照组相比差异显著(P<0.05)。     

浅谈高中物理概念教学

物理概念是物理知识的最重要、最基础的组成部分,也是认识物理规律、构建物理公式、完善物理理论的基础和前提。物理概念的抽象性及高中生认知结构中的一些缺陷,构成了学生学习物理的障碍。因此,搞好高中物理课程的概念教学工作,充分发展学生的认识能力,是高中物理教学工作的重要任务[1]。     

限制性内切酶NotⅠ提纯的新工艺

目前有关限制性内切酶NotⅠ的性质特征及功能机制等方面的研究日渐增多,但商品化NotⅠ及某些限制性内切酶的价格依然居高不下,其主要原因在于表达量低、提纯程序繁琐、得率低等问题的存在。为探索限制性内切酶NotⅠ提纯的新工艺,从豚鼠耳炎诺卡菌(Nocardia otitidis-caviarum)中克隆出限制性内切酶NotⅠ的基因并使之在大肠杆菌中高效表达。首先将由成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)中克隆所得甲基化酶EagⅠM(EagⅠ methylase gene)基因连接到pBR322载体上,转化大肠杆菌ER2566,将豚鼠耳炎诺卡菌中克隆所得的限制性内切酶NotⅠR(NotⅠrestriction endonuclease gene)基因连接到表达载体pACYC184-PT₇上,将此重组质粒转化到上述已转入甲基化重组质粒pBR322-EagⅠM的ER2566中,构建成NotⅠ蛋白表达菌ER2566 。重组工程菌经IPTG诱导可表达限制性内切酶NotⅠ,并对诱导条件进行优化使之以可溶形式高效表达。应用KTA purifier 100蛋白纯化系统,对纯化工艺进行创新,通过DEAE Sephrose FF离子交换层析、phenyl HP疏水层析和Superdex 75 10/300 GL分子筛层析对蛋白进行提纯。纯化后NotⅠ经酶活力及纯度鉴定,其比活力为1.37×10⁶U/mg,提纯35倍,得率为17.8％,产量达9.8×10⁶ Units /g wet cell,提纯时间缩减为原来的1/10,在产量和效率上较以前报道均有很大提高。该纯化工艺的新方法,为实验室制备及工业化生产Ⅱ型限制性内切酶提供了进一步的借鉴。且该酶的成功获得为后续研究提供了材料,为更多新发现内切酶的成功克隆提供了参考。