抗菌肽CP10A在大肠杆菌中的融合表达

CP10A是一种由抗菌肽Indolicine经过序列改造,且对多数革兰氏阳性病源细菌具有较强抗菌活性的多肽序列。本研究根据已报道的CP10A氨基酸序列,兼顾大肠杆菌密码子偏好性,设计CP10A的核苷酸序列,利用PCR技术合成相应的DNA序列,后克隆构建重组表达载体pET32a（+）-CP10A,转入大肠杆菌AD494菌株。经IPTG诱导表达和15% SDS-PAGE电泳检测后发现产物以包涵体形式存在,且融合表达量占总蛋白的50%。在变性条件下经Ni-NTA亲合柱层析及复性,最终获得了较高纯度的可溶性重组蛋白。本研究首次实现了CP10A抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达,为进一步研究其生物学活性及应用奠定了一定的基础,同时也为研究抗菌肽表达提供了一种方法。     

土壤抑真菌作用与细菌群落结构的关系

自然清洁土壤所具有的抑真菌作用,是健康土壤的一种自然属性,也是土壤质量的重要指标之一,对控制农作物土传病原真菌的爆发具有积极的生态学意义.本试验以中国科学院沈阳生态实验站近10年未受农药和肥料影响的撂荒地土壤作为自然清洁土壤样品,通过高温（对照、100 ℃、110 ℃、121 ℃）处理得到具有不同抑真菌作用的土壤模型,采用PCR DGGE(变性梯度凝胶电泳)方法对上述土壤样品的细菌群落结构进行分析.结果表明：土壤抑真菌作用与土壤细菌群落结构紧密相关;对照清洁土壤抑真菌作用最强,处理后土壤细菌群落结构偏离自然清洁土壤愈远,土壤抑真菌能力愈差;DGGE特异性条带切胶测序结果表明,Sphingomonas asaccharolytica、Nitrospira sp.、Hyphomicrobiaceae sp.、Bacillus megaterium和Micrococcus sp.可能与土壤抑真菌作用密切相关.     

靶向HER2的CAR-T细胞构建与抗肿瘤活性的体外分析

CAR-T细胞疗法通过靶向识别肿瘤细胞表面抗原,特异性杀伤肿瘤细胞,近年来已经成为肿瘤免疫疗法的研究热点。通过基因工程方法构建靶向人类表皮生长因子受体2(HER2)的CAR慢病毒表达质粒,以磷酸钙沉淀辅助多质粒共转染HEK293T细胞包装,制备CAR慢病毒颗粒lenti-car,感染人外周血单核细胞获得HER2靶向的CAR-T细胞,并分析其对HER2阳性和阴性肿瘤细胞的特异性抑制效果。研究结果表明,构建的CAR-T细胞可被HER-2阳性的肿瘤细胞特异性激活,分泌大量炎症性细胞因子IFN-γ和IL-2。在同样效靶比等处理条件下,构建的HER2靶向CAR-T细胞对HER2阳性的人卵巢癌细胞株SK-OV-3的生长抑制率为(58.47±1.72)%,显著高于对照组(P0.05);而对HER2阴性的人慢性髓原白血病细胞株K562的生长抑制率为(11.74±2.37)%,与对照组无显著差异(P0.05)。进一步,在K562细胞中转染人HER2表达载体使其成为HER2阳性,则HER2靶向CAR-T细胞对其的生长抑制率上升为(30.41±7.59)%,较HER2阴性K562具有明显差异(P0.05)。研究结果表明,构建的HER2靶向的第二代CAR-T细胞可选择性地抑制高表达HER2蛋白的肿瘤细胞的生长,暗示了其对HER2阳性肿瘤进行细胞免疫治疗的临床应用前景。     

固氮树种在混交林中的作用研究Ⅱ.固氮树木叶部N、P养分动态特征

研究了23种固氮与非固氮树种叶部N、P含量的季节变化、输出率以及叶片衰老过程中N、P的输出过程.结果表明,供试树种叶部N、P含量均存在着明显的季节变化,平均变化率为21～23%,最大变化率出现在叶片衰老期.在衰老期内不同树种表现出不同的N、P动态特征.固氮树种表现出低输出率,落叶中N含量是非固氮树种的1.6～3.7倍.固氮树种生长季叶部N含量在2.5%左右.     

