基于pH值敏感的荧光染料分析腺病毒诱导T淋巴细胞胞内体膜的裂解北大核心CSCD

【目的】探索基于pH值敏感的荧光染料分析腺病毒裂解T淋巴细胞胞内体膜的实验方法。【方法】本文以Jurkat细胞(T淋巴瘤细胞)为靶细胞,将pH值敏感的荧光染料pHrodo dextran与5型腺病毒(Ad5)共同孵育Jurkat细胞,对pHrodo dextran孵育的浓度与时间进行了优化,利用激光共聚焦显微镜分析胞内相对平均荧光强度百分比随时间的变化情况,反映Ad5诱导胞内体膜裂解情况。【结果】研究结果表明,在pHrodo dextran终浓度为80μg/m L,孵育时间为10 min条件下,在病毒感染后的30 min,相对平均荧光强度百分比出现显著下降;利用巴佛洛酶素A1抑制胞内体膜质子泵活性后,相对平均荧光强度百分比出现轻微下降。【结论】建立了基于pHrodo dextran分析腺病毒诱导T细胞胞内体膜裂解的新方法。     

重组逆转录病毒载体pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究

目的:构建双表达逆转录病毒载体pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1,包装成病毒颗粒后有效地感染PBMC.方法:以实验室保存含TCRVB7.1基因和TCRα12-2基因的质粒为模板,分别扩增得到两个基因,亚克隆入栽体pLXPXSN,得到重组质粒pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1.重组体质粒经酶切鉴定后,将鉴定好的阳性重组质粒用脂质体介导转染PA317细胞,包装成完整的病毒后测定滴度,感染PBMC,用流式细胞仪和提取基因组DNA检测目的蛋白的表达.最后病毒感染PBMC,用流式细胞仪检测目的蛋白的表达.然后用流式细胞术细胞凋亡率,MTT比色法检测pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染的PBMC对肝癌细胞BEL-7402和HEPG2的杀伤作用.结果:从重组病毒基因组中扩增出目的基因TCRα12-2和TCRVβ7.1,流式细胞仪检测表明目的基因可以在PBMC中有效的表达.pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-V137.1感染PBMC组对肿瘤细胞的杀伤率明显高于PBMC组和空载体感染组.结论:TCRα12-2和TCRVB7.1能够整合进宿主PBMC的基因组中,并能得到有效地表达.pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染PBMC后可提高其对肝癌细胞的杀伤活性.     

用DNA多态性分析福建,江西和浙江3省畲族的亲缘关系

为分析福建,江西和浙江３省畲族之间的关系,用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对上述３省的３代均为畲族的无关个体的载脂蛋白Ｂ基因和Ｄ１７Ｓ３０位点的数目可变的串联重复（ＶＮＴＲ）序列进行研究。结果为：６个共有的ａｐｏＢ ＶＮＴＲ和５个共有的Ｄ１７Ｓ３０ ＶＮＴＲ等位基因在３省畲族中的分布相同,为进一步在基因水下上研究它们的亲缘关系奠定了基础。本文报道的检测ＤＮＡ多态性的方法在研究民族起源,变迁和民族识别以及各     

人TNFAIP1基因克隆及其在常见细胞系中的表达

人类TNFAIP1蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α诱导的蛋白,有实验证明TNFAIP1 蛋白可能参与DNA复制、合成、细胞凋亡以及人类的各种疾病等重要过程,但对其确切功能和作用机制研究不多。本文克隆人的TNFAIP1基因到GST原核表达载体,并在原核细胞进行表达纯化。利用实时定量PCR的方法检测其在几种常用的细胞系的表达情况,发现在COS7以及NIH3T3细胞系中高表达,而在HeLa、HepG2、SW480、PanC1、MCF7等癌细胞系中低表达。由此推测TNFAIP1可能在癌症的发生中起到一定的作用。     

KCTD10基因的表达、抗体制备及其在常见细胞系中的表达

人类KCTD10(channe l tetram erisation dom a in-conta in ing 10)基因属于PD IP1(polym erase de lta-interactingprote in 1)基因家族。最近的研究表明,小鼠KCTD10能同时和PCNA以及DNA聚合酶δ相互作用,并受肿瘤坏死因子α诱导;可能在诸如DNA修复、DNA复制、细胞周期调控以及人类的多种疾病中发挥重要作用,但对其确切功能和作用机制研究不多。克隆人的KCTD10基因到pQE-N3原核表达载体,在原核细胞株BL21(DE3)中表达并获得融合表达产物。获得的融合蛋白产物通过免疫新西兰大白兔获得兔抗KCTD10多克隆抗体。采用western印迹技术,用该抗体检测KCTD10基因的原核和真核表达产物,证明该抗体有较好的针对KCTD10蛋白的专一性,可用于对KCTD10的结构与功能研究。同时利用实时定量PCR的方法检测该基因在几种常见细胞系的表达情况,发现在N IH3T3细胞系中表达较高,而在HeLa、HepG2、SW 480、PanC1、MCF7等癌细胞系中表达较低,由此推测KCTD10可能在癌症的发生中起到一定的作用。