PCR—ELISA检测HBV DNA的研究

目的：建立一种敏感、特异的乙型肝炎病毒（HBV）DNA检测方法。方法：应用PCR扩增技术和核酸杂交技术结合酶促显色技术（即PCR－ELISA技术）来检测血清中的HBV DNA。结果：应用PCR－ELISA技术能够检出许多PCR琼脂张胶电泳所检测不到的HBV DNA,大大地提高了检出率,而且,特异性强。结论：PCR－ELISA方法灵敏度高,行异性强,检测结果数据化,不受主观因素的影响。     

姬松茸在两种培养基上生长期间九种胞外酶活性变化

栽培在棉籽壳和麦草培养基上的姬松茸具有完整的胞外纤维素酶系;胞外CMC酶、FP酶、HC酶和蛋白酶活性呈周期性变化,其活性高峰对应于子实体的成熟期：胞外淀粉酶、漆酶和过氧化物酶在菌丝生长阶段活性较高,以后逐渐下降;胞外界胶酶和β－葡萄糖苷酶活性在整个栽培过程中变化不大;棉籽壳和麦草两种培养基中的九种胞外酶的活性变化趋势差异不大。     

钛对大型蚤（Daphnia magna）的毒性研究

钛离子对大型蚤的毒性研究表明,其24、48、96h的半数抑制浓度EC50为6．2,5．1,0．26mg/L。半数致死浓度LC50为6．3,6．0,0,1．5mg/L。长期实验表明,0．0001mg/L浓度是对大型蚤的生长和繁殖均有影响的最低浓度。本研究为制订饮用水水质卫生标准提供水生生物毒理学方面的资料。     

AcMNPVie—1基因诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡

苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)感染可诱导斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)离体细胞Sl zsu 1发生典型的细胞凋亡。通过细胞松弛素 (cytochalasinD)和NH4Cl的抑制实验 ,分别排除病毒粒子结合细胞受体蛋白 ,和病毒在核内体运输过程启动细胞凋亡信号发生的可能性。RT PCR实验证实 ,病毒基因组进入了细胞核 ,极早期基因ie 1开始了转录 ;而DNA聚合酶抑制剂 (芽栖菌素 )的存在对病毒诱导的细胞凋亡程度与进程均没有明显的影响。这说明细胞凋亡的信号是先于病毒晚期复制事件启动的。单独转染AcMNPV极早期基因ie 1可诱导斜纹夜蛾离体细胞系Sl zsu 1细胞发生部分凋亡 ,转染 2 4h后出现凋亡小体 ,4 8h达到高峰。提取转染细胞的总DNA电泳 ,可检测到典型的DNA梯形条带 (DNAladder)。另外 ,AcMNPV的ie 1基因温度敏感突变株tsB82 1在非受纳温度感染细胞时 ,细胞不发生凋亡。这些结果暗示 ,在AcMNPV感染诱导的Sl zsu 1细胞凋亡中 ,ie 1基因是一个凋亡信号的直接或间接诱导因子。     

杉木属的一个化石种－亚洲杉木

亚洲杉木[Cunninghamia asiatica(Krassil.)comb.nov.]是一个广布于我国东北,华北及苏联西伯利亚地区的早白垩世化石种,该种以往定为Elatocladus manchurica或Elatides asiatica。通过详细对比,发现它与现生杉木属植物无论枝叶形态,还是表皮结构均很相似,从而确立了该种的自然分类位置,同时,也把杉木属的深化史自晚白垩世至少追溯到早白垩世。     