基模势对luxAB标记的快生型大豆根瘤菌在土壤中存活的影响

经接合转移将luxAB基因插入快生型大豆根瘤菌 (Rhizobiumfredii)染色体 ,取可高效结瘤固氮的R .frediilux3菌株用于分子生态学研究 .在不同基模势下 ,研究了lux3在土壤中的存活 ,基模势为 - 30和 - 750kPa时 ,lux3在灭菌土中的生存能力明显 (P<0 .0 5)高于未灭菌土 ,当基模势为 - 1 50 0kPa时 ,土壤是否灭菌对lux3的存活影响没有差异 .不同基模势对lux3活性影响显著 ,在 - 1 50 0kPa的未灭菌土中 ,随着饥饿时间延长 ,可恢复活性的细菌数量显著下降 .同时比较了测定微生物活性的 3种方法 (即生物发光、脱氢酶活性和微生物呼吸 ) ,发光值变化与活细胞密度变化一致 ,PLf值 (即潜在发光 ,Potentialluminescence)反映了可恢复活性的饥饿种群密度 .luxAB基因是一种比较简便而实用的标记     

固N树种在混交林中的作用研究I.沙棘混交林内根瘤固N与林木生长

研究了沙棘作为下木在混交林中的作用。结果表明,沙棘有明显的供Ｎ效应。林冠下生长７ａ的沙棘,年平均固Ｎ量达５４ｋｇ·ｈｍ＾－２。土壤含Ｎ量比杨树或柳树纯林提高２０￣２２％,主林木高生长比纯林提高１８￣１９．４％。     

自然环境中噬菌体与其宿主间的相互作用

自然环境中噬菌体与其宿主间的相互作用靳素英张成刚崔明学（中国科学院沈阳应用生态研究所,１１００１５）ＰｈａｇｅＨｏｓｔＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｉｎＮａｔｕｒａｌＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ．ＪｉｎＳｕｙｉｎｇ,ＺｈａｎｇＣｈｅｎｇｇａｎｇ,ＣｕｉＭｉｎ...     

4种五针松过氧化物酶同工酶表型分析

1　材料供试的 4种五针松均采自黑龙江省森林植物园。红松引自伊春林区 ,高 3 8ｍ ,偃松引自大兴安岭 ,高 1 5ｍ ,西伯利亚红松是由伊春林科所从新疆阿尔泰引进的种子 ,经播种后长出的实生苗引进而来 ,高 0 5ｍ ,兴安松采自由大兴安岭图强林业局采下的枝条嫁接于樟子松上而成活了嫁接苗 ,高 0 8ｍ ,生长状况良好。2　实验原理及方法2 1　实验原理 :本实验采用聚丙烯酰胺不连续体系盘状电泳 (垂直管电泳 )分离过氧化物同工酶 ,是由单体丙烯酰胺Ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ和交联剂甲叉双丙烯酰胺Ｂｉｓａｃｒｙｌａｍｉｄｅ在催化剂的作用…     

RAPD技术在微生物生物多样鉴定中的应用

RAPD（随机放大多态性DNA）是1种新的DNA分子标记技术。与RFLp、AFLP及ARDRA相比,RAPD具有可在一次试验中同时观察到大量的DNA多态性片段,方法更具简单、敏感、花费少等优点。阐述了RAPD的原理方法,及目前在微生物分类鉴定研究中的应用,并分析了RAPD技术在共生固氮放线菌Frankia分类鉴定及系统发育研究中的应用前景。