白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19、VP28的融合表达及中和抗体的制备

根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp19和vp28的序列,设计并合成两对引物,PCR扩增得到vp19和vp28两基因,大小分别为370bp和630bp。通过EcoRI位点连接两基因,再按正确的阅读框插入表达载体pET-22b( )中,构建出重组表达载体pET-vp(19 28)并转化大肠杆菌BL21(DE3)。基因工程菌株35℃IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE检测显示有与预期大小41kDa相吻合的融合蛋白带。用Ni^2 -柱纯化的基因工程蛋白免疫新西兰大白兔制备抗血清,进行螯虾活体中和病毒实验,结果表明抗血清对WSSV的中和效率达到了100％。     

过氧化物酶体增殖物激活受体与细胞凋亡调控

利用核受体与配体作用促进癌细胞分化和凋亡是治疗癌症的新方向。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是一类参与多种生物学效应的核受体,目前已知有3种亚型：α、β和γ。PPARs除和脂质代谢、氧化还原状态、炎症、心血管疾病、糖尿病、肥胖等一系列生理过程密切相关外,PPARs的激活还对细胞的生长、分化甚至凋亡有重要的影响,尤其是PPARγ的激活在多种恶性肿瘤细胞中可促进细胞凋亡、抑制肿瘤生长。然而由于PPARs的表达具有极大的物种、组织特异性,使预临床实验的推广应用变得十分复杂。现仅就PPARs与细胞凋亡方面的最新研究进展及其在癌症预临床中的研究状况进行综述。     

甘薯块根特异蛋白——Sporamin的研究进展

Sporamin是在甘薯块根中特异表达的一类特殊贮藏蛋白,它不仅具有一般贮藏蛋白的特性,而且还具有胰蛋白酶抑制剂的活性,并与甘薯块根的形成过程密切相关。本文就近年来对该块根特异蛋白的特性和功能,以及在分子生物学水平上的研究进展进行了综述。     

恶疫霉有性杂交后代的竞争能力研究

5株杂交个体（携带对甲霜灵和地茂散的抗性标记）的游动孢子分别与其野生型亲本AP14和PK9（对甲霜灵和地茂散均敏感）按1：1、1：9和1：49比例混合涂布在10％V6培养基平板上或接种在苹果片上生长4－5d,并诱导产生孢子囊和释放游动孢子,经单孢分离建立单孢无性系,在含甲霜灵或地茂散的培养基上检测杂交个体的单孢后代所占的百分率。结果是,在V6培养基平板上混合生长的30个组合中,仅3个组合杂交个体的单孢后代在其单孢无性系群体中所占的比例显著低于野生型亲本,其余组合均符合其各自的期望值;在苹果片上混合接种的30个组合,杂交个体与野生型亲本的单孢后代所占比例均符合其各自的期望值。进一步测定2个杂交个体（APK－9和APK－24）分别与其野生型亲本以1：1的比例混合后在V6培养基平板上和苹果片上连续3个产孢循环过程中两者比例的变化,结果是,在杂交 个体与野生型亲本AP14的组合中,杂交个体的后代所占的百分率由第一个产孢循环的49．1％－54．2％至第三个产孢循环下降为1．8％－6．2％;而在与另一野生型亲本PK9的组合中,杂交个体的后代所占的百分率从第一个产孢循环的44．4％－54．2％至第3个产孢循环上升为72．1％－75．0％。上述结果表明恶疫霉有性杂交个体在离体和活体上均有较强的竞争能力,提示有性杂交对其生物多样性的产生可能具有重要作用。     

胰酶对皮肤角质细胞分离和传代的影响

考察不同的胰酶浓度及其作用时间对角质细胞分离和传代的影响。实验发现在胰酶浓度 0.25%时作用5min可获得的总活细胞量和有克隆形成能力的细胞量均优于其它培养条件 ;而在胰酶浓度0.05%时作用 5min可获得最大的原代角质细胞贴壁率。随着胰酶浓度的提高 ,传代角质细胞的贴壁率和贴壁速率常数以及克隆形成率均随之增加 ,因此在传代培养时使用 0.25%胰酶浓度进行消化较为适宜.     

可用于微生物群落分子生态学研究的活性污泥总DNA提取方法研究

活性污泥样品经液氮速冻、沸水浴融化、溶菌酶处理和 SDS裂解后 ,99%以上细胞裂解。所提取的 DNA经琼脂糖凝胶电泳检测和荧光法浓度测定 ,其片断大小在 2 0 kb左右 ,产量可达 1 .75 6± 0 .1 mg/g MLSS。样品 ABS2 6 0 nm/ABS2 80 nm的比值为 1 .96± 0 .2。以提取的总 DNA为模板 ,进行细菌核糖体小亚基 1 6Sr DNA基因 V3区和多组分苯酚羟化酶大亚基基因 (Lm PHs)的 PCR扩增 ,均获得成功 ,为活性污泥中微生物群落的分子生态学研究提供了一种简便、可靠的 DNA提取方法。     

结核分枝杆菌的后基因组研究和新型疫苗

结核病仍然是全球人类健康的威胁。全球人口的 1 /3(约 2 0亿人 )感染过结核分枝杆菌 ,每年 30 0万人死于结核病 ,死于结核病的人数是其他传染病死亡人数的总和[8] ,因此 ,世界卫生组织在 1 993年和1 997年两度发出警告。去年 3月 ,我国卫生部的专家也宣布中国进入结核病的紧急状态 ,中国是除印度外的世界第二大结核病重灾区 ,如果不予以足够的重视 ,采取切实可行的措施 ,结核病将严重影响我国的现代化进程。造成结核病重新在世界抬头的原因很多 ,除了社会经济的因素外 ,结核分枝杆菌的耐药性和当前唯一可用的疫苗 卡介苗ＢＣＧ的免疫效果下…     

人NK细胞对猪/人血管内皮细胞的差异粘附

采用^51Cr标记法和^3H-TdR摄入法研究了人外周血NK细胞（PBNK）和人NK细胞系－－NK92对猪主动脉内皮细胞（PAEC）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的粘附作用。结果表明,NK92和PBNK对PAEC的粘附率显著高于对HUVEC的粘附率;rhTNF－α预刺激PAEC／HUVEC后,PBNK的粘附率呈现TNF－α剂量依赖性的增高;rhIFN－γ预刺激NK92／PBNK后,两者对PAEC粘附率的增幅均高于对HUVEC的增幅;CD11a（LFA－1）单抗可以以不同程度地抑制PBNK对静息和TNF－α激活的PAEC的粘附作用。这些结果显示,NK细胞在细胞介导的异种移植排斥反应中起重要作用。