低氧提高肿瘤细胞反义VEGF165基因表达

为了探讨反义VEGF1 65基因对食管癌的抑制作用 ,并初步探讨利用肿瘤低氧微环境改善基因治疗的效果 ,采用PCR技术和DNA重组技术构建了含低氧反应元件的真核表达载体 ,并用此载体构建了含荧光素酶报告基因和反义VEGF1 65基因的重组载体。用脂质体将重组载体导入食管癌细胞 ,体外用化学发光光度计测定低氧对报告基因表达的调节和ELISA法间接测定低氧对反义VEGF基因表达的调节作用。体内利用裸鼠皮下移植实验研究低氧对反义VEGF1 65基因抑瘤作用的影响。体外实验表明 ,用带低氧反应元件的重组真核表达载体转染食管癌细胞 ,在低氧培养下可以使报告基因的表达提高 3 780 % ,并可以显著提高反义VEGF1 65基因的表达 ,体内用带低氧反应元件的载体将反义VEGF1 65基因导入食管癌细胞中 ,其抑瘤效果显著优于不含该元件的载体 ,抑瘤率分别为 71 .7%和 5 6 .1 %。反义VEGF1 65基因能显著抑制食管癌的生长 ;利用肿瘤低氧可以实现治疗基因的自主调节 ,改善基因治疗的效果     

多点接种方法计数土壤细胞生理类群的研究

多点接点计数方法是根据细菌分解固体培养基上不同的有机化合物的能力确定为不同的生理类群,由有机化合物的降解点数和根据MPN方法进行计数,对不同的耕作方法进行了测定表明,秸秆覆盖免肾够明显提高土壤中分解淀粉,木聚糖,纤维素,果胶,几丁质,卵磷质,脂类和蛋白质类群的细菌数量。     

含hup基因的质粒在催娩克氏杆菌中的稳定性及吸氢酶的表达

以质料pKT230为载体,亚克隆大豆根瘤菌吸氢酶结构基因（hupSL）片段,构建成嵌合质粒pKH1。将质粒分配系统基因（parDE）片段和吸氢酶结构粒pRKBH。质粒pKH1、pRKBH和载体pRK415经转化和三亲本杂交,得到DH5α/pHR11、DH5α/pRKBH、pRK415、NG1390/pHR11、NG1390/pRKBH和NG1390/pKH1(NGH982)等接合子。稳定性分析发现,质粒pKH1在催娩克氏杆菌中传80代后仍有92％以上的菌株含此质粒,说明质粒pKH1有较高的稳定性。吸氢酶活性分析表明,H2诱导接合子NGH999和NGH982吸氢酶活性高表达,同时固氮效率和固氮酶活性也高。低碳源浓度更有利于接合子吸氢酶活性的表达和固氮效率的提高。接合子NGH982具有耐铵的基因,因此其固氮酶活性的表达有部分去铵阻遏的作用。     

利用两种不相容质粒在大肠杆菌中共表达DFF45和DFF40

DNA断裂因子（DNA fragmentation factor,DFF）是细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白质之一,它由分子量为45kD和40kD的两个亚基构成,分别称为DFF45和DFF40。利用RT－PCR技术从人宫颈癌细胞系HeLa的总RNA中扩增了DFF45和DFF40的cDNA,分别克隆到到卡那霉素抗性表达载体pET-28a( )中,构建了pET28a-DFF45和pET28a-DFF40。用它们单独转化大肠杆菌BL21（DE3）后,经IPTG诱导都可获得高效表达。表达的重组蛋白质各自约占菌体总蛋白质的56％和22％。再将DFF45的cDNA克隆到氨苄青霉素抗性表达载体pET-21a( )中,得到了pET21a-DFF45。利用二者的不同抗性,将pET28a-DFF40和pET21a-DFF45共同转化大肠杆菌BL21（DE3）,工程菌经IPTG诱导后实现了DFF45和DFF40的共表达,表达产物各约占菌体总蛋白质的30％和17％。为了研究这两种不相容质粒在细菌中共存的稳定性,我们将共转化子在同时含有卡那霉素和氨苄青霉素的液体培养基中连续培养14h,发现此时仍有75％以上的细菌可同时耐受两种抗生素,即同时含有pET28a-DFF45和pET28a-DFF40,说明利用两个具有不同抗性的不相容载体进行蛋白质共表达的方法是可行的。