小伞山羊草中新型avenin-like基因的克隆及真核表达载体的构建

目的：克隆小伞山羊草中新型avenin-like（类燕麦储藏蛋白）基因,揭示avenin-like基因的表达模式,并构建avenin-like基因真核胚乳特异性表达载体。方法：利用RT-PCR方法揭示avenin-like基因的表达模式,并用PCR方法从小伞山羊草中克隆新型avenin-like基因;将克隆的avenin-like基因插入表达载体pLRPT构建真核表达载体pLRPT-avel,并经酶切和测序鉴定。结果：avenin-like基因在胚乳中特异性表达;克隆得到新型avenin-like基因,并构建了其真核胚乳特异性表达载体。结论：新型avenin-like基因的克隆及其真核表达载体的构建,为小麦品质改良提供了研究基础。     

人IFNα具有镇痛作用并与阿片受体有关

人ＩＦＮα具有镇痛作用并与阿片受体有关朱千政张笑冰王晶张汝丽侯云德（中国预防医学科学院病毒学研究所,北京１０００５２）神经内分泌系统和免疫系统间具有广泛的相互调节作用,干扰素是第一个观察到具有激素作用的细胞因子,１９８１年Ｂｌａｌｏｃｋ等发现人白细胞...     

解脂假丝酵母对重金属工业废水的吸附特性

利用解脂假丝酵母对Cr(Ⅵ)、Ni(Ⅱ)和Cu(Ⅱ)共存的模拟重金属废水及3种实际重金属废水进行了微生物吸附,结果表明,pH、吸附时间和菌浓度等均是显著的影响因素.Cr(Ⅵ)、Ni(Ⅱ)和Cu(Ⅱ)的去除均符合准一级和准二级动力学模型,其中准二级模型的拟合效果最理想,证明该菌种对重金属的吸附包括了多个步骤,其中化学吸附是限速步骤.解脂假丝酵母对共存重金属的生物吸附效果理想,1g·L^-1菌体在120min时,对18.7～37.86mg·L^-1Cr、2.39～9.21mg·L^-1Cu、2.27～9.87mg·L^-1Ni和0.43～1.32mg·L^-1Zn的去除率分别为81.6%～84.6%、84.0%～100%、84.1%～100%和93.9%～100%.菌体的蛋白质、脂质和多糖均参与了重金属吸附,起作用的主要功能团是-OH、-NH₂、-CH₂、-CH₃、-COOH、-CHO、C=C、-PO₄^3-和-SO₃H.     

胎羊缺氧模型的血流动力学改变

目的和方法：健康妊娠绵羊７只,体重２０～３０ｋｇ。于妊娠１１６～１２５ｄ行胎儿外科手术。经胎儿股动脉插管引出腹主动脉血压,放置脐动脉电磁流量计探头记录血流信号。术后恢复１ｈ。从胎儿动脉导管注入明胶微球悬浮液（≈５０μｍ）造成胎盘微血管阻塞,每隔１５～２０ｍｉｎ注射一次,构成胎儿缺氧动物模型。采集胎儿动脉血样。分析ｐＨ、ＰａＣＯ２和ＰａＯ２值。分析脐动脉输入阻抗。结果：１、外周阻力Ｒ与血管阻塞程度呈指数关系（ｒ＝０．９７,Ｐ＜０．００１）,但脐动脉特征阻抗基本不变;２、胎儿动脉血氧分压随血管阻塞程度增加而下降（ｒ＝０．８７,Ｐ＜０．００１）;ｐＨ值随血管阻塞程度的增加而减小（ｒ＝０．８５,Ｐ＜０．０１）;二氧化碳分压随血管阻塞程度增加而上升（ｒ＝０．７１,Ｐ＜０．０５）;３、脐动脉血流量与外周阻力呈幂函数关系（ｒ＝０．９９,Ｐ＜０．００１）。结论：本工作为研究胎儿窘迫的病理生理机制提供了成功的动物模型     

齐墩果醇-龙胆三糖苷雌激素样作用及其对肝癌HepG2细胞增殖的影响

肝癌目前已经成为世界第三大癌症,临床数据显示雌激素及其受体与肝癌关系密切.苯并呋喃类化合物有报道具有雌激素样作用.所以,作为苯并呋喃的一种,研究齐墩果醇-龙胆三糖苷雌激素样作用及其对HepG2细胞增殖的影响显得尤为重要.在瞬时转染有ERE(雌激素作用元件)报告基因的HepG2中,齐墩果醇-龙胆三糖苷显示了同17β-雌二醇一样激活ERE报告基因的作用;而在瞬时转染有CRE(cAMP 作用元件)报告基因的HepG2中,齐墩果醇-龙胆三糖苷也显示了升高cAMP浓度的作用,进一步提示齐墩果醇-龙胆三糖苷的类雌激素样作用.齐墩果醇-龙胆三糖苷对HepG2细胞增殖实验显示,30 μmol/L浓度时该化合物的雌激素样作用同17β-雌二醇一样有相似的促HepG2细胞增殖作用.     

拟斯卑尔脱山羊草基因的克隆与表达研究

Avenin—like基因是近年来发现的一类新基因。根据小麦avenin-like基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对拟斯卑尔脱山羊草（Aegilops spehoides,ss）的基因组DNA进行avenin-like基因扩增、克隆、序列测定和表达分析,发现了一个新型avenin—like基因。基因长855bp,编码284个氨基酸残基,分子量约为33kD。Souchern blot结果表明其属于多基因家族。RT—PCR证实了avenin-like基因在籽粒胚乳中特异性表达。其对应的氨基酸序列含有18个半胱氨酸残基,可以形成7对分子内二硫键。研究表明Avenin-like蛋白是一类新型的储藏蛋白。这为小麦加工品质的改良提供了理论依据和遗传资源。     

冬虫夏草不同发育时期蛋白质组iTRAQ质谱分析

本文选定冬虫夏草寄主昆虫幼虫（S1）、僵虫（S2）、子座初期（子座<1cm,S3）、子座早期（1cm<子座<3cm,S4）、成熟冬虫夏草（子座>7cm,S5）、商品冬虫夏草菌核（S6）、商品冬虫夏草子座（S7）及商品冬虫夏草（中期子座≈5cm,S8）8个样品,用定量蛋白质组学方法iTRAQ分析技术对冬虫夏草不同生长发育阶段的差异蛋白质组进行比较。共计获得9 924个不同肽段,鉴定到1 809个蛋白质,其中差异比值1.5倍以上,P<0.05蛋白个数506个,以商品冬虫夏草样本（S8）为参照,比较差异蛋白数量,寄主幼虫（S1）、僵虫（S2）、子座初期（S3）、子座早期（S4）、成熟冬虫夏草（S5）、商品冬虫夏草菌核（S6）及商品冬虫夏草子座（S7）阶段差异蛋白数分别为104、102、34、35、49、46和136个,说明昆虫幼虫、僵虫及子座与商品冬虫夏草样品差异显著。对鉴定蛋白质数据进行了主成分分析（principal component analysis,PCA）,在第三主成分（component 3）上的显著差异,表明成熟冬虫夏草（S5）的蛋白组成不同于商品虫草,说明成熟虫草品质下降。层次聚类（hierarchy clustering）分析结果表明所有样品分为两支,僵虫（S2）和商品冬虫夏草菌核（S6）与寄主幼虫（S1）聚在了一个分支上,而不同发育阶段样品（S3、S4和S5）与商品虫草子座（S7）聚在一个分支上,说明商品冬虫夏草菌核中还残留有寄主昆虫蛋白。冬虫夏草菌核部位的蛋白到子座部位的蛋白呈现由寄主幼虫蛋白向真菌蛋白发育过渡的聚类关系。子集嵌套关系同步子实体生长发育阶段蛋白组成变化随时间的程序性变化的规律。K-均值（K-means）聚类和Gene Ontology（GO）注释分析,提供了冬虫夏草成熟过程中能量代谢通路的变化趋势以及与真菌侵染昆虫和有性生殖相关蛋白质信息。研究结果为理解寄主昆虫对冬虫夏草功能的潜在贡献、子实体形成和发育的分子机制提供借鉴,并为蛋白质组作为冬虫夏草质量标准提供了科学参考。     

六倍体大小麦tritordeum花药组织特异性启动子的鉴定与分离

启动子是基因表达调控的重要顺式元件,也是基因工程表达载体的一个重要元件。一个无启动子的带有UidA基因的质粒pPLGUS通过基因枪转化进tritordeum材料中,对转基因材料的多种不同组织进行了X-gluc显色来检测不同组织中的GUS活性,有一个株系的花药组织特异性启动子已被证明成功捕获,并通过PCR方法将其分离。提取叶片的总DNA作模板,上游使用水稻花药启动子分离的引物P1,以UidA基因的部分序列为下游引物P2,PCR扩增UidA基因的上游旁侧序列。已经获得一条长667 bp的目的片断,含有部分UidA基因的序列和一段UidA基因的上游旁侧序列,该序列中具有植物启动子的一些必备元件,初步断定它是一段花药组织特异性启动子序列。     

一种简单高效的食用真菌总RNA提取方法

以金针菇为材料,建立了一种适合于富含RNase、多酚、多糖和糖蛋白的食用真菌RNA的提取方法,此方法在高浓度变性剂存在的条件下2次用苯酚-氯仿-异戊醇进行抽提去除DNA、蛋白质,并用异丙醇和乙酸钠选择性沉淀RNA、去除多糖,得到完整、均一的RNA样品。 Abstract:With Flammulina velutipes material,an improved method was developed for extracting total RNA from domestic fungus that are rich in RNase,polyphenols,polymeric carbohydrates and proteoglycans..Phenol-chloroform-isoamyl alcohol were used twice to clear DNA and protein under higher concentration of denaturing solution and isopentanol,sodium acetate were used to precipitate RNA selectively.Pure and intact RNA can be effectively prepared by this method.     

火菇素的分离纯化及其分子量的测定

火菇素是一种从金针菇Flammulina Velutipes中分离纯化出来的具有抗癌活性的简单蛋白。用SDS-PAGE系统,通过与已知分子量的标准参照蛋白比较,确定火菇素的分子量为24kDa．这一结果与其氨基酸组成分析相比偏大,进一步通过电喷雾离子化质谱法(ESIMS)分析,精确测定火菇素的分子量为19891．13Da。推测由于火菇素蛋白与SDS的非正常结合是造成蛋白质在SDS-PAGE中迁移变慢导致偏差的原因